果蝇心脏基因一个新人同源基因WNT-10A的研究初报

Wg基因是控制果蝇心脏前体细胞形成的一个关键基因 ,根据物种间同源异型基因结构上的保守性与功能上的相似性 ,我们运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因 ,命名为 WNT- 1 0 A.该基因有一富集 GC碱基的启动子 ,m RNA全长约 2 .4kb,3′末端包含 ATAAA的加尾信号 ,编码一段长 41 7个氨基酸的蛋白质 ,与小鼠 Wnt- 1 0 a的编码蛋白高度相似 .其心脏 EST数目占正常组织 EST总数的 45% ,表明该基因在心脏组织高度表达 ,提示其可能与心脏发育有关 .该基因与其基因家族成员具有相似的同源框序列 ,在肿瘤细胞中大量表达 (占总 EST的 31 % ) ,表明该基因相似于其家族成员 ,可能与肿瘤的发生有关 .

转基因技术在果蝇及脊椎动物心脏基因研究中的应用

转基因技术是一项非常重要的生物工程新技术 ,主要应用于生产药物蛋白及异种器官移植 ,建立疾病基因模型 ,提高和改善家畜生产的产量和质量以及研究新基因的功能及表达调控 .重点综述了几个新的转基因技术—UAS -Gal4系统 ,热休克启动子载体 ,RNAi技术 。

心脏基因转录潜能的区域化

心脏基因在心肌中的区域化表达是一个非常普遍的现象 ,通过转基因动物研究心肌中的转录潜能的区域化已取得了重大的进展 .房室转录区域化最早是在线状心管形成时开始出现的 .之后 ,在胚胎心脏的各个部分均可以发现转基因区域化表达 .对于转基因在心肌中区域化表达的分子机理的研究 ,现在主要集中在对转基因调控区域的顺式调控元件和反式调控元件的解析 。

应用三元递减法筛选特异性心脏生长相关基因

心脏是由胚胎干细胞特异性分化而来的 ,但其分化的分子生物学机制尚不十分了解 .为建立一种新的筛选特异性心脏相关基因的方法 ,克隆特异性心脏生长相关基因 .从胚胎心、成年心和去胎心的胚胎中提取 m RNA,建立胎心 /成年心和胎心 /胎身两个递减性 c DNA文库 ,通过 DNA芯片和微阵列杂交筛选和克隆 ,建立了三元递减克隆的新方法 .获得了一个全长为 1 0 0 6 bp可编码1 94个氨基酸的新的与心脏生长相关的基因 ,它是 LIM家族的新成员 ,可特异性在心肌细胞表达 ,并可促进心肌细胞的生长 .结果表明 ,三元递减筛选法可以应用于寻找新的组织特异性表达的基因 .并且获得了一个新的与心脏生长相关的新基因 。

P转位子诱变的果蝇心脏发育基因的突变(Ⅱ)──第3染色体基因突变

本文报道了利用Ｐ转位子诱变果蝇心脏发育基因第３染色体的基因突变的部分结果．利用Ｐ转位子诱变，共建立了２５９个第３染色体隐性致死基因平衡系，其中２６个品系表现有心脏突变表型，２个品系同时具有Ｐ转位子在心脏组织的特异ＬａｃＺ表达，表明这２个品系的Ｐ转位子可能插入到与心脏发育有关的基因中或这些基因的附近，因此。

心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因的时序性表达规律研究

目的观察在心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因时序性表达规律,为心肌肥大机制研究提供线索。方法用异丙肾上腺素(ISO)干预心肌细胞,用CCK-8、细胞计数仪、免疫组化分别检测细胞存活率、细胞直径及表面积,用RT-PCR、Western blotting分别检测相关基因mRNA及蛋白表达水平。结果用ISO成功构建心肌细胞肥大模型。ISO干预后,GATA结合蛋白4(GATA4)、肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA5、脑钠肽(BNP)、心房利钠因子(ANP)于24h开始升高,P300、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、T-框蛋白5(TBX5)于12h开始升高,血清应答因子(SRF)、β-MHC mRNA于6h开始升高(P<0.05);其中GATA4、α-MHC、β-MHC、SRF、P300 mRNA表达呈先升后降的趋势,至干预72h GATA4、SRF、α-MHC、β-MHC、P300 mRNA表达仍高于正常(P<0.05),而MEF2C降至正常(P>0.05);GATA5、TBX5、ANP、BNP mRNA表达与对照组相比持续升高(P<0.05),而NKX2.5 mRNA(P>0.05)无明显变化。ISO干预48h后,GATA4蛋白表达水平升高,HEY2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论在心肌细胞肥大过程中,MEF2C的时序表达规律与心脏发育过程相似,而GATA4、GATA5、SRF、TBX5的时序性表达规律与心脏发育过程不完全一致,提示其在心肌细胞肥大由代偿转为失代偿过程中的重要作用。同时GATA4、MEF2C、SRF与乙酰化酶P300的时序性表达规律相似,提示在心肌细胞肥大过程中其时序性表达可能受P300调控。

