氧化低密度脂蛋白诱导小鼠心脏内皮细胞炎性反应中Toll样受体2的表达

目的研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导小鼠心脏内皮细胞炎性反应中Toll样受体(TLR)2的表达。方法分离小鼠心脏内皮细胞,对照组给予DMEM培养,干预组分别给予不同浓度的ox-LDL(20,40μg/mL)作用细胞24 h,采用Western blot法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、TLR2的表达,利用ELISA方法检测炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8的变化。结果与对照组相比,ox-LDL干预组TLR2蛋白表达减少(P<0.01),ICAM-1蛋白表达增多(P<0.01),IL-6和IL-8表达明显增加(P<0.05);与低浓度组比较,高低浓度组ICAM-1、IL-6和IL-8表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ox-LDL可以诱导小鼠心脏内皮细胞的炎性反应,同时可能抑制了TLR2受体的表达。

中药保护心脏微血管内皮细胞在慢性冠脉综合征治疗中的研究进展

心脏微血管内皮细胞是心脏微血管系统的重要组成部分,在冠状动脉粥样硬化、急性心肌梗死后无复流及再灌注损伤、微血管性心绞痛、缺血性心律失常、心肌梗死后心力衰竭等慢性冠脉综合征(CCS)的发生发展的过程中具有重要作用。本研究基于当前证据对心脏微血管内皮细胞与CCS的发病机制以及中药复方及单体抑制心脏微血管内皮细胞损伤的相关研究机制进行综述,以期为临床提供参考。

水蛭素对缺氧诱导心脏微血管内皮细胞间质转分化的作用及机制研究

目的探讨通络药物水蛭素对缺氧诱导的人心脏微血管内皮细胞(HCMECs)间质转分化(EndMT)的作用及可能机制。方法取常规培养的HCMECs细胞,随机分为对照组、缺氧组、水蛭素组(包括0、20、40、80、100μg/ml 5个浓度)。对照组常规培养不做任何处理,缺氧组置入低氧培养箱72 h,水蛭素组预加入Hirudin工作液,4 h后置入低氧培养箱72 h。MTS比色法检测HCMECs增殖能力;倒置显微镜观察HCMECs形态;免疫荧光鉴定HCMECs间质转分化情况,Western-blot检测内皮间质转分化相关蛋白:包括内皮细胞标记血小板—内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin),间质细胞标记α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1),以及低氧诱导因子1α(HIF-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad同源物2/3(Smad2/3)、锌指转录因子(snail)等相关信号通路的蛋白表达。结果MTS法检测显示,缺氧显著抑制细胞活性(P<0.01),水蛭素在20~100μg/ml浓度范围内可提高细胞活性,且呈现浓度依赖性,当浓度为100μg/ml时细胞活性最强(P<0.01)。各组细胞培养72 h后,倒置显微镜下观察发现:对照组细胞呈铺路石样或鹅卵石状结构,缺氧组细胞由鹅卵石状结构变为分散的长梭形,接近成纤维细胞形态,水蛭素组长梭形细胞形态明显改善,细胞恢复鹅卵石样。Western-blot与免疫荧光结果显示:与对照组比较,缺氧组CD31、VE-cadherin蛋白水平降低(P<0.01),且vWF表达减少,α-SMA、FSP-1蛋白水平升高(P<0.01),且vimentin表达增强;与缺氧组比较,水蛭素明显增加CD31、VE-cadherin蛋白表达(P<0.01),并增强vWF表达,下调α-SMA、FSP-1蛋白表达(P<0.01),并减弱vimentin表达;与对照组相比,缺氧组信号通路HIF-1α、TGF-β1、p-smad2/3、snail蛋白表达均升高(P<0.01),与缺氧组比较,水蛭素下调HIF-1α、TGF-β1、p-smad2/3、snail蛋白表达(P<0.01)。结论水蛭素可以改善缺氧诱导的HCMECs细胞发生EndMT,其机制可能与调控HIF-α/TGF-β1/smad/snail通路有关。

