心脏α肌动蛋白1基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响

目的探讨心脏α肌动蛋白1（ACTC1）基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响。 方法培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2；在大鼠胚胎心肌细胞H9C2中转染ACTC1-小干扰RNA（siRNA），分别于转染后24 h、48 h、72 h收集细胞，提取纯化RNA，采用实时荧光定量PCR法（qPCR）检测ACTC1基因表达水平；采用脱氧核苷酸原位末端标记法检测转染ACTC1-siRNA后ACTC1基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响；应用Western blot法分析凋亡相关基因蛋白细胞色素C（Cyto-C）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9及Bax/Bcl-2的表达。 结果qPCR检测转染ACTC1-siRNA后24 h、48 h、72 h ACTC1 mRNA表达水平，与转染阴性对照siRNA组比较，ACTC1基因的mRNA表达水平均有下调趋势（0.80比1.00、0.20比1.00、0.25比1.00），转染后48 h、72 h组下降明显，48 h组最显著，差异有统计学意义（t＝4.245，P〈0.05）；与转染阴性对照siRNA组凋亡率（20%）比较，转染ACTC1-siRNA组凋亡率（80%）显著增加，差异有统计学意义（P〈0.05）；转染ACTC1-siRNA组Caspase-3、Caspase-9、Cyto-C及Bax/Bcl-2表达增高，与转染阴性对照siRNA组比较（0.91±0.12比0.59±0.01，0.48±0.09比0.24±0.03，0.92±0.03比0.45±0.01，2.25±0.26比1.16±0.12），差异均有统计学意义（t＝2.821、7.336、2.420、0.798，均P〈0.05）；2组Caspase-8表达水平比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。 结论ACTC1基因表达下调可能主要通过内源性线粒体信号转导途径，诱导大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡。

茶树肌动蛋白基因(CsActin1)全长cDNA克隆与生物信息学分析

以茶树(Camellia sinensis)萌动芽为材料,根据茶树萌动芽芽抑制消减杂交文库中分离得到的肌动蛋白(actin)基因的5'-片段设计引物,利用3'-RACE技术克隆了其cDNA全长序列,该基因cDNA全长1 470 bp,命名为CsActin1(GenBank登录号HQ235647)。序列分析表明,CsActin1开放阅读框长1 134 bp,编码377个氨基酸,5'非编码区100 bp,3'非编码区236 bp。推测的蛋白质分子量为41.70 kD,等电点约为5.31,具有肌动蛋白家族的特征信号序列(YVGDEAQs.KRG和WIAKaEYDE)和肌动蛋白相关蛋白的特征信号序列(LLTEApLNPkaNR)。CsActin1与GenBank中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性在80%以上,氨基酸序列相似性在95%以上。与其它植物肌动蛋白的进化树分析结果表明,茶树肌动蛋白与杨树的两个肌动蛋白间的亲缘关系最为密切。并对推导的蛋白结构进行了分析。

牛α辅肌动蛋白(α-Actinin)1基因遗传变异与产犊数性状的相关性

为了探讨辅肌动蛋白1(α-actinin1)基因对母牛产犊数的影响,以鲁西单胎牛,鲁西双胎牛,南阳牛,晋南牛,荷斯坦牛,三河牛和延边牛为研究对象,以α-actinin1为影响产犊数的候选基因,分别扩增418bp和505bp2个片段,采用直接测序,RFLP-RsaⅠ和RFLP-ApaⅠ方法检测α-actinin1基因的多态性,并将其与产犊数性状进行了关联分析.在内含子15第227nt处的碱基发生G→A突变,和内含子10第3124nt处发生A→G突变,使其产生酶切多态.对2个酶切多态位点进行基因型分型,χ2检验表明:在G227A位点,除了鲁西单胎牛外,其他群体都已达到Hardy-Weinberg平衡;在A3124G位点,除了鲁西双胎牛外,其余群体都已经达到Hardy-Weinberg平衡.SAS9.0的最小二乘拟和一般线性模型分析结果表明:A3124G位点的AG基因型的产犊数的最小二乘均数极显著(P<0.01)高于基因型AA;而单倍型组合G-G的产犊数的最小二乘均数显著高(P<0.01)于其它3种单倍型组合.α-actinin1基因有可能作为产犊数性状的候选分子的遗传标记.

