基于外泌体miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用

【目的】基于循环外泌体(Exos)miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用。【方法】(1)建立5/6肾切除尿毒症小鼠模型,采用益肾解毒法中药复方(YSJD,8.0 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃治疗3周后,通过超声系统评估小鼠心脏功能,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察心脏组织病理学形态,Masson三相染色法评估心脏纤维化含量,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)活性,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测心脏组织中LC3蛋白表达情况,透射电镜(TEM)观察心肌超微结构。(2)分离小鼠外周血Exos,与小鼠原代心肌细胞共培养,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫荧光染色法检测心肌细胞LC3表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测Exos中miR-30表达,采用Western Blot法检测心肌细胞中自噬相关蛋白表达。【结果】益肾解毒法治疗可明显防止尿毒症心肌病(UCM)诱导的心脏功能障碍、心脏形态变化和重塑,降低血清CK-MB和LDH水平,抑制UCM小鼠心肌细胞凋亡,抑制自噬囊泡形成和自噬标记蛋白LC3的表达。从各组外周血中分离Exos,并通过RT-qPCR证实UCM+YSJD组Exos中miR-30表达较UCM组显著下调(P<0.001)。当在UCM+YSJD-Exos与原代心肌细胞共培养系统中向心肌细胞转染miR-30时,心肌细胞的凋亡率、自噬体形成和自噬相关蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。【结论】益肾解毒法可通过干预外周血Exos中miR-30转运抑制UCM诱导的心肌细胞凋亡、自噬,发挥心脏保护作用。

黄杞总黄酮对慢性心力衰竭大鼠AT1/CARP信号通路及心肌自噬的影响

目的探讨黄杞总黄酮对慢性心力衰竭(心衰)大鼠血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)/心肌锚定重复蛋白(CARP)信号通路及心肌自噬的影响。方法SD大鼠随机分成5组:对照组、模型组、缬沙坦组(50 mg/kg)、黄杞总黄酮低、高剂量组(250、500 mg/kg),每组16只。模型组、缬沙坦组、黄杞总黄酮低、高剂量组大鼠建立慢性心衰模型,建模成功后,缬沙坦组、黄杞总黄酮低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组及模型组给予等体积的生理盐水,持续4 w。试验结束后,超声检查测定心功能指标,细胞自噬检测试剂盒检测心肌自噬指数,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌病理结构变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹测定心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,模型组大鼠左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显升高,左心室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)明显降低(P<0.05)。与模型组比较,缬沙坦组、黄杞总黄酮低剂量组、黄杞总黄酮高剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显降低,FS、EF明显升高(P<0.05);且黄杞总黄酮高剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显低于黄杞总黄酮低剂量组,FS、EF明显高于黄杞总黄酮低剂量组(P<0.05)。与缬沙坦组比较,黄杞总黄酮低剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显升高,FS、EF明显降低(P<0.05)。对照组心肌结构正常;模型组心肌横纹紊乱,心肌细胞明显肿胀,出现空泡情况,肌纤维溶解明显,有明显炎症细胞浸润;缬沙坦组及黄杞总黄酮高剂量组心肌炎症细胞浸润减少,心肌纤维排列整齐;黄杞总黄酮低剂量组心肌仍有明显病理变化。结论黄杞总黄酮对慢性心衰大鼠心功能及心脏病理改变有明显保护作用,能明显降低心肌细胞自噬水平;其机制可能与黄杞总黄酮可抑制心肌AT1、CARP mRNA和蛋白水平,进而抑制AT1/CARP信号通路的激活有关。