长链非编码RNA-MEG3在人心脏微血管内皮细胞缺氧损伤中的作用

目的研究长链非编码RNA-MEG3在人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)缺氧损伤中的作用。方法将HCMEC分为对照组、缺氧/复氧(H/R)组及缺氧/复氧联合MEG3敲减(H/R+siMEG3)组。荧光定量PCR检测MEG3及炎性因子的表达情况[白介素1β(IL-β)、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF-α)];CCK-8检测HCMEC细胞的增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blotting检测PI3K/AKT/eNOS信号通路表达变化,ELISA检测一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、血管内皮生长因子(VEGF)和活性氧(ROS)表达水平。结果利用qPCR检测对照组及H/R组细胞MEG3表达,结果发现:H/R组MEG3相对表达倍数[(6.87±0.239)倍]较对照组MEG3表达倍数(1.00±0.026)倍显著升高(n=3,t=42.32,P<0.0001),提示MEG3可能在心脏微血管内皮细胞IRI中起到重要作用。H/R组细胞与对照组比较,细胞增殖活性显著减弱(P<0.01);而H/R+siMEG3组与H/R组比较,细胞增殖活性进步受到抑制(P<0.01)。H/R组较对照组PI3K、AKT及eNOS磷酸化水平显著减低,而H/R+siMEG3组细胞较H/R组磷酸化水平更低(P<0.05)。H/R组与对照组比较,NO、SOD及VEGF显著减低,而ROS水平升高(P<0.05);而H/R+siMEG3组与H/R组比较,NO、SOD及VEGF水平进步下降,ROS升高显著。利用qPCR检测各处理组细胞相关炎症基因表达,结果发现:H/R组较对照组基因表达显著升高(P<0.05);H/R+SiMEG3组较H/R组基因表达进一步升高(P<0.01)。结论长链非编码RNA-MEG3在心脏微血管内皮细胞H/R损伤过程中起到重要保护作用,靶向提升MEG3水平有望成为减缓心脏微血管IRI的潜在治疗靶点。

丹酚酸B和丹参酮Ⅱ_A不同配比对肿瘤坏死因子α损伤大鼠心脏微血管内皮细胞的影响

目的 观察不同配比的丹酚酸 B(Sal B)、丹参酮 A(Tan A)对体外肿瘤坏死因子 α(TNF- α)损伤大鼠心脏微血管内皮细胞 (CMEC)的影响。方法 采用 CMEC体外培养技术 ,建立 TNF-α损伤模型 ,以细胞活力 ,细胞培养液中乳酸脱氢酶 (L DH)释放、一氧化氮 (NO)合成、内皮素 (ET)分泌、超氧化物歧化酶 (SOD)活性及丙二醛 (MDA)含量的变化为评价指标 ,观察 Sal B和 Tan A不同配比 (10∶ 0 ,8∶ 2 ,5∶ 5 ,2∶ 8,0∶ 10 )对 TNF-α损伤 CMEC的保护作用。结果 Sal B和 Tan A(5∶ 5 )组明显提高细胞活力 ,Sal B和 Tan A(8∶ 2 )组显著降低L DH释放水平 ,Tan A促进 NO合成、降低 ET分泌以及抗氧化的作用最好。结论 Sal B和 Tan A的各配比组均能明显改善细胞的损伤 ,最佳配比根据检测指标的不同而不同。

丹酚酸B预适应对缺氧/复氧损伤的心脏微血管内皮细胞蛋白激酶C mRNA表达的影响

[目的]探讨丹酚酸B对心脏微血管内皮细胞(CMEC)抗缺氧损伤的保护机制。[方法]基于缺氧预适应的保护机制 ,通过缺氧/复氧的CMEC损伤模型 ,采用分子生物学方法 ,观察蛋白激酶CmRNA表达情况。[结果]丹酚酸B预适应可促进缺氧/复氧损伤的CMEC的蛋白激酶CmRNA表达增强 ,且明显优于缺氧预适应(HPC)。[结论]丹酚酸B预适应与HPC具有相类似的细胞保护效应 ,可增强细胞对随后较长时间缺氧/复氧损伤的耐受性 ,其机制可能是通过增强蛋白激酶CmRNA表达实现的。