反义α肌动蛋白基因腺病毒载体对TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察大鼠血管平滑肌α肌动蛋白基因反义腺病毒载体(pAdanti-α-SMA)转染对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响。方法pAdanti-α-SMA载体构建并鉴定,转染肾小管上皮细胞(TEC)后免疫荧光染色和Western blot检测α-SMA水平。实验分为5组,A组:正常肾小管上皮细胞(TEC,对照组);B组:TEC+2μlpAdanti-α-SMA;C组:TEC+1μg天然TGF-β1;D组:TEC+1μg天然TGF-β1+2μlpA-danti-α-SMA;E组:TEC+1μg天然TGF-β1+10μlpAdanti-α-SMA。结果成功构建pAdanti-α-SMA,pAdanti-α-SMA转染TEC后抑制了TGF-β1诱导的TEC的α-SMA水平并呈剂量依赖性。结论pAdanti-α-SMA可有效地抑制肾小管上皮细胞的肌成纤维细胞转分化。

延伸因子-1α-A和β-肌动蛋白启动子在青鳉转基因胚胎中的表达(简报)

转基因技术是二十世纪八十年代初发展起来的一项生物领域高新技术.近年来,外源基因经显微注射导人哺乳类、两栖类、昆虫类以及鱼类的受精卵或胚胎,从而使人们对在整个动物的系统发育期间外源基因表达的研究更加深入.

IGF-1基因转染促进胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的表达

目的观察胰岛素样生长因子-T(IGF-1)基因转染对胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白(myoglobulin)、肌动蛋白(actin)及心肌特异性肌钙蛋白-T(Troponin-T)表达的影响。方法将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中,采用免疫组织化学方法对心肌细胞内上述4种蛋白的表达进行检测。利用HPIAS-2000图像分析系统测定4种蛋白在各组中表达的平均吸光度值和平均阳性面积率。结果IGF-1基因转染后的心肌细胞内上述4种蛋白的表达明显高于未转染的对照组(P<0.05)。结论IGF-1基因转染的心肌细胞较未转染的心肌细胞合成IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的能力增强,为IGF-1基因治疗心肌梗死提供了实验依据。

亚洲黑熊(Ursus thibetanus)α-肌动蛋白ACTA1基因的克隆及序列分析

为了解亚洲黑熊(Ursus thibetanus)的α-肌动蛋白ACTA1基因的结构特征和其编码蛋白功能,试验采用PCR技术从亚洲黑熊肌肉组织的总DNA和RNA中扩增α-肌动蛋白ACTA1基因,并对其基因表达和序列进行克隆、测序。采用ORF finder软件进行DNA序列ORF的查找和氨基酸序列的推定;采用Gen scan对结构基因序列进行分析;通过DNAMAN Version 6.0软件对基因编码序列和氨基酸序列进行比较;采用MEGA 7.0软件进行亲缘性比较;利用ExPASy软件预测分析了蛋白质功能位点和生化特性。结果表明:亚洲黑熊ACTA1基因的ORF为1 134 bp,编码377个氨基酸;ACTA1蛋白等电点为5.24,分子质量为42 ku,具有1个N-糖基化位点、10个N-肉豆蔻酰化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、2个酪氨酸激酶磷酸化位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,以及1个依赖cAMP和cGMP蛋白激酶磷酸化位点。亚洲黑熊和北极熊之间的ACTA1基因编码序列的同源性最高,达到86.1%。ACTA1蛋白相对保守且具有较高亲水性及较多的螺旋结构,并具有跨膜螺旋和多核苷酸的结合位点。说明ACTA1基因高度保守,ACTA1蛋白具有多种宏观及微观生物学功能,并参与了信号转导过程,在亚洲黑熊生长发育、生物调控及修复中起重要作用。