心肌自噬在肾去神经联合氨氯地平治疗高血压大鼠心肌肥厚中的作用

目的探讨心肌自噬在肾去神经联合氨氯地平治疗大鼠高血压心肌肥厚的作用。方法以12周雄性自发性高血压大鼠构建高血压心肌肥厚动物模型为研究对象,分为假手术组(A组)、双侧肾动脉去神经+空白药物对照组(B组)、双侧肾动脉去神经+氨氯地平组(C组)。联合治疗后4周,RT-PCR法检测心肌组织肥厚基因的表达,测定左室质量指数(LVMI),行组织病理切片HE染色和Western blot测定自噬活性标志蛋白的表达。结果心脏组织的病理切片和肥厚基因表达变化显示,与A组比较,B组及C组的心脏体积减小、室壁变薄,肥厚相关基因心房钠尿肽(ANP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达下降;同时,LVMI显示同样的结果。自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和多功能泛素化结合折叠蛋白(SQSTM1/p62)的表达结果显示,与A组比较,B组及C组的心肌自噬标志蛋白LC3(LC3Ⅱ/Ⅰ)表达下调,p62表达上调,且C组更明显。结论心肌自噬活性的改变在肾脏去神经联用氨氯地平治疗高血压相关性心肌肥厚中起到重要的作用。

盐酸纳美芬对心肌缺血再灌注大鼠缺氧诱导因子1α/B细胞淋巴瘤-2/E1B-19kDa相互作用蛋白3通路及心肌自噬的影响

目的探讨盐酸纳美芬对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠缺氧诱导因子1α(Hif-1α)/B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)通路及心肌自噬的影响。方法2020年3—4月采用结扎冠状动脉左前降支法复制心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型,将造模成功的大鼠使用随机数字表法分成模型组、盐酸纳美芬低、中、高(10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg)剂量组和氯喹组(阳性对照,0.02 g/kg),每组15只,另取15只假手术组大鼠作为对照。模型组和假手术组给予等剂量生理盐水,其余各组给予相对应剂量药物,每天1次,连续3 d。给药结束24 h后,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化;二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测心肌组织中活性氧水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及通路蛋白Hif-1α、BNIP3表达水平。结果假手术组大鼠心肌组织结构完整,无明显病理变化。与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织结构异常、心肌细胞坏死、心肌损伤严重,心肌梗死面积、活性氧水平、Beclin1、LC3-Ⅱ、Hif-1α、BNIP3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显著升高(P<0.05),其中Hif-1α和BNIP3蛋白表达水平分别为0.92±0.11和0.96±0.12,显著高于假手术组的0.10±0.02和0.08±0.01;与模型组相比,盐酸纳美芬低、中、高剂量组大鼠心肌组织病理损伤依次减轻,心肌梗死面积、活性氧水平、Beclin1、LC3-Ⅱ、Hif-1α、BNIP3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值依次降低(P<0.05),其中盐酸纳美芬高剂量组Hif-1α和BNIP3蛋白表达水平分别为0.17±0.03和0.12±0.03,显著低于盐酸纳美芬中剂量组的0.29±0.04和0.31±0.05,盐酸纳美芬中剂量组显著低于盐酸纳美芬低剂量的0.58±0.07和0.52±0.08。盐酸纳美芬高剂量组与氯喹组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸纳美芬可能通过抑制Hif-1α/BNIP3通路,减弱MIRI大鼠心肌自噬,缓解心肌损伤。

预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌自噬的影响

目的观察预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌自噬的影响。方法 30只SD大鼠随机分为缺血再灌注组,预处理+缺血再灌注组。缺血再灌注组在左冠状动脉左前降支近心端中上1/3处结扎阻断血流,60 min后解除阻断,再灌注60 min。预处理+缺血再灌注组结扎阻断冠状动脉左前降支5 min,然后恢复灌流5 min,重复3次。再阻断60 min,复灌60 min。测量心肌细胞自噬发生情况,以及心功能指标,包括左心室收缩压(LVSP)、舒张压(LVDP)和最大压力变化速率(±LVdp/dtmax)值。分段收集流出液以计算冠脉灌流量(CPF)和测定蛋白质漏出量。结果与缺血再灌注组比较,预处理可以明显激活心肌细胞自噬的发生。预处理能显著减少LVSP、LVDP及蛋白漏出量;使±LVdp/dtmax显著增加(均<0.05)。自噬的激活与心肌损伤呈负相关。结论预处理能够明显激活心肌细胞自噬,改善缺血再灌注损伤大鼠的心功能。

