心肌锚定重复序列蛋白基因心脏特异敲除小鼠模型构建与鉴定

目的构建心肌锚定重复序列蛋白(CARP)基因心脏特异敲除小鼠模型,为研究CARP基因与心脏疾病的关系奠定基础。方法构建CARP基因条件打靶载体pL253-CARP-LoxP电转入小鼠胚胎干细胞(ES)细胞,G418和GANC药物筛选阳性细胞克隆,Southern blot确定CARP基因条件打靶载体转染成功。胚胎注射ES细胞入小鼠囊胚,获得嵌合体小鼠与心脏特异启动子Cre小鼠(α-MHC-Cre)杂交。结果得到6只嵌合体小鼠,与α-MHC-Cre小鼠杂交获得CARP基因心脏特异敲除小鼠(CARP-KO),半定量RT-PCR和Western blot确定CARP基因在CARP-KO小鼠心脏缺失。该小鼠早期胚胎发育和个体生长、心脏发育正常,但心肌肥厚标志基因β-MHC和ANF显著升高(分别为2.25±0.04和1.45±0.03)(P<0.05)。结论成功构建CARP基因心脏特异敲除小鼠,CARP基因缺失对小鼠胚胎发育、个体生长和心脏发育没有显著影响。

新型心肌锚定器械设计

左心室室壁瘤是心肌梗死后的常见并发症,传统内、外科治疗疗效欠佳或对医生操作技能和患者的身体素质要求较高。随着微创医疗器械的发展,心肌锚定器械作为一种微创伤手术治疗室壁瘤、重建左心室逐渐成为可能。该研究介绍了现有的心肌锚定器械及其存在的问题,从临床需求的角度出发,提出了新型心肌锚定的设计思路,实现了精确测力并简化手术的目标。

心肌锚定重复序列蛋白CARP的研究进展

CARP是新发现的具有锚定重复序列,并在哺乳类动物中呈心肌特异性表达的蛋白,它在肌肉发育过程中对转录调控、肌纤维组装和拉伸信号传递等方面发挥重要的作用。本文综述了CARP基因与蛋白质结构、CARP的表达模式及其表达调控、参与调节CARP的细胞内信号转导通路、CARP在肌肉发育中的作用,以及MARP家族其他成员。

氯沙坦钾通过抑制血清心肌锚定重复蛋白过表达逆转高血压心肌肥厚的临床研究

目的探讨氯沙坦钾是否通过抑制血清心肌锚定重复蛋白(CARP)的过表达来逆转高血压心肌肥厚,为高血压心肌肥厚的预防及治疗提供依据。方法于2015年9月至2016年3月选取在天津医科大学第二医院心内科门诊或急诊就诊的原发性高血压左室肥厚患者254例,随机分为氯沙坦钾组和对照组,每组各127例;对照组患者口服硝苯地平30mg,1次/d;氯沙坦钾组患者口服氯沙坦钾50 mg,1次/d;于治疗前、治疗3、6和12个月时测量CARP水平和室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)及左室舒张末内径(LVDd),并计算左心室质量指数(LVMI)。采用SPSS 20.0统计软件进行t检验、χ~2检验、Pearson相关性分析和重复测量资料方差分析。结果对照组及氯沙坦钾组患者血清CARP水平与IVST、LVPWT、LVDd、LVMI均呈正相关(P<0.05)。氯沙坦钾组与对照组治疗12个月后,IVST、LVPWT、LVDd及LVMI均有所下降,且氯沙坦钾组CARP水平在整个治疗期间呈明显下降趋势(P<0.05)。氯沙坦钾口服剂量为100 mg患者的平均动脉压低于口服剂量为50 mg的患者和对照组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高血压患者血清CARP水平能反映心肌肥厚状况,氯沙坦钾可通过抑制CARP的过表达逆转高血压心肌肥厚。