SHH信号通路激活对大鼠心脏微血管内皮细胞缺血再灌注损伤血管再生作用研究

目的探讨SHH信号通路激活对大鼠心脏微血管内皮细胞(CMECs)缺血再灌注损伤后促血管再生的作用及其潜在机制。方法2016年7月—2017年2月于青岛大学附属烟台毓璜顶医院进行实验。原代培养SD雄性大鼠CMECs,建立氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模拟体外缺血再灌注损伤模型,给予外源性重组人SHH蛋白、Cyclopamine(CYC)处理,应用MTT法检测CMECs细胞活力,应用ELISA和RT-PCR方法检测血管新生因子(VEGF、FGF、Ang-1)水平和mRNA表达水平;应用Western-blot方法分别检测SHH信号通路靶分子(SHH、SMO、Patched-1、Gli-1、Gli-2)蛋白表达水平。结果(1)与C组比较,正常氧糖条件下C+SHH组活力增加(P<0.05),但C+CYC组消减(P<0.05);当细胞在OGD/R条件下,OGD组CMECs活力与C组比较减弱(P<0.05),而OGD+SHH组与OGD组比较细胞活力增加(P<0.05);但OGD+CYC显著消减(P<0.05)。(2)与C组比较,正常氧糖条件下C+SHH组血管新生因子VEGF、FGF、Ang-1水平和mRNA表达增加(P<0.01),但C+CYC组上述指标水平和mRNA表达下降(P<0.01);与C组比较,OGD组VEGF、FGF、Ang-1血清水平和mRNA表达显著降低(P<0.01);OGD+SHH组VEGF、FGF、Ang-1血清水平和mRNA表达显著增加(P<0.01),OGD+CYC组上述指标水平和mRNA表达下降(P<0.05)。(3)与OGD组比较,OGD+SHH组在OGD/R条件下,SHH信号通路中靶分子SHH、SMO、Patched-1、Gli-1和Gli-2蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),但OGD+CYC组SHH信号通路靶分子蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论SHH信号通路激活可增强细胞活力,上调血管新生因子VEGF、FGF和Ang-1的表达,在缺血再灌注损伤后血管再生过程中发挥重要作用。

黄芪多糖联合lncRNA TUG1沉默对缺血再灌注人心脏微血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪多糖联合长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸调节基因1(TUG1)沉默对缺血再灌注人心脏微血管内皮细胞凋亡的影响。方法:将心脏微血管内皮细胞分成对照组、模型组、sh-NC组、sh-TUG1组、黄芪多糖组、黄芪多糖+sh-TUG1组,流式细胞术检测凋亡,Western Blotting方法检测音速豪猪蛋白(SHH)表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)含量。结果:与对照组比较,模型组心脏微血管内皮细胞凋亡率升高,TNF-α增多,ROS升高,SHH蛋白表达降低(均P<0.05);与sh-NC组比较,sh-TUG1组心脏微血管内皮细胞凋亡率降低,TNF-α减少,ROS含量降低,SHH蛋白表达升高(均P<0.05);与模型组比较,黄芪多糖组心脏微血管内皮细胞凋亡率降低,TNF-α减少,ROS降低,SHH蛋白表达升高(均P<0.05);与sh-TUG1组、黄芪多糖组比较,黄芪多糖+sh-TUG1组心脏微血管内皮细胞凋亡率降低,TNF-α减少,ROS含量降低,SHH蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:黄芪多糖联合TUG1基因沉默能减少缺血再灌注人心脏微血管内皮细胞凋亡,减轻氧化损伤,抑制炎症介质分泌,其机制可能与激活SHH信号通路有关。

灯盏花乙素上调细胞外信号调节激酶表达拮抗人心脏微血管内皮细胞IR损伤

目的灯盏花乙素(SCU)可拮抗心肌IR损伤,但SCU是否通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路拮抗IR所致血管内皮细胞损伤尚不清楚。文中探讨SCU在缺氧-复氧(HR)诱导的人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)损伤中的作用及对ERK1/2信号通路的影响。方法体外培养的HCMEC分别进行正常培养和缺氧12 h-复氧12 h建立IR模型(HR)处理。正常培养条件下,将HCMEC分为正常对照组、DMSO组、SCU 1μmol/L组和SCU 10μmol/L组。给予HCMEC IR损伤处理后,分为空白对照组、HR模型组、HR+DMSO组、HR+SCU 1μmol/L组和HR+SCU 10μmol/L组。将HCMEC与SCU或DMSO预孵育2 h后行HR处理。采用MTT法和锥虫蓝染色检测细胞存活率,并检测HCMEC的丙二醛(MDA)浓度。Western blot检测p-ERK1/2、ERK2和GAPDH蛋白表达情况。结果 MTT检测结果显示,与正常对照组细胞存活率(100%)比较,SCU 1μmol/L组和SCU 10μmol/L组[(110.40±2.34)%和(122±1.25)%]均增加(P<0.05);与空白对照组细胞活力(100%)比较,HR模型组[(68.00±4.06)%]下降(P<0.05),与HR模型组细胞存活率比较,HR+SCU 1μmol/L组和HR+SCU 10μmol/L组[(90.53±3.67)%、(92.04±2.32)%]增加(P<0.05)。锥虫蓝染色显示,与正常对照组细胞活力[(90.06±1.85)%]比较,SCU 10μmol/L组[(96.78±2.01)%]增加(P<0.05);与空白对照组[(91.83±2.34)%]比较,HR模型组细胞存活率[(73.72±4.91)%]下降(P<0.01),与HR模型组比较,HR+SCU 10μmol/L组细胞存活率[(87.59±2.64)%]增加(P<0.05)。与空白对照组比较,HR模型组、HR+DMSO组MDA明显增加(P<0.01);与HR模型组比较,HR+SCU 1μmol/L组和HR+SCU 10μmol/L组MDA含量减少(P<0.05)。与空白对照组比较,HR模型组p-ERK1/2蛋白表达明显降低(P<0.01);与HR模型组比较,HR+SCU 10μmol/L组p-ERK1/2蛋白表达明显增加(P<0.01)。结论 HR损伤导致HCMEC细胞活力下降、MDA增加和p-ERK1/2蛋白表达降低,SCU通过上调p-ERK1/2表达而拮抗HCMEC IR损伤。