Beclin 1调控心肌自噬与心血管疾病关系的研究进展

Beclin 1基因是调控自噬的关键蛋白之一,与相关蛋白结合形成复合体诱导自噬,并调控自噬水平。在应激刺激下,Beclin 1可以调节心肌细胞自噬活性,对心肌细胞起到保护或者损害的作用,与多种心血管疾病有着密切关系。通过探讨Beclin 1调控心肌自噬对心血管疾病的影响,以期为研究心血管疾病发生机制和临床治疗提供新的思路和理论依据。

中药影响缺血-再灌注损伤心肌自噬的研究进展

心肌自噬是目前最受关注的心肌保护机制,自噬不足或过度与心肌缺血损伤有密切的联系。中药在血运重建术后发挥积极的作用,对心肌细胞自噬水平的调控可能是其作用机制之一。

miR-27b对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬、心肌能量代谢及PPARα信号的作用机制

目的 研究miR-27b对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬、心肌能量代谢及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α信号的作用机制。方法 清洁级SD健康雄性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,由于建模时意外死亡3只,因此健康组10只、模型组9只,miR-27b-NC组9只、miR-27b组9只,miR-27b-NC组及miR-27b组于腹主动脉分别注射5μl(20 nmol/L)拮抗剂阴性对照、5μl(20 nmol/L)miR-27b拮抗剂,其余大鼠注射等体积生理盐水,1次/d,共4 w。苏木素-伊红(HE)染色及Masson染色观察大鼠心肌组织病理形态及纤维化,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-27b、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)mRNA、PPARα mRNA指标水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌细胞能量代谢指标,TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫印迹检测微管相关轻链蛋白(LC)3Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin)-1、组织蛋白酶(Cath)D表达。结果 HE染色:健康组心肌细胞形态正常,结构清晰;模型组与miR-27b-NC组心肌细胞水肿并有大量炎性细胞浸润,此外还产生大量的成纤维细胞;miR-27b组与模型组相比,成纤维细胞增生及炎性细胞浸润减少。Masson染色:胶原纤维呈现蓝紫色,心肌细胞及肌纤维呈现红色。健康组心肌组织结构正常,心腔附近有少量胶原纤维;模型组与miR-27b-NC组胶原纤维显著增加;与模型组相比,miR-27b组胶原纤维增生有所减少。上述结果均提示建模成功。与健康组相比,模型组与miR-27b-NC组N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、游离脂肪酸(FFA)、心肌细胞凋亡、LC3Ⅱ、Beclin-1、CathD、miR-27b水平显著升高,LC3Ⅰ、AMPK、PPARα水平显著降低(P<0.05),在经过抑制miR-27b后,NT-proBNP、FFA、心肌细胞凋亡、LC3Ⅱ、Beclin-1、CathD、miR-27b水平显著降低,LC3Ⅰ、AMPK、PPARα水平显著升高(P<0.05)。结论 沉默miR-27b表达后可抑制心力衰竭大鼠心肌细胞自噬,减少心肌细胞凋亡,同时通过调控AMPK/PPARα通路改善心肌能量代谢水平,从而起到心保护的作用。

