Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病患儿肺血流异常发病机制中的作用

目的观察Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病(CHD)患儿肺血流异常发病机制中的作用。方法回顾分析2016年4月—2018年10月河北省儿童医院心脏外科收治的低体质量先天性心脏病患儿100例的临床资料,根据患儿肺充血情况,分为肺充血组(n=62)和肺缺血组(n=38),另取同期在医院治疗的其他疾病低体质量患儿50例作为对照组。比较各组患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达,血浆IL-4和IFN-γ水平及外周血淋巴细胞亚群Th1/Th2细胞百分率的变化,通过Pearson法分析T-bet、GATA-3 mRNA表达量与Th1/Th2、血浆IL-4、IFN-γ水平的相关性。结果与对照组比较,肺充血组和肺缺血组患儿T-bet、GATA-3 mRNA表达,血浆IFN-γ、Th1细胞百分率、Th1/Th2水平均明显降低,血浆IL-4、Th2细胞百分率水平明显升高,且肺充血组患儿上述指标变化较肺缺血组更为显著(F/P=6.547/<0.001,9.254/<0.001,2.196/<0.001,65.254/<0.001,39.875/<0.001,3.026/<0.001,26.598/<0.001)。CHD患儿T-bet mRNA表达与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈正相关,与血浆IL-4水平、Th2百分率呈负相关(r/P=0.513/0.005,0.685/0.027,-0.764/0.000,-0.985/0.002),GATA-3 mRNA表达与血浆IL-4水平、Th2百分率呈正相关,与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈负相关(r/P=0.784/0.015,0.793/0.011,-0.525/0.032,-0.652/0.025)。结论 GATA-3和T-bet表达的平衡失调对Th1/Th2细胞的平衡偏移具有重要的调控作用,从而影响血浆IFN-γ、IL-4水平,在CHD的发病机制中起着重要作用。

心脏特异性同源盒基因变异与法洛四联症

心脏特异性同源盒基因,是所有脊椎动物心脏发生中最早表达的转录因子。近年来,大量实验研究表明心脏特异性同源盒基因在心脏发生发育、传导系统及成熟心脏正常功能维持等方面扮演重要角色,其变异影响心脏发育,导致各种先天性心脏病,包括法洛四联症。现对心脏特异性同源盒基因与法洛四联症之间的相关研究作以简单介绍。

GATA-4、NKx2-5转录因子的研究进展

转录因子GATA家族是能与核酸共同序列（A/T）GATA（A／G）结合的细胞核转录因子。包括6个成员，即GATA-1、-2、-3、-4、-5和-6。1995年Huang等通过筛查人类心脏cDNA文库首次克隆出人类GATA-4cDNA，以后相继在人类肺、肝脏和小肠等器官中检测到GATA-4 mRNA和蛋白的表达。人们应用果蝇同源结构域（homeodomain，HD）寡核苷酸探针筛查果蝇cDNA文库，克隆出NK型同源盒基因。随后分离出一种与果蝇背侧血管，心脏发育密切相关的果蝇NK-2型基因tinman基因。GATA-4和NKx2-5是目前研究较多的与心脏发育密切相关的转录因子。

绝经后女性患者血清Smad4和Osterix水平与骨密度及骨折发生率的相关性分析

目的分析绝经后女性患者血清Smad同源物4(Smad4)和成骨细胞特异性转录因子(Osterix)水平与骨密度(BMD)及骨折发生率的相关性。方法选取2020年5月至2022年5月西安交通大学第二附属医院收治的157例45~70岁绝经女性作为研究对象,按BMD将患者分为BMD正常组(n=51)、BMD减少组(n=59)、骨质疏松症(OP)组(n=47);根据是否骨折分为骨折组(n=48)和非骨折组(n=109)。检测研究对象血清Smad4、Osterix、β胶原降解产物(β-CTX)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(P1NP)、骨桥蛋白(OPN)及N端骨钙素(N-MID)水平;分析血清Smad4与Osterix的相关性,及血清Smad4、Osterix与骨代谢指标间的相关性,以及影响患者发生OP的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Smad4、Osterix水平对发生骨折风险的预测价值。结果与BMD正常组比较,BMD减少组和OP组的β-CTX、P1NP、OPN、N-MID依次升高,股骨BMD、腰椎L1-4BMD依次降低(P<0.05);BMD减少组和OP组的血清Smad4和Osterix水平依次降低(P<0.05);OP组骨折发生率显著高于BMD正常组和BMD减少组(P<0.001),BMD减少组骨折发生率显著高于BMD正常组(P=0.027)。骨折组的血清Smad4、Osterix水平显著低于非骨折组(P<0.05)。Pearson分析结果表明,Smad4和Osterix的表达水平呈正相关(P<0.05);Spearman分析结果表明,Smad4表达水平与β-CTX、P1NP、OPN和N-MID呈负相关(P<0.05),与股骨BMD和腰椎L1-4BMD呈正相关(P<0.05);Osterix的表达水平与β-CTX、P1NP、OPN和N-MID呈负相关(P<0.05),与股骨BMD和腰椎L1-4BMD呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析表明,低水平Smad4、Osterix、股骨BMD、腰椎L1-4BMD是影响OP发生的危险因素(P<0.05)。绘制ROC曲线结果显示,血清Smad4预测骨折风险的曲线下面积(AUC)为0.937,血清Osterix预测骨折风险的AUC为0.911,二者联合预测骨折风险的AUC为0.974,二者联合优于血清Smad4和Osterix各自单独诊断(Z联合vs.Smad4=3.843、Z联合vs.Osterix=2.386,P<0.05)。结论绝经后OP患者血清Smad4和Osterix呈低表达,与患者的骨代谢生化指标和BMD密切相关,且是影响OP发生的独立危险因素,二者联合可以更好地预测患者发生骨折的风险。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

