将心肌闰盘特染和H-E染色整合的心肌纤维块染改进法

在组织学实验教学中,心肌纤维是要求学生重点观察和必须掌握的实验内容之一.据笔者了解,对于心肌纤维的观察,大多数医学院校需要2种切片标本来完成：使用常规H-E染色切片标本观察心肌的一般光镜结构,同时再配备心肌特染切片标本来观察其特化结构——心肌闰盘.制作2种切片,既费时费力,又增加了耗材量;实验课上,2种染色方法显示结果的差异,一定程度上可能会干扰学生对心肌结构的观察和理解.为此,本实验应用薄层火棉胶包被技术将心肌纤维的2种染色方法进行改进整合,在1张切片上能够清晰完整地显示原来两种切片的内容,同时又增加了两者原来不具备的优点.笔者认为该改进整合后的方法是一种具有广泛推广价值的心组织学实验教学切片制作染色法.

心肌闰盘染色改良法

应用免疫组化与HE相结合的染色方法显示心肌闰盘,敏感性高、特异性强,同时能全面展示心肌的光镜结构特点,在实验教学中便于学生观察和识别。

益气活血方对心肌缺血大鼠心功能及心肌闰盘相关基因表达的影响

目的观察益气活血方对心肌梗死模型大鼠心功能及心肌闰盘相关基因表达的影响。方法 120只SD大鼠随机分为6组,假手术组、模型对照组、阳性对照组及益气活血方低、中、高剂量组,连续7次给药后,结扎冠状动脉复制急性心肌梗死模型,4h后经右颈总动脉行左心室插管,测定左心室压力峰值(LVP)等心功能指标;取心肌组织,PCR法检测闰盘桥粒斑蛋白、N-钙黏蛋白和心肌缝隙连接蛋白(Cx43蛋白)的mRNA表达。结果与模型对照组比较,益气活血方中、高剂量组LVP明显提高(p<0.05),高剂量组+LVdp/dt_(max)、-LVdp/dt_(max)明显升高(p<0.05)。与模型对照组比较,低剂量组桥粒斑蛋白、N-钙黏蛋白、Cx43 mRNA的表达水平改变不明显,中剂量组和高剂量组表达水平明显升高。结论益气活血方对急性心肌缺血大鼠心功能有明显的改善作用,其作用可能与升高心肌闰盘桥粒斑蛋白、N-钙黏蛋白、Cx43 mRNA的表达、改善心肌细胞间信息传递有关。

心肌闰盘快速染色在组织学实验教学中的应用探究

目的探究甲苯胺蓝快速染色在心肌闰盘组织学实验教学中的应用,以期提高学生的动手实践能力以及实验教学效果。方法取小鼠心肌组织制作心肌薄片,干燥后用甲苯胺蓝分别染色4 min、8 min,最后压片并镜下观察。结果与传统的HE染色相比,用甲苯胺蓝染色的心肌压片能更好的显示横纹和闰盘。结论甲苯胺蓝可用于心肌闰盘快速染色,实验方法简单,染色效果显著,实验教学效果好。

压力超负荷时心肌闰盘的改变

目的 研究压力超负荷时心肌闰盘的变化。方法 采用大鼠腹主动脉缩窄模型 ,在透射电镜下观察心肌闰盘的超微结构变化 ;免疫组化观察钙粘素 (pan cadherin) ,连接蛋白 43(connexin43,Cx43) ,桥粒蛋白 (desmoplakin)的表达。结果 术后 10周手术组心肌闰盘的粘着膜、桥粒、间隙连接结构模糊 ,连接间隙增宽 ;Pan cadherin ,Cx43,desmoplakin在心肌细胞表面呈无序分布。结论 压力超负荷时心肌闰盘的主要结构及其成分均发生了改变 ,这可能是左室重塑的病理基础之一。