稳心颗粒调节心肌梗死大鼠心肌缝隙连接蛋白43表达及自噬的研究

目的:探讨稳心颗粒对心肌梗死大鼠心肌缝隙连接蛋白43表达及自噬水平变化的影响。方法:通过心脏左冠状动脉前降支结扎法构建心肌梗死大鼠模型后,随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组及美托洛尔组,连续给药4周,另设正常组作为空白对照,每组8只大鼠。超声心动图检测各组大鼠左室短轴收缩末期前壁厚度(LVAWs)、左室舒张末期前壁厚度(LVAWd)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期内径(LVIDd)以及左室射血分数(LVEF);心脏生理电刺激检测各组大鼠的心室颤动阈值;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏组织病理学改变;采用免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹法检测心肌缝隙连接蛋白43(CX43)、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、酵母自噬相关基因6哺乳动物同源体(Beclin1)、P62蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠LVAWs、LVAWd、LVEF降低,LVIDs、LVIDd升高(P<0.01);与模型组比较,稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组LVAWs、LVAWd、LVEF升高,LVIDs、LVIDd降低(P<0.05或P<0.01)。模型组大鼠心室颤动阈值明显低于正常组(P<0.01);与模型组比较,稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组心室颤动阈值有所增高(P<0.01)。与正常组比较,模型组LC3、Becli1蛋白平均光密度值明显增加,CX43蛋白平均光密度明显降低(P<0.01);与模型组比较,稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组自噬正相关蛋白LC3、Beclin1平均光密度值均明显降低,CX43蛋白平均光密度值增加(P<0.01)。与正常组比较,模型组自噬正相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达增加,自噬负相关蛋白P62表达以及CX43蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,稳心颗粒低剂量组Beclin1蛋白表达明显减少,P62蛋白表达明显升高(P<0.05),稳心颗粒高剂量组及美托洛尔组LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显降低,P62及CX43蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:稳心颗粒可改善心肌梗死大鼠的心功能并预防心律失常,其机制与调节心脏自噬水平和缝隙连接蛋白43表达有关。

温阳益气颗粒通过激活mTOR抑制OGD诱导的H9c2心肌细胞自噬

背景:温阳益气颗粒是一种包含四种中药成分的配方,在中国广泛用于治疗心力衰竭(heart failure,HF),其可调节细胞自噬,但作用机制尚不明确。方法:H9c2细胞经温阳益气颗粒处理24h后进行氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)。通过qPCR分析评估自噬标记物Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA表达水平。通过蛋白质免疫印迹分析测定Beclin-1、LC3、p62和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的蛋白表达水平。采用透射电子显微镜观察温阳益气颗粒对自噬体形成的影响。结果:温阳益气颗粒可显著抑制OGD诱导的心肌细胞自噬,其特征是抑制Beclin-1 mRNA的表达水平并增加LC3 mRNA的表达水平。此外,温阳益气颗粒可降低Beclin-1蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I的比例,增加p62蛋白表达水平。温阳益气颗粒对LC3-II/LC3-I比值、p62蛋白表达水平及自噬体形成的影响与mTOR活性相关。结论:温阳益气颗粒通过抑制过度自噬在缺氧缺血性应激中发挥保护作用,该作用部分原因在于其对mTOR的影响。这些数据为温阳益气颗粒在心肌细胞自噬过程中的心肌保护作用提供了新的见解。

右美托咪定预处理通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对心肌缺血再灌注大鼠心脏损伤和心肌组织自噬的影响

目的:探讨右美托咪定预处理通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路对心肌缺血再灌注大鼠心脏损伤和心肌组织自噬的影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组(n=20)、心肌缺血再灌注组(n=20)和右美托咪定预处理组(n=20),建立心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组仅接受假手术而不造成心肌缺血,右美托咪定预处理组输注右美托咪定。比较各组大鼠心脏损伤、心肌细胞自噬、PI3K/Akt/mTOR表达、氧化应激及炎症指标。结果:与假手术组比较,右美托咪定预处理组、心肌缺血再灌注组血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平依次升高,且右美托咪定预处理组心肌梗死面积百分比明显小于心肌缺血再灌注组(均P<0.05)。与假手术组比较,右美托咪定预处理组、心肌缺血再灌注组心肌组织中LC3、Beclin、P62蛋白表达依次升高(均P<0.05)。与假手术组比较,右美托咪定预处理组、心肌缺血再灌注组心肌组织中PI3K/Akt/mTOR表达依次下降(均P<0.05)。与假手术组比较,右美托咪定预处理组、心肌缺血再灌注组血清髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)水平依次升高,血清超氧化物歧化酶(SOD)水平依次下降(均P<0.05)。与假手术组比较,右美托咪定预处理组、心肌缺血再灌注组血清白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平依次升高(均P<0.05)。结论:右美托咪定预处理能够保护心肌缺血再灌注损伤大鼠心脏功能,可抑制炎症因子表达、减轻氧化应激反应,其作用机制可能与下调心肌细胞自噬蛋白表达,从而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