PKC/NADPH氧化应激途径对大鼠心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的影响

目的观察体外原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞内PKC/NADPH氧化应激途径在eNOS脱偶联中的作用。方法用牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(100 mg/L)与LY33531(PKC抑制剂)和DPI(NADPH抑制剂)分别作用大鼠心脏微血管内皮细胞(24 h),HPLC法检测BH4,试剂盒检测NO和O2-生成,免疫组化检测eNOS蛋白表达,Western blot法检测P47phox蛋白表达。结果随着LY33531和DPI浓度(5、10和20μmol/L)的增加,eNOS脱偶联状态减轻:NO生成逐渐增加(90.7±0.3～122.6±0.3,160.6±0.6,P<0.05),而O2-生成逐渐减少(P<0.05),eNOS表达逐渐减少(126.1±3.5～112.6±1.7,114.4±1.8,P<0.05),而BH4含量逐渐增加(P<0.05)。同时,ROS表达和P47phox表达减少(P<0.05)。结论 NADPH氧化应激途径可能参与AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的发生。而AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞内NADPH氧化应激的发生是依赖PKC激活的。

雷公藤内酯醇对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞和中性粒细胞黏附的影响

目的 研究雷公藤内酯醇(TRI)对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞和中性粒细胞黏附的影响。方法 培养分离大鼠心脏微血管内皮细胞,建立内皮细胞缺氧再给氧模型,分离大鼠的中性粒细胞,通过凝胶电泳迁移率(EMSA)测定核转录因子-κB(NF-κB)的活性,内皮细胞和中性粒细胞的黏附模型测定内皮细胞和中性粒细胞的黏附率。结果 大鼠心脏微血管内皮细胞在缺氧刺激后内皮细胞和中性粒细胞的黏附增加,NF-κB活性明显增高,再给氧后升高更明显;TRI组内皮细胞NF-κB活性明显降低(P<0.01),内皮细胞和中性粒细胞的粘附率显著下降(P<0.01),且呈剂量依赖效应。结论 TRI能明显抑制缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞NR-κB活性,抑制内皮细胞和中性粒细胞的粘附。

AGEs诱发体外大鼠心脏微血管内皮细胞iNOS表达

目的观察体外原代培养心脏微血管内皮细胞内一氧化氮（NO）生成与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的变化及相关性。方法采用不同浓度牛血清白蛋白糖基化终末产物（BSA-AGEs）（50-200 mg/L）分别作用于心脏微血管内皮细胞（0-24 h）,检测NO生成,免疫组化及Western blot检测iNOS表达。结果随着AGEs浓度增加及作用时间的延长,心脏微血管内皮细胞中NO生成增多,iNOS表达也增多（P〈0.05）。结论BSA-AGEs可以诱发心脏微血管内皮细胞产生毒性NO,从而引发以微血管内皮功能障碍为特征的糖尿病性心肌病。

普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞RAGE表达的影响

目的观察普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞糖基化终末产物(AGEs)受体(RAGE)表达的影响。方法体外原代培养心脏微血管内皮细胞。空白组加无血清培养液培养,AGEs组加AGEs(100 mg/L)孵育,普罗布考(5、10μmol/L)组用普罗布考(5、10μmol/L)分别作用细胞30 min后,加入AGEs(100 mg/L)再孵育24 h。各组分别作用于心脏微血管内皮细胞24 h,免疫组化法和Western blot法检测RAGE蛋白表达。结果 AGEs组与空白组RAGE蛋白表达比较,P<0.05;普罗布考10μmol/L组与AGEs组比较,P<0.05。结论普罗布考能够抑制AGEs诱发的心脏微血管内皮细胞RAGE的表达,从而抑制氧化应激的发生。