猪心脏脂肪酸结合蛋白基因多态性检测及与肉质性状的关联分析

随着人们生活水平的提高,对肉品质的要求也越来越高。在影响猪肉品质的众多因素中,遗传因素起到了很重要的作用。心脏脂肪酸结合蛋白基因(H-FABP)作为影响猪肉质性状的重要候选基因,曾在多个猪种上进行研究。本实验以3个安徽地方品种和1个杂交品种为材料(圩猪、皖南花猪、皖南黑猪、皖南黑猪与巴克夏的二元杂),将各品种的DNA分别混池,通过PCR扩增H-FABP基因的5′端调控区和全部4个外显子,进行测序检测SNPs,分别在5′端调控区和第2外显子各检测到1个SNP。这两个SNP位点与粗蛋白质、总脂肪、游离脂肪和16种氨基酸含量表型值关联分析表明,5′端调控区的SNP多态性与全部19个性状的关联结果未达显著水平(P>0.05),第2外显子处SNP多态仅与谷氨酸含量显著关联(P<0.05)。

心脏钠通道SCN5A基因突变与致心律失常性疾病

致心律失常性疾病患者死后尸检时心脏没有发现病理学异常的证据,过去都将其归为原因不明的猝死,近年研究显示,很多致心律失常性疾病与心脏钠通道基因(SCN5A)突变相关。本文对钠通道SCN5A基因的基本结构、SCN5A基因突变与几种相关的致心律失常性疾病的相关性等进行了综述,旨在为原因不明猝死的研究提供新思路。

心脏糜蛋白酶A基因-1903AA基因型延缓肥厚型心肌病患者的发病

目的探讨血管紧张素转换酶基因(ACE)16内含子的插入/缺失(I/D)、血管紧张素Ⅱ受体1型基因(AGTR1)1166A/C、醛同酮合成酶基因(CYP11B2)-344C/T、心脏糜蛋白酶A基因(CMA)-1903A/G、肿瘤坏死因子α基因(TNFα)-308G/A和C蛋白β3亚单位基因(GNB3)825C/T等多态对HCM临床表型的影响。对象和方法研究对象为在中国医学科学院阜外心血管病医院就诊的93例无血缘关系的HCM病人,82例性别、年龄匹配的健康人作为正常研究对照。设计特异引物,PCR扩增包含ACE I/D、AGTR1 1166A/C、CYP11B2-344C/T、CMA-1903A/G、GNB3 825C/T、TNF-α- 308G/A等多态的目的片断,根据PCR产物的长度或PCR产物限制性酶切后的长度来判定上述多态。结果4．3%的HCM患者携带CMA-1903AA基因型,其发病(65．5±7．9岁,n=4)晚于携带AG (37．3±12．5岁,n=36,P＜0．01)和GG(40．1±15．3岁,n=53,P＜0．01)基因型的HCM患者。ACE I/D、AGTR1 1166A/C、CYP11B2-344C/T、GNB3 825C/T、TNF-α-308G/A等多态不影响HCM表型。结论携带CMA-1903AA基因型的HCM患者发病明显晚于AG和GG基因型的患者,可能AA基因型具有保护作用。