单酯型生物碱类对CHF大鼠心肌细胞的保护作用及机制

目的 分析单酯型生物碱类对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及对PI3K/AKT通路的影响。方法 将100只大鼠随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组20只。C、D、E组在慢性心力衰竭模型建模成功后给予附子浓缩液灌胃,剂量分别为2.79、5.57、11.14 g/kg。灌胃6周后检测各组大鼠病理组织学变化、超声心动图指标、心肌细胞凋亡率,心肌组织促凋亡蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶8(Caspase-8)表达量,心肌细胞自噬蛋白、BNP、AI、PO_(2)、IL-6、TNF-α水平及PI3K/AKT通路蛋白表达量。结果 B~E组超声心动图指标室间隔收缩末期厚度(IVSs)、室间隔舒张末期厚度(IVSd)、左心室后壁收缩末期厚度(LVPWs)、左心室后壁舒张末期厚度(LVPWd)。心肌细胞凋亡率,Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平,心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ,BNP及AI水平均高于A组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量均低于A组(P<0.05);C~E组IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率及Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平、自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平低于B组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量高于B组(P<0.05);随着附子浓缩液剂量的增加,IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率、Bax、Caspase-8表达,IL-6、TNF-α水平、心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平降低,LVEF及Bcl-2表达、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量升高(P<0.05)。结论 单酯型生物碱类通过上调p-PI3K、p-AKT蛋白表达量,激活PI3K/AKT通路,缓解心力衰竭恶性进展,且呈剂量依赖性。

电针、艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬相关蛋白LC 3、Beclin 1表达的影响

目的:观察针灸预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌自噬相关蛋白LC 3、Beclin 1表达的影响,探讨针灸预处理在MIRI过程中对自噬调控的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缺血预适应(IP)组、电针组和艾灸组,每组8只。冠状动脉结扎法建立大鼠MIRI模型。电针组及艾灸组造模前分别电针或艾灸"内关"穴,每次20min,每日1次,连续7d。HE染色法及透射电镜检测左心室心肌病理形态学的变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况及凋亡指数,Western blot法检测LC 3、Beclin 1蛋白在心肌细胞中的表达。结果:模型组心肌损伤较严重,心肌细胞排列紊乱、边界模糊,炎性细胞浸润,部分横纹坏死、溶解,线粒体结构紊乱、模糊,空泡化严重,并出现大量双层膜结构的自噬小体;IP组、电针组及艾灸组心肌损伤较模型组轻微,肌纤维大多正常,肌丝间局灶性水肿,线粒体丰富伴空泡增多,偶见自噬体。与假手术组比较,模型组凋亡指数、LC 3Ⅱ及Beclin 1蛋白表达水平、LC 3Ⅱ/LC 3Ⅰ均明显升高(P<0.01),LC 3Ⅰ蛋白表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,IP组、电针组及艾灸组凋亡指数、LC 3Ⅱ及Beclin 1蛋白表达水平、LC 3Ⅱ/LC 3Ⅰ均明显降低(P<0.01),LC 3Ⅰ蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);电针组凋亡指数、LC 3Ⅱ及Beclin 1蛋白表达水平、LC 3Ⅱ/LC 3Ⅰ明显低于IP组及艾灸组(P<0.05),而LC 3Ⅰ蛋白表达水平则显著高于IP组及艾灸组(P<0.01)。结论:IP、电针或艾灸"内关"穴预处理对MIRI大鼠均具有保护作用,可对MIRI大鼠心肌的自噬产生调节作用,尤以电针最佳,而这种适度调节MIRI过程中的自噬水平可能与下调LC 3Ⅱ、Beclin 1蛋白的表达有关。