电磁脉冲诱导大鼠心肌闰盘间隙开放及其机制

目的探讨电磁脉冲（EMP）诱导心肌闰盘（ID）的改变及其作用机制。方法用EMP模拟发生器，场强为50～400kV／m，脉冲次数200次，雌性SD大鼠30只，随机分为5组，每组6只。照后12h时采用硝酸镧示踪法和透射电子显微镜观察心肌ID结构的改变，用基因芯片检测受照心肌差异基因表达谱。结果照后12h，辐照组的ID间隙随着EMP场强的增加而逐渐增宽，ID间隙中沉积的镧颗粒随着EMP场强的增加而逐渐增多。200kV／m组与对照组相比差异表达基因有108个，其中表达上调基因有synaptorin、VGF、HSP70等51条，下调基因有NAD、FGF、Tff3等57条。结论在场强为50～400kV／mEMP范围内辐照可诱导心肌ID间隙开放，且随场强的增加而增宽，以400kV／m时最为显著，受照心肌有108个基因差异表达。

闰盘相关基因的研究进展

心肌纤维呈短柱状,多数有分支,相互连接成网状。相邻的两条心肌纤维的连接处称闰盘,是心肌细胞间的机电耦合,在心肌的兴奋传导中发挥重要作用。关于不同基因在心肌闰盘机电传导中的作用和影响,很多学者都做出了相应的研究,如发现ZO-1、Cx43和Cx45等及其之间可能存在的相互作用,在不同病理情况下各种连接蛋白的变化情况等。该文就ZO-1、Cx43的功能、联系及其在临床上的应用等相关研究进展予以综述。

急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43脱磷酸化的免疫组化研究

目的观察急性心肌缺血所致心性猝死,特别是冠心病猝死者与对照组,左室心肌闰盘上缝隙连接蛋白Cx43磷酸化状态的差异,探讨其在急性心肌缺血心律失常的发生,及其诊断心肌缺血早期病变中的意义。方法应用免疫组化SP技术,检测无明显心肌梗死的冠心病猝死组(组Ⅰ)、其他急性心肌缺血所致心性猝死组(组Ⅱ、Ⅲ)和两对照组(组Ⅳ、Ⅴ,严重颅脑损伤或病理性颅内出血所致急性死亡),共45名死者的左心室局部心肌组织(存档蜡块)中Cx43的磷酸化状态。另选用抗心肌闰盘上粘合连接的主要蛋白Pan-Cadherin的抗体和生物素化菜豆凝集素(PHA-E+L/Bio),分别检测心肌细胞间机械耦联与心肌细胞膜的完整性(后者采用亲和组化技术),以便在实验中与Cx43免疫组化染色结果作比较分析。结果⑴在实验组各例标本的心肌闰盘上磷酸化Cx43明显缺染,少数呈点状弥散于胞浆;但在两对照组中,可见磷酸化Cx43聚集于心肌闰盘处。⑵Pan-Cadherin在各例标本中均表现为心肌闰盘处的强阳性着色。⑶各组标本其心肌细胞膜均显示良好,细胞轮廓清晰可辨。结论急性心肌缺血所致心性猝死者,左室心肌细胞间机械耦联和心肌细胞膜的完整性与对照组相比,无明显改变,但闰盘处主司电耦联的缝隙连接蛋白Cx43却发生了明显的脱磷酸化。这提示,后者可能是急性心肌缺血所?

深圳市南山区外来工青壮年猝死尸检病理分析

目的在对深圳市南山区青壮年外来工猝死流行病学特征进行调查的基础上,进一步对心源性猝死病例心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)检测,观察其在心肌的分布特征,探讨其分布变化与猝死的关联性。方法筛选尸检案例30例,分为冠心病心肌梗死组(5例)、心脏传导系统病变组(5例)、肥厚型心肌病组(6例)及对照组(14例)。采用免疫组织化学染色和图像分析技术对不同组别Cx43阳性单位进行定量检测,分析其阳性表达在各组间的差异,所得数据行统计学分析。结果冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组共占猝死患者的53.3%,这3组患者Cx43染色在心肌闰盘处明显减弱或缺失,胞质内散在或心肌边缘处可见少量着色;对照组未见明显变化。结论冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组占猝死较高比例,且这3组患者Cx43分布发生了变化,推测是猝死性心律失常的结构基础。