黄芪多糖对缺氧/复氧人心脏微血管内皮细胞凋亡、细胞周期的影响

目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对缺氧/复氧人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cell,HCMEC)凋亡、细胞周期的影响。方法培养原代HCMEC,通过缺氧/复氧刺激HCMEC,模拟缺血再灌注损伤,建立缺血再灌注损伤模型。将造模成功的HCMEC随机分为5组:对照组、模型组、APS低浓度组(25μg/ml)、APS中浓度组(50μg/ml)和APS高浓度组(100μg/ml)。通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。通过蛋白质印迹法测定caspase-3、caspase-9蛋白表达水平。结果模型组细胞凋亡率显著高于对照组和APS低、中、高浓度组(均P<0.01)。模型组S期细胞显著增加,细胞在S期被阻滞并促进了细胞凋亡,但APS逆转了这一现象。模型组caspase-3和caspase-9蛋白表达水平均显著高于对照组和APS低、中、高浓度组(均P<0.05)。结论APS可保护HCMEC免受缺血再灌注损伤,这种保护作用可能与改变细胞周期分布、调节caspase-3和caspase-9蛋白表达有关。

丹酚酸B预处理的心脏微血管内皮细胞延迟保护作用研究

目的 :探讨丹酚酸B通过保护心脏微血管内皮细胞(CMEC)抗心肌缺氧损伤作用机制。方法 :基于缺血预适应延迟保护机制 ,通过缺氧/复氧的CMEC损伤模型 ,观察丹酚酸B预处理的CMEC保护作用。结果 :丹酚酸B预处理与缺氧预处理作用相似 ,均可提高细胞存活率和SOD活性 ,降低LDH、NO水平。结论 :丹酚酸B预处理可激活CMEC内源性延迟保护机制 ,发挥了拮抗心肌缺血缺氧损伤效应。

乌司他丁对人心脏微循环内皮细胞体外循环血清损伤的作用

目的探讨不同剂量乌司他丁(ulinastatin,UTI)对人心脏微循环内皮细胞(Human Cardiac microvascular endothelial cell,HCMEC)体外循环血清损伤的作用。方法以体外培养的HCMEC为研究细胞,分为5组:空白对照组;体外循环组;UTI大剂量组(1 000 U/m L);UTI中剂量组,(500 U/m L);(5)UTI小剂量组(100 U/m L)。每组各9个培养皿。记录各组细胞存活率;检测各组细胞上清液中NO (Nitric oxide)、ET-1(endothelin-1)的含量。结果 (1)空白对照组相对细胞存活率高于体外循环组(P<0.05),而体外循环组相对细胞存活率低于UTI各剂量组(P<0.05),UTI大剂量组相对细胞存活率明显高于UTI中小剂量组(P<0.05);(2)体外循环组NO、ET-1均高于空白对照组(P<0.05);(3) UTI各剂量组ET-1低于体外循环组(P<0.05),而NO均高于体外循环组(P<0.05);(4) UTI大剂量组NO明显高于UTI中小剂量组(P<0.05),但ET-1明显低于UTI中小剂量组(P<0.05);(5) UTI小剂量组与UTI中剂量组在NO差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1) UTI对人体外循环血清损伤HCMEC的有一定的保护作用;(2)体外循环血清损伤HCMEC过程中,大剂量UTI较中小剂量UTI保护作用好。

miR-330-5p负性调控ADAM17基因抑制人心脏微血管内皮细胞的间质转化

目的探讨人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)间质转化(EndMT)过程中miR-330-5p和ADAM17基因的表达,阐明miR-330-5p对EndMT的影响。方法培养HCMEC,应用TGF-β1诱导后,利用免疫荧光化学检测CD31和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在细胞中的表达。运用生物信息学方法对miR-330-5p和ADAM17基因的配对关系进行预测。脂质体2000转染miR-330-5p模拟物后,Real-time PCR检测miR-330-5p、ADAM17和α-SMA mRNA的表达,Western blotting检测ADAM17和α-SMA蛋白的表达。结果光镜下可见诱导后细胞由鹅卵石形态变为长梭形,免疫荧光化学显示诱导前有强烈的CD31表达,诱导后出现α-SMA的高表达。生物信息学软件TargetScan和miRanYda显示miR-330-5p和ADAM17基因二者靶向配对良好。Real-time PCR和Western blotting检测结果均表明过表达miR-330-5p能够降低ADAM17和α-SMA mRNA及蛋白的表达。结论 miR-330-5p通过下调人心脏微血管内皮细胞中ADAM17基因的表达,进而抑制TGF-β1诱导的EndMT。