慢性缺氧诱导小鼠心肌细胞自噬及其机制

目的观察慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响,并初步探讨AMPKα2敲除对该过程的作用。方法采用野生型与AMPKα2^(-/-)雄性C57小鼠均分为野生型常氧组、野生型缺氧组、敲除型常氧组和敲除型缺氧组(n=10)。常氧组于空气环境中饲养,缺氧组于10%O_2的低氧舱内饲养。4周后野生型小鼠取静脉血标本,测红细胞及血红蛋白水平;取心脏标本用Western blot检测AMPKα2及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与p62的变化,用免疫荧光染色法检测心肌冰冻切片LC3变化。敲除型小鼠取心脏标本用Western blot检测心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化。结果 1野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组红细胞与血红蛋白水平显著增加[红细胞:(9.33±0.15)×10^(12)/L vs(12.78±0.66)×10^(12)/L,P<0.05;血红蛋白:(135±3)g/L vs(192±4)g/L,P<0.05];2野生型小鼠中,与常氧组相比,缺氧组心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加[(0.49±0.29)vs(1.70±0.24),P<0.05];p62表达明显降低[(1.32±0.57)vs(0.71±0.19),P<0.05];免疫荧光结果显示,缺氧组心肌组织LC3荧光较常氧组增多;3在常氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2^(-/-)小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,但差异无统计学意义[(0.78±0.08)vs(0.73±0.34),P>0.05];在缺氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2^(-/-)小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低[(2.08±0.72)vs(1.01±0.21),P<0.05];4野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组AMPKα2蛋白表达水平并无显著增加[(1.14±0.13)vs(1.25±0.19),P>0.05]。结论慢性缺氧可能通过AMPKα2依赖的途径增强心肌细胞自噬,该自噬可能是心肌细胞对慢性缺氧的适应机制。

心肌细胞自噬在慢性心力衰竭中的作用及中医药的干预研究

自噬是将细胞内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体内进行消化降解的过程,在慢性心力衰竭的发生、发展中起到重要的调控作用,是治疗心衰的新靶点,中医药对心脏功能的保护作用可以通过干预自噬途径实现。本文重点讨论心肌细胞自噬在心衰中的作用,自噬的调控机制,中医药干预心肌自噬的机制和应用前景,探索中医药治疗慢性心力衰竭的新思路。

曲美他嗪对心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡、自噬以及心功能的保护作用

目的构建心肌梗死大鼠模型,观察曲美他嗪对模型大鼠心肌细胞凋亡、自噬以及心功能的保护作用。方法60只SPF级成年雄性SD大鼠使用随机数字表法分为假手术组、对照组和曲美他嗪组。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,并计算凋亡指数(PI),Western Blot检测心肌细胞自噬蛋白。彩超测定左心室收缩末期内径(LVESD)、短轴缩短分数(FS)和射血分数(EF)。结果假手术组、对照组、曲美他嗪组心肌细胞PI值分别为(0.76±0.23)%、(21.52±6.57)%和(12.38±2.15)%,心肌自噬蛋白LC3Ⅱ相对灰度值分别为0.17±0.03、0.46±0.12、0.68±0.15,3组间PI值和LC3Ⅱ相对灰度值比较差异有统计学意义(P<0.01)。术后第28天,假手术组LVESD、FS和EF与术前比较差异无统计学意义(P>0.05),对照组和曲美他嗪组LVESD较术前升高(P<0.05),FS和EF较术前减低(P<0.05)。曲美他嗪组LVESD术后第28天低于对照组(P<0.05),曲美他嗪组FS和EF术后第28天高于对照组(P<0.05)。结论曲美他嗪有助于心肌梗死大鼠心功能恢复,减低心肌细胞凋亡和增加心肌自噬。