孕鼠叶酸缺乏对子代心脏叶酸结合蛋白1基因及WNT信号转导途径的影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏(FD)对子代心脏发育过程中叶酸结合蛋白1(Folbp1)基因表达及WNT信号转导途径的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.51、7.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR方法检测Folbp1基因及WNT信号转导途径中Wnt和-βcatenin基因mRNA表达。结果Folbp1、Wnt及-βcatenin基因mRNA在孕13.51、7.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论FD影响Folbp1、WNT及-βcatenin基因表达,可能引起叶酸受体功能低下和WNT信号转导途径障碍,从而可能导致心脏发育中形态异常,造成心脏功能缺陷。

心脏移植后外周血FK506结合蛋白1A基因的表达

利用荧光差异显示PCR(DD PCR)技术检测心脏移植后外周血白细胞基因的表达。结果显示 :RPL2 3基因移植后有波动 ,排斥发生时表达增强 ;FK5 0 6结合蛋白 1A基因移植后表达较弱 ,排斥发生时明显增强。提示 :外周血DD PCR检测白细胞基因的表达可能对研究排斥反应机制及进行移植排斥反应诊断具有一定的意义。

酪氨酸激酶受体、多药耐药基因1蛋白和增殖细胞核抗原在小鼠心脏不同部位的表达

目的研究小鼠心脏固有心房、心耳、左心室、右心室和室间隔酪氨酸激酶受体(c-Kit)、多药耐药基因1蛋白(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达有无差异,为小鼠心肌干细胞(CSCs)的分离、培养提供实验依据。方法取体重为38~40 g的6只BALB/C小鼠心脏,常规石蜡切片,采用免疫组织化学SABC法检测c-Kit、MDR1、PCNA的表达。结果小鼠的固有心房、心耳、左心室、右心室和室间隔的c-Kit表达由高低依次为左心室、心耳、室间隔、固有心房和右心室(P<0.01),MDR1表达的由高低依次为心耳、右心室、左心室、固有心房和室间隔(P<0.05);PCNA在固有心房、室间隔与左心室三者间、心耳与右心室之间的表达差异无统计学意义(P>0.05),固有心房、左心室和室间隔的表达较高、心耳与右心室较低(P<0.05)。结论小鼠心脏不同部位均存在c-Kit、MDR1和PCNA阳性细胞,c-Kit、MDR1、PCNA的表达均有差异,三者在不同部位的表达变化规律不明显。

Sp1特异性调控先天性心脏病相关基因钙调磷酸酶调节蛋白1基因亚型的转录

目的探索先天性心脏病相关基因钙调磷酸酶调节蛋白1基因(RCAN1)两个亚型(RCAN1-1和RCAN1-4)组织特异性表达的机制。方法通过生物信息学预测RCAN1-1和RCAN1-4各自启动子区的转录因子结合位点,分析比对并筛选出具有差异的位点,通过定点突变及荧光素酶报告基因系统检测筛选出的位点活性。将鉴定的转录因子的抑制剂与RCAN1表达载体作用,分为实验组(抑制剂+)和对照组(抑制剂-),通过实时荧光定量PCR检测RCAN1亚型mRNA的表达量。结果在RCAN1-1启动子区-138GCCCGCCGCC-129处检测出一个新的、未报道过的具有活性的转录因子Sp1结合位点。实验组RCAN1-1 mRNA表达量低于对照组(P<0.001),而两组RCAN1-4 mRNA的表达量无差异。结论Sp1特异性调控RCAN1-1的转录,增强其表达,而对RCAN1-4无影响,提示其可作为将来基因治疗或检测的一个潜在靶点。

先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因的RFLP分析

本研究利用人心室肌球蛋白轻链1cDNA探针对先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因进行了RFLP分析。从患有四种不同先天性心脏病的9个家系40名成员和13名无血缘关系患者的RFLP分析结果发现,有两个家系呈现限制酶切片段多态性,但这种限制性酶切片段多态性似与先天性心脏病的发生没有联系。