肢体和心脏发育基因在前列腺癌中的表达

目的:探讨肢体和心脏发育(LBH)基因的表达在前列腺癌中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR(q PCR)、免疫组化(IHC)和Western印迹方法检测20例前列腺癌与正常前列腺组织中LBH的表达;构建si RNA-1、si RNA-2和阴性对照序列转染PC-3、LNCa P前列腺癌细胞以沉默LBH的表达,采用CCK-8、Transwell小室法观察细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。结果:q PCR检测结果显示前列腺癌组织中LBHm RNA表达水平明显高于正常前列腺组织(4. 8±2. 4 vs 1. 8±1. 1,P=0. 032); IHC结果显示LBH蛋白在前列腺癌组织中表达阳性率为90. 0%(18/20),正常前列腺组织中为15. 0%(3/20),差异具有统计学意义(P=0. 006); Western印迹结果也显示前列腺癌组织中LBH表达显著高于正常前列腺组织(3. 5±1. 2 vs 1. 3±0. 6,P=0. 019)。干扰LBH表达后,PC-3和LNCa P细胞的增殖能力均显著下降,96 h时,PC-3细胞中si RNA-1和si RNA-2组的A450值显著低于阴性对照组(1. 2±0. 1、1. 1±0. 1 vs 1. 8±0. 2,P <0. 01); LNCa P细胞中si RNA-1和si RNA-2组的A450值也显著低于阴性对照组(1. 4±0. 2、1. 1±0. 2 vs 1. 9±0. 2,P <0. 01)。细胞迁移实验显示,si RNA转染PC-3细胞后,si RNA-1和si RNA-2组透过基底膜的细胞数显著低于阴性对照组[(55. 5±6. 4)、(44. 9±4. 5)个vs (175. 6±25. 8)个,P <0. 05];LNCa P细胞中si RNA-1和si RNA-2组也显著低于阴性对照组[(46. 4±5. 8)、(40. 2±8. 2)个vs (125. 3±13. 5),P <0. 05]。细胞侵袭实验显示,si RNA转染PC-3细胞后,si RNA-1和si RNA-2组透过基底膜的细胞数显著低于阴性对照组[(82. 5±7. 5)、(68. 4±5. 5)个vs (138. 2±10. 7)个,P <0. 05]; LNCa P细胞中si RNA-1和si RNA-2组也显著低于阴性对照组[(46. 4±5. 8)、(23. 1±6. 2)个vs (92. 1±10. 5)个,P <0. 05]。结论:高表达的LBH可能在前列腺癌的发病过程中发挥重要作用,可作为前列腺癌治疗的潜在靶标。

猪心脏脂肪酸结合蛋白基因的克隆和测序分析

根据GeneBank发表的猪心脏脂肪酸结合蛋白(heartfattyacid bindingprotein,H-FABP)基因序列,设计合成一对引物,从杜长大三元杂交猪的腰大肌中提取总RNA,对H-FABP基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约124bp的条带,回收纯化后,将其克隆至pMD18-T质粒载体中,然后进行核苷酸序列分析。与GeneBank中报道的H-FABP基因比较后发现,该基因片段与其它的核苷酸的同源性为94%～100%,推导的氨基酸的同源性为100%.

心脏特异性同源盒基因变异与法洛四联症

心脏特异性同源盒基因,是所有脊椎动物心脏发生中最早表达的转录因子。近年来,大量实验研究表明心脏特异性同源盒基因在心脏发生发育、传导系统及成熟心脏正常功能维持等方面扮演重要角色,其变异影响心脏发育,导致各种先天性心脏病,包括法洛四联症。现对心脏特异性同源盒基因与法洛四联症之间的相关研究作以简单介绍。

布莱凯特黑牛心脏脂肪酸结合蛋白基因单核苷酸多态性的研究

利用PCR-SSCP方法测定96头布莱凯特黑牛H-FABP基因外显子2和内含子2的部分序列多态性,并对含有多态序列的片段进行了序列分析。结果表明,引物1、3的扩增序列不存在多态性,引物2、4的扩增序列存在多态性;引物2在内含子第323位点处存在G→A突变,在群体中产生了AA、AB、BB 3种基因型,基因型频率分别为0.448、0.146、0.406,多态信息含量(PIC)为0.375,属于中度多态(0.25<PIC<0.5),经χ2检验该位点基因型频率不处于Hardy-Weinberg平衡状态;引物4在内含子2第872位点处存在C→G的突变,产生了HH、Hh、hh 3种基因型,基因型频率分别为0.104、0.417、0.479,多态信息含量(PIC)为0.337,为中度多态(0.25<PIC<0.5),经χ2检验该位点基因型频率达到Hardy-Weinberg平衡状态。

吗啡急性给药、吗啡依赖和戒断的大鼠心脏内分泌基因的表达

目的·· :研究吗啡急性给药、吗啡依赖及戒断对大鼠心脏心钠素基因表达的影响。方法 :·· 利用斑点及Northern杂交技术检测大鼠心房的心房钠利尿因子信使RNA(ANF -mRNA)含量。结果··:吗啡急性给药、吗啡依赖及戒断时大鼠心房ANF -mRNA含量均升高。结论·· :吗啡急性给药、吗啡依赖及戒断时大鼠心脏心钠素基因表达均增强。