单次运动对缺氧诱发心肌自噬反应的影响

为研究运动后不同休息时间对间歇性低氧诱发心肌自噬反应的影响，本研究将8周龄Sprague-Dawley雄性大鼠，随机分成控制组（control group，CON）、运动组（exercise group，EXE）、间歇性低氧曝露组（intermittent hypoxia group，IH）、空气曝露组（room air group，RA）、运动后1h（post-exercise 1 h，PE1h）和3h（PE3h）合并RA或IH组。大鼠给予单次持续8hIH（氧气浓度下降至2％～6％约1～2s／75s），单次运动方式以速度24m／min、坡度2％的强度在动物跑台上跑步60min。动物牺牲后，检测左心室心肌糖原、自噬反应相关蛋白及腺粒体功能相关mRNA表达量。研究发现，运动后心肌细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ，LC3-Ⅱ）／LC3-Ⅰ表达量、糖原含量下降（p〈0．05），p62表达量没有变化（p〉0.05）。IH对心肌p62表达量没有影响（p〉0.05），与RA比较，IH的LC3-Ⅱ／LC3-Ⅰ、核内呼吸因子1和2（nuclear respiratory factor 1 and 2，NRF-1和NRF-2）mRNA表达量上升（p〈0．05）。与IH比较，PE1h＋RA、PE3h＋RA及PE3h＋IH各组LC3-Ⅱ／LC3-Ⅰ、NRF-1和NRF-2mRNA表达量均下降（p〈0．05），虽然PE1h＋IH的NRF-1和NRF-2 mRNA表达量下降（p〉0．05），但LC3-Ⅱ／LC3-Ⅰ表达量没有改变（p〉0．05）。本研究说明，IH曝露前3h进行运动，可避免IH造成心肌LC3-Ⅱ／LC3-Ⅰ表达量上升的现象。

心肌线粒体自噬相关蛋白BNIP3在运动预适应晚期保护效应中的变化

目的:检测和观察心肌线粒体自噬相关蛋白BNIP3在运动预适应(EP)晚期保护效应中的表达变化,探讨EP晚期保护效应和心肌线粒体自噬的关系。方法:SD大鼠随机分为对照组(C组)、力竭运动组(EE组)、晚期运动预适应组(LEP组)、晚期运动预适应+力竭运动组(LEP+EE组)和wortmannin+晚期运动预适应+力竭运动组(W+LEP+EE组)。在EP动物模型的基础上,用力竭运动致大鼠急性心肌损伤,用血浆c Tn I含量和HBFP染色综合评价心肌损伤和保护的程度,用免疫荧光双标法检测大鼠心肌线粒体BNIP3和TOM20的共定位程度,用免疫印迹法检测大鼠心肌组织线粒体BNIP3和LC3的表达变化。结果:与C组相比,EE组血浆c Tn I和MOD值显著升高,BNIP3转位线粒体程度、BNIP3水平和LC3II/I水平显著升高;LEP组BNIP3转位线粒体程度和BNIP3水平显著升高,血浆c Tn I、MOD值和LC3II/I水平无显著性差异。与EE组相比,LEP+EE组血浆c Tn I和MOD值显著降低,BNIP3转位线粒体程度、BNIP3水平和LC3II/I水平显著降低。与LEP+EE组相比,W+LEP+EE组血浆c Tn I和MOD值显著升高,BNIP3转位线粒体程度和BNIP3水平显著升高,LC3II/I水平无显著性差异。结论:EP可促使线粒体自噬相关蛋白BNIP3表达升高,在EP晚期心肌保护效应中,BNIP3诱导的线粒体自噬参与了EP对运动性心肌损伤的保护作用。

心肌梗死后心肌细胞自噬的变化及其机制的研究进展

心肌梗死(myocardial infarction,MI)是一类在国内外发病率及死亡率均较高的疾病,其与常规的心肌损伤鉴别要点在于是否存在心肌细胞的缺血坏死[1],由于心肌细胞是一种长寿命细胞,再生能力相对较弱,使得保证MI后心肌细胞的活力和寿命变得尤为重要。细胞自噬(autophagy)是由溶酶体介导的除细胞凋亡(apoptosis)之外另一种对细胞及生物体自身至关重要的细胞程序性死亡。它几乎存在于各种细胞中,是一种高度保守的机制,对维持机体内环境的稳定和细胞的存活起着非常重要的作用。