新生大鼠心脏微血管内皮细胞的分离培养及鉴定

目的:介绍一种改良的心脏微血管内皮细胞(CMECs)的分离培养及鉴定方法。方法:应用酶消化法分离大鼠CMECs,再用差速贴壁进行纯化。结果:用光学显微境、免疫细胞化学法进行第Ⅷ因子相关抗原染色来鉴定CMECs,其纯度约98%。结论:该法简单且经济。

乌司他丁对人心脏微循环内皮细胞释放炎性因子的作用

目的探讨乌司他丁(UTI)对人心脏微循环内皮细胞(HCMEC)释放炎性因子的影响。方法将体外培养的HCMEC细胞按以下分组方法进行实验:(1)对照组,在HCMEC细胞培养体系中加入2 mL的体外循环血清;(2) UTI-H组,HCMEC细胞培养体系+2 mL体外循环血清+1 000单位/mL的UTI;(3) UTI-M组,HCMEC细胞培养体系+2 mL体外循环血清+500单位/mL的UTI;(4) UTI-L组,HCMEC细胞培养体系+2 mL体外循环血清+100单位/mL的UTI。每组各9个培养皿。检测各组细胞培养液上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10 (IL-10)、核转录因子κB (NF-κB)的含量。结果 (1) UTI-H组、UTI-M组和UTI-L组细胞培养液上清液中的NF-κB水平分别为(0.04±0.005) ng/mL、(0.06±0.002) ng/mL和(0.07±0.003) ng/mL,明显低于对照组的(0.10±0.006) ng/mL,且UTI-H组NF-κB水平明显低于UTI-M组和UTI-L组,差异均有统计学意义(P<0.05);(2) UTI-L组、UTI-M组和UTI-H组细胞培养液上清液中的TNF-α水平分别为(0.71±0.09) ng/L、(0.66±0.05) ng/L、(0.32±0.04) ng/L,明显低于对照组的(1.45±0.06) ng/L,且UTI-H组的TNF-α水平明显低于UTI-M组和UTI-L组,差异均有统计学意义(P<0.05);(3) UTI-L组、UTI-M组和UTI-H组细胞培养液上清液中的IL-10水平分别为(1.29±0.12) ng/L、(2.33±0.15) ng/L、(4.42±0.36) ng/L,明显高于对照组的(0.76±0.09) ng/L,UTI-H组的IL-10水平明显高于UTI-M组和UTI-L组,UTI-M组IL-10明显高于UTI-L组,差异均有统计学意义(P<0.05);(4) UTI-L组和UTI-M组的NF-κB和TNF-α水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乌司他丁能明显降低HCMEC细胞释放TNF-α、NF-κB水平和提升HCMEC细胞释放IL-10因子水平。

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞血管形成及血管内皮生长因子受体1的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子对诱导大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构的影响,以及对血管内皮生长因子受体Flt-1的作用。方法分离、培养大鼠心脏微血管内皮细胞。应用Matrigel检测不同浓度碱性成纤维细胞生长因子作用后心脏微血管内皮细胞形成管腔的情况。逆转录聚合酶链反应检测各组血管内皮细胞Flt-1mRNA的表达量。结果应用Matrigel可诱导心脏微血管内皮细胞管腔样结构形成,随着碱性成纤维细胞生长因子浓度升高(0、51、0和20μg/L),管腔样结构形成的数量逐渐增多,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时管腔样结构的数量有所减少(P<0.05)。Flt-1 mRNA的表达量随碱性成纤维细胞生长因子作用浓度的升高(0、5、10和20μg/L)而逐渐增高,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时其mRNA水平有所降低(P<0.05)。结论应用Matrigel可在体外诱导培养的大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构。碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构有促进作用,并在一定范围内呈剂量依赖性关系。碱性成纤维细胞生长因子影响大鼠心脏微血管内皮细胞膜受体Flt-1的表达,在一定范围内亦呈剂量依赖性,且这种剂量依赖性同微血管内皮细胞管腔样结构形成的数量一定范围内呈现一致性。