miR-218对血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大的影响

探讨miR-218对血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌细胞肥大的影响。方法:Ang II处理心肌细胞48h,qPCR检测心房利钠肽(ANF)、miR-218和心肌锚定重复蛋白(Ankrd1)的表达。分别用mimic miR-218和inhibitor miR-218转染原代心肌细胞24h,随后用Ang II处理48h,利用免疫荧光染色技术检测心肌细胞面积。利用双荧光素酶报告基因技术检测miR-218对Ankrd1 3’UTR的调控,Western Blot检测Ankrd1的表达。结果:Ang II处理引起心肌细胞中miR-218表达下调;与对照组相比,mimic miR-218显著抑制了Ang II诱导的心肌细胞肥大,而inhibitor miR-218促进了Ang II诱导的心肌细胞肥大。Ang II处理引起Ankrd1表达增加,miR-218能靶向抑制Ankrd1的表达。结论:miR-218能抑制Ang II诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与靶向抑制Ankrd1的表达相关。

CARP抗体制备及表达模式分析

目的:制备心肌锚定重复序列蛋白(CARP)的抗体并分析其表达模式。方法:通过生物信息学对其抗原性进行分析,通过RT-PCR从小鼠的心肌cDNA中扩增了N-端279bp的片段,并克隆到表达载体pET28b中,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化CARP蛋白,用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。利用制备的抗体,通过Western blot和免疫荧光的方法,分别检测了CARP在各组织和细胞中的表达模式。结果:制备了CARP抗体,进一步验证了CARP表达在蛋白水上呈心肌特异性,在大鼠心肌原代细胞中主要在细胞核中表达。结论:成功制备了CARP抗体,分析了CARP的表达模式,为进一步CARP的功能奠定了基础。

冠心病合并糖尿病患者血清CARP水平与冠脉病变关系的研究

目的:探讨冠心病合并糖尿病患者血清心肌锚定重复蛋白(CARP)水平和冠脉病变的关系。方法:选择住院并接受冠脉造影的患者147例,其中正常对照组(A组)33例,单纯冠心病组(B组)51例,冠心病合并糖尿病组(C组)63例,测定血清CARP、糖化血红蛋白(Hb A1c)水平,冠脉造影计算Gensini评分,探究CARP与它们的相关性。结果:冠心病合并糖尿病组血清CARP水平(24.39±8.31)较单纯冠心病组(14.31±7.77)及对照组(7.90±4.29)明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);单纯冠心病组(r=0.670,P<0.01)及冠心病合并糖尿病组(r=0.732,P<0.01)血清CARP水平与Gensini评分均呈正相关;冠心病合并糖尿病组血清CARP水平与HbA1c(r=0.590,P<0.05)呈正相关。结论:(1)血清CARP有望成为冠心病合并糖尿病患者冠脉病变严重程度的新型预测标志物。(2)冠心病合并糖尿病患者血清CARP水平与HbAlc呈正相关。

两株抗鸡CARP单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的:制备抗鸡CARP单克隆抗体(McAb)。方法:克隆并原核表达鸡CARPN端110个氨基酸,纯化CARP蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆;并利用ELISA、Western blot方法测定其效价和特异性。结果:获得2株能够稳定分泌抗鸡CARP的McAb杂交瘤细胞株,命名为4A8和4E6,亚型都属于IgG1,轻链为κ链;抗体腹水效价分别为3.2×104、1.28×105。Western blot检测到这两株抗体能够识别鸡CARP蛋白。结论:成功获得了2株能识别鸡CARP的杂交瘤及其分泌的特异性McAb。

锚蛋白重复结构域1的研究进展

锚蛋白重复结构域1(ANKRD1)也被称为心肌锚定重复序列蛋白(CARP),由ANKRD1编码,是一种应激反应蛋白,为细胞质中的重要组成部分,而且是细胞核转录的重要辅助因子。其在细胞的表达水平,定位甚至病理应激类型不同,可发挥不同的功能。CARP作为肌肉锚蛋白重复蛋白家族的一员,在各种心脏疾病中高表达,但其发挥作用的机制及对相关病理生理学仍不清楚。本文从ANKRD1的结构及其在心脏疾病中的作用进行阐述。