Meox1在心脏过表达引起转基因小鼠扩张性心肌病

目的建立心脏特异表达Meox1转基因小鼠,研究Meox1对心脏发育及心肌病的调节作用。方法利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立Meox1转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测Meox1在心脏组织中的表达,心脏超声检测转基因小鼠及野生小鼠的心脏结构和功能。结果在生理状态下,Meox1基因只在幼鼠心脏中表达,在病理状态下,Meox1基因在成年心肌病小鼠的心脏组织表达升高。通过显微注射,建立了两个Meox1基因在心脏组织的表达水平明显高于同龄对照小鼠的转基因小鼠品系。与野生型小鼠相比,两个Meox1转基因小鼠品系收缩期左室内径分别增加7.2%、12.8%(P<0.01,n=16),舒张期左室内径分别增加15.6%、24.2%(P<0.01,n=16),收缩期容积分别增加36.8%、65.7%(P<0.01,n=16),舒张期容积分别增加18.2%、33.8%(P<0.01,n=16)。射血分数分别减小6.6%、9.3%(P<0.05,n=16),短轴内径缩短率分别减小9.4%、12.3%(P<0.05,n=16)。结论Meox1在心肌病心脏中表达,其在心脏高表达引起心脏左室内径增加,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数及短轴缩短率减少等扩张性心肌病表型,是参与心肌病病理发生的基因之一。

mlc 1f基因C2159G多态性与中国北方汉族男性心脏结构和有氧运动能力的关联

目的:探讨肌球蛋白轻链1f(Myosin light chain,1 fast;MLC 1f)基因多态性与中国北方平原地区汉族男性有氧运动能力及心脏结构的关联性。方法:102名无训练史的健康男子测试最大摄氧量(VO2max),超声心动测量左心室结构。PCR-RFLP分析mlc 1f的C2159G多态性。单因素方差分析检验C2159G多态性与心肌结构、功能及有氧运动能力的关联。结果:C2159G基因型频率为:CC=0.09,CG=0.60,GG=0.31;C2159G多态性与VO2max无显著相关,只有CG基因型显著大于CC(P<0.05);C2159G与心脏结构和功能有关联,ESD、EDD、50W/SV、100W/SV指标CG、GG均显著(P<0.05)大于CC。结果提示C2159G基因多态性与心脏结构和功能相关。

降钙素基因相关肽及IP3信号通路介导1型糖尿病大鼠离体心脏缺血预适应保护作用

目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)及IP3信号通路在1型糖尿病大鼠离体心脏缺血预适应(IPC)中的作用,探讨1型糖尿病大鼠心脏IPC保护作用减弱的机制。方法将80只造模成功的SD大鼠随机分为1型糖尿病4周(D-4w)组(n=40)和8周(D-8w)组(n=40),并进一步将两组各自随机分为模型对照(D-Cont)组、1型糖尿病缺血再灌注(IR)组、IPC组、CGRP(IPC+CGRP)组和IP3抑制剂wortmanin(IPC+WMN)组5个亚组;另取16只大鼠作为正常对照(N-Cont)组。采用Langendorff方法建立离体心脏体外灌流模型,灌流期间外源性给予CGRP或wortmanin(WMN)。采用多道生物信号分析系统监测各组大鼠离体心脏左室功能,记录冠脉流量,ELISA法检测大鼠血清CGRP含量;生化法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)的活性;NBT染色法测量心肌梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。结果与N-Cont组大鼠相比,1型糖尿病大鼠血清CGRP含量随着时间进行性降低,且心脏基础左心功能降低,冠脉流出液中LDH和CK活性增加,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡指数增加(P<0.05);IR组与D-Cont组相比,左心功能更为降低,心肌损伤明显;IPC可改善D-4w IR心肌损伤情况,而对D-8w IR损伤无保护作用;IPC+CGRP组与IPC组相比,其左心功能明显改善;IPC+WMN组可阻断IPC对D-4w组大鼠心肌保护作用。结论CGRP及IP3信号通路参与1型糖尿病大鼠离体心脏的IPC保护作用。

脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗延长同种心脏移植物存活的研究

目的观察脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗对同种心脏移植物存活的影响。方法大量扩增pcDNA3-TGF-β1,制备脂质体-靶基因混合物及杂交探针,建立同种心脏移植模型,行脂质体载体pcD-NA3-TGF-β1基因转染,观察移植后5d心肌细胞中TGF-β1mRNA表达状况和移植心脏病理改变,观察受体存活情况。结果移植后5d脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗组心肌细胞中TGF-β1mRNA原位杂交阳性表达率为11%,移植心脏排斥反应病理改变明显延缓,同种心脏移植物存活明显延长,但未诱导出长期存活。结论脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗延长了同种心脏移植物的存活。