慢病毒介导特异性核转录因子尾型同源基因2过表达对人胃癌裸鼠耐药模型耐药性的影响及其机制

肿瘤细胞多药耐药性与某些基因密切相关，Takakura等研究结果显示，特异性核转录因子尾型同源基因2（CDX2）与肿瘤多药耐药性密切相关，但作用机制尚不明确。本实验旨在观察CDX2基因过表达后对人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901／DDP裸鼠皮下移植瘤耐药性产生的影响，并进一步检测经典多药耐药相关基因多药耐药基因1（MDR1）、

生长终止特异性同源盒基因稳定转染兔血管平滑肌细胞的研究

生长终止特异性同源盒基因（Gax）是一种转录因子，属同源盒基因超家族一员，在细胞生长、分化、迁移等方面具有重要作用。我们将Gax稳定转染到兔血管平滑肌细胞（VSMCs）中，观察其对VSMCs增殖和迁移的作用。

胰岛因子1与心发育

心是胚胎发育过程中最早执行功能的器官,其发育过程受到多种转录因子及信号系统在不同时空阶段的精细调节,任何调控错误都将导致先天性心脏病的发生[1-2].心特异性转录因子是在心细胞特异性表达的关键转录活化因子,主要对心发育相关基因的正确表达进行调控.近年来,转录因子在心发育中的作用已成为国内外学者的研究热点,在众多的转录因子中,胰岛因子1 （Islet1,ISL-1）是早期心发育、尤其是在右心室和流出道的发育中起着关键作用的一个转录因子.下面就其近几年的研究进展作一综述.

NKX2.5基因在先天性心脏病中的研究进展

先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）是指胚胎时期心脏血管发育异常而引起的一组出生缺陷疾病,在先天性畸形中最常见[1]。临床资料[2]表明,85%的CHD由多基因所致病,15%与单基因致病有关,而易感基因尚未确定。

矮小同源盒基因亚型2、Runt相关转录因子3基因甲基化在肺癌发生发展中的意义

目的探讨矮小同源盒基因亚型2（SHOX2）、Runt相关转录因子3（Runx3）基因甲基化在非小细胞肺癌（NSCLC）发生发展过程中的意义。 方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法检测70例癌组织、60例癌旁组织和30例非肺癌良性切除组织中SHOX2、Runx3基因启动子区的甲基化率，分析NSCLC患者癌组织与癌旁组织甲基化水平的差异，并分析性别、年龄、吸烟史、临床分期及病理分型、分化程度、淋巴结转移对基因启动子区甲基化率的影响。 结果70例肺癌组织、60例癌旁组织、30例非肺癌良性切除组织中SHOX2、Runx3基因启动子区甲基化检出率分别为68.57%（48/70）、62.86%（44/70）；8.33%（5/60）、5.00%（3/60）；6.67%（2/30）、3.33%（1/29），三者基因甲基化检出率比较，差异有统计学意义（χ2＝64.530，P＝0.000；χ2＝63.350，P＝0.000）。SHOX2基因启动子区甲基化与分化程度（χ2＝8.672，P＝0.003）、淋巴结转移（χ2＝6.481，P＝0.011）明显相关；RUNX3基因启动子甲基化与病理分型（χ2＝4.749，P＝0.029）、临床分期（χ2＝7.035，P＝0.008）、分化程度（χ2＝9.341，P＝0.002）、淋巴结转移（χ2＝5.240，P＝0.022）明显相关。 结论SHOX2、Runx3基因启动子区的甲基化与NSCLC有关。

同源盒基因HoxA_(10)与白血病

HoxA10基因是调控造血的转录因子,具有髓系特异性,其表达失衡与白血病的发生有关。HoxA10基因在造血细胞发育过程中起双重作用,对早期细胞增生有增效作用,表达下调允许细胞向髓系分化。HoxA10基因主要表达在髓系白血病,少有淋系表达,与HoxA9、Pbx1、Meisl等共同影响白血病的进程。有临床监测和增强体外干细胞扩增的应用前景。