NKX2.5基因在先天性心脏病中的研究进展

先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）是指胚胎时期心脏血管发育异常而引起的一组出生缺陷疾病,在先天性畸形中最常见[1]。临床资料[2]表明,85%的CHD由多基因所致病,15%与单基因致病有关,而易感基因尚未确定。

甲亢性心脏病的病因研究进展

甲亢性心脏病是甲状腺功能亢进时过量的甲状腺激素对心脏产生影响,从而引起心律失常、心脏扩大以及心力衰竭。它的发病主要和甲状腺激素的直接作用、心脏基因表达异常、自主神经功能紊乱等相关。本文就其病因研究进展作一综述。

心肌特异表达基因p93的激酶及丝氨酸结构域在大肠杆菌中的高效表达

目的 在大肠杆菌中高水平表达并分离纯化心脏特异表达基因p93的激酶与丝氨酸结构域片段。方法 利用DNA重组技术 ,构建C末端带有 6×His标签的p93激酶与丝氨酸结构域(p93 C)片段的原核表达载体pET2 8a p93 C。对诱导表达条件和包涵体洗涤条件优化后 ,用Ni2 +金属螯合吸附层析柱纯化。结果 成功构建了pET2 8a p93 C原核表达载体 ,诱导后摇床转速在 35 0r/min下表达量最高 ,包涵体洗涤在超声条件下较好 ,分离纯化后从 10 0ml菌液中可获得 2 5mg蛋白。结论建立了高效稳定的p93 C原核表达体系以及较好的包涵体洗涤方法。

西部地区主要猪种和野猪H-FABP基因分子标记与IMF含量关系

利用PCR RFLP(HinfⅠ、HaeⅢ和MspⅠ3种限制性内切酶)分子标记技术,检测了杜洛克猪、长白猪、大白猪、内江猪、荣昌猪、汉江黑猪、汉中白猪、八眉猪和野猪共计265头猪H FABP基因5′上游区和第二内含子区的遗传变异,并利用最小二乘模型分析了H FABP基因对猪肌内脂肪含量的遗传效应。结果表明:(1)在HinfⅠRFLP位点上,上述品种和野猪均存在多态性,其中大白猪、八眉猪、汉江黑猪、汉中白猪和野猪表现为低度多态,杜洛克、长白猪、内江猪和荣昌猪为中度多态;除汉江黑猪(P<0.05)和野猪(P<0.01)外,其他猪种基因频率和基因型频率都处于Hardy Weinderg平衡状态(P>0.05);而在HaeⅢRFLP和MspⅠRFLP位点上,仅内江猪、荣昌猪、汉江黑猪和八眉猪为单态;(2)9种基因型对肌内脂肪(IMF)含量的影响,HH>Hh>hh,DD<Dd<dd,AA<Aa<aa,遗传效应值分别为:3.89;3.42;3.17;2.27;2.49;2.91;2.28;2.70;2.95;H FABP基因可显著地提高IMF含量(P<0.05)。结果提示:可通过提高“aa dd HH”基因型的频率来增加IMF含量,达到改善猪肉质的目的。

猪H-FABP基因多态性及其与肌内脂肪含量的相关研究

旨在研究猪H-FABP基因的遗传多态性及其与肌内脂肪含量的遗传效应。利用PCR-RFLP(HinfⅠ、MspⅠ、HaeⅢ、Hinf*Ⅰ4种限制性内切酶)分子标记技术检测了中国地方猪种雅南猪、大河猪,培育品种大河乌猪以及杜洛克与长白和约克三元杂交商业群体共148头猪心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因5′-上游区和第二内含子的遗传变异,并利用固定效应模型分析了H-FABP基因在杜洛克与长白和约克三元杂交商业群体中对肌内脂肪含量的遗传效应。结果表明:(1)在HinfⅠ和MspⅠ位点上,所有4个猪群都存在多态;在HaeⅢ位点上,除雅南猪只出现单态外,其余3个猪群都出现多态;在Hinf*Ⅰ位点上,除杜洛克与长白和约克三元杂交商业群体出现多态外,其余3个猪群只表现单态。(2)4个位点对肌内脂肪含量的影响差异显著,各基因型肌内脂肪含量最小二乘均值关系即Hh>HH,bb>Bb>BB,Aa>AA,DD>Dd>dd。结合H-FABP基因的生理功能和已有的研究结果来看,可在特定的群体中将其作为影响猪肌内脂肪含量的候选基因。