缺氧诱导因子1a基因转染心脏干细胞修复坏死心肌:应用前景

背景:心脏干细胞移植到心肌梗死区,可以有效改善心室重塑,提高心脏功能,但移植细胞在梗死区的缺氧微环境中存活率较低。研究表明缺氧诱导因子1α可在缺氧条件下稳定表达,同时增加心肌细胞的活性及存活能力。目的:分别从心脏干细胞的特点,缺氧诱导因子1α保护心脏的作用机制,载体的选择及移植途径等方面来具体阐述缺氧诱导因子1α基因转染心脏干细胞治疗心肌梗死的研究进展。方法:应用计算机检索CNKI和Pub Med数据库中2000年1月至2015年1月关于心脏干细胞和缺氧诱导因子1α的文章,在标题和摘要中以"心脏干细胞、缺氧诱导因子1α、移植途径"或"Cardiac stem cells,Hypoxia Inducible Factor 1(HIF-1a),gene delivery"为检索词进行检索,最终选择关于心脏干细胞、缺氧诱导因子1、基因载体的37篇文献进行综述。结果与结论:多项研究证实缺氧诱导因子1α可以在缺氧的环境中提高心脏干细胞的生存率。大量动物实验证实了心脏干细胞和缺氧诱导因子1α对梗死缺氧区域具有保护和修复作用。目前缺氧诱导因子1α基因转染心脏干细胞尚未有成功的报道,但并不影响研究者对相关领域的探索,相信在不久的未来,基因修饰心脏干细胞将会在临床得到广泛应用。

输注TGF-β1基因修饰的供体脾细胞诱导同种大鼠移植心脏耐受的实验研究

目的:研究TGF-β1修饰的供者脾细胞特异性输注对同种大鼠移植心脏耐受的诱导及效果。方法:建立同种大鼠异位心脏移植模型,用脂质体转染TGF-β1基因修饰供者脾细胞;观察TGF-β1修饰的脾细胞输注组,单纯脾细胞输注组和假处理组移植心脏存活天数和病理改变。结果:建立了稳定转染TGF-β1基因的脾细胞;TGF-β1修饰的脾细胞特异性输注可明显延长移植心脏存活时间(17.0±3.3)d,与单纯脾细胞输注组(7.0±1.1)d和假处理组(6.3±1.0)d比较,差异有显著性(P<0.05);而且可明显减轻同种移植心脏的病理损伤。结论:输注TGF-β1基因修饰的供体脾细胞可诱导同种大鼠移植心脏的耐受产生。

TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的相关研究

心脏圆锥动脉干畸形是婴幼儿期常见的青紫型先天性心脏病,主要由于胚胎期心脏发育异常所致。现综述TBX1基因在心脏发育过程中的作用以及可能的作用机制等国内外近几年的研究进展,旨在揭示TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的关联。

黄颡鱼胰岛素样生长因子结合蛋白1基因的克隆及表达分析

为研究黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)胰岛素样生长因子结合蛋白1基因(IGFBP1)的特征,阐明IGFBP1基因在不同性别黄颡鱼组织中的表达特征和IGFBP1蛋白在雌、雄黄颡鱼肌肉中的表达差异,克隆IGFBP1基因的c DNA全长,并进行实时荧光定量PCR检测和Western Blot分析。结果表明:黄颡鱼IGFBP1基因c DNA全长为1 259 bp,其开放阅读框长度为714 bp,编码237个氨基酸,3'端和5'端非翻译区分别为407 bp和138 bp;黄颡鱼IGFBP1基因核苷酸序列与鲇形目斑点叉尾鮰的相似度(89%)较高,与鲢、鲤、鲫、草鱼和团头鲂等的差异较大;肝脏是黄颡鱼IGFBP1基因m RNA表达最丰富的组织,IGFBP1基因在雄性个体心脏、肾脏、肌肉和肠组织中的表达量显著高于雌性的(P<0.05);IGFBP1蛋白在雌、雄黄颡鱼肌肉组织中都有表达,且在雄性个体中的表达量高于在雌性个体中的表达量。