SATB2在结直肠腺癌肝转移中的表达及其诊断价值

目的:探讨富含AT序列特异性结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)在结直肠腺癌中的表达及其联合检测细胞角蛋白20(cytokeratin 20,CK20)、同源异型框转录因子-2(caudal-related homeodomain transcription 2,CDX2)在结直肠腺癌肝转移中的诊断价值。方法:应用免疫组织化学法检测100例结直肠腺癌及234例其他类型腺癌中SATB2的表达,同时检测179例肝内5种不同类型腺癌组织中SATB2、CK20及CDX2的表达。分析SATB2、CK20和CDX2灵敏度、特异度及准确度。结果:结直肠腺癌中SATB2阳性表达率(89%)明显高于其他类型腺癌阳性表达率(1.28%,χ2=270.107,P<0.001)。肝癌组织中来源于结直肠腺癌转移者SATB2阳性表达率为84%,非结直肠腺癌转移者SATB2阳性率仅为2.33%。表达的灵敏度、特异度及准确度:SATB2为84.00%、97.67%、93.85%;CK20为76.00%、77.52%、77.09%;CDX2为98.00%、67.44%、75.98%。结论:SATB2在结直肠腺癌中阳性表达率高,其联合CK20、CDX2检测可鉴别诊断结直肠腺癌肝转移。

慢性乙型肝炎患者血清内质网应激指标变化及其临床意义

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者血清内质网应激指标水平的变化。方法2017年5月~2020年5月我院收治的CHB患者109例、乙型肝炎肝硬化患者91例和原发性肝癌(PLC)患者76例,另选择同期健康志愿者120例,采用放射免疫法检测血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平,采用ELISA法检测血清葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网应激转录因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和天冬半胱氨酸特异性蛋白酶-12(caspase-12)水平。结果CHB组血清ALT、AST、GGT和ALP水平分别为(83.4±21.7)U/L、(63.7±20.5)U/L、(82.2±20.4)U/L和(95.7±20.8)U/L,乙型肝炎肝硬化组分别为(74.3±18.5)U/L、(51.5±18.9)U/L、(84.9±22.5)U/L和(94.8±19.8)U/L,PLC组分别为(70.2±17.7)U/L、(52.6±18.8)U/L、(93.8±24.8)U/L和(106.8±22.4)U/L,均显著高于健康人(P<0.05);CHB组血清HA、LN、Ⅳ-C和PⅢP水平分别为(84.5±78.9)ng/mL、(52.8±24.1)ng/mL、(61.4±33.0)ng/mL和(10.9±7.4)ng/mL,乙型肝炎肝硬化组分别为(155.2±75.6)ng/mL、(63.1±22.8)ng/mL、(82.2±30.1)ng/mL和(15.4±5.2)ng/mL,PLC组分别为(153.3±73.2)ng/mL、(64.6±20.4)ng/mL、(80.9±28.4)ng/mL和(15.4±3.1)ng/mL,均显著高于健康人[分别为(38.6±14.2)ng/mL、(34.2±13.3)ng/mL、(33.9±10.9)ng/mL和(6.8±1.6)ng/mL,P<0.05];CHB组血清GRP78、CHOP和caspase-12水平分别为(44.0±12.4)μg/L、(2485.5±1200.0)μg/L和(699.8±204.2)pmol/L,乙型肝炎肝硬化组分别为(51.7±15.9)μg/L、(2873.1±1314.2)μg/L和(752.2±241.5)pmol/L,PLC组分别为(62.7±17.1)μg/L、(3040.9±1440.3)μg/L和(842.8±289.4)pmol/L,显著高于健康人[分别为(7.3±2.1)μg/L、(833.4±333.5)μg/L和(85.3±13.7)pmol/L,P<0.05]。结论CHB患者血清内质网应激指标显著升高,其与发病机制的关系和对治疗的影响值得探讨。

过表达Nkx2.5对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的影响

目的探讨过表达心脏特异性同源盒转录因子(Nkx2.5)对骨髓间充质干细胞(BMSC)向心肌细胞分化的影响。方法将慢病毒过表达Nkx2.5基因质粒和空载体转染到BMSC后,过表达Nkx2.5的BMSC 1×10^(7)个(过表达组)、空载体BMSC 2×10^(7)个(空载体组)、BMSC 1×10^(7)个(BMSC组)分别与小鼠心肌细胞1×10^(7)个共培养24h;BMSC 2×10^(7)个作为对照组。45只小鼠随机均分为五组:假手术组仅做心脏暴露,不做其他处理;其他小鼠建立小鼠心肌梗死(心梗)模型,在模型缝合完毕24h后经尾静脉移植不含细胞的PBS(心梗模型未处理组)、BMSC(心梗模型BMSC组)、空载体BMSC(心梗模型空载体组)和过表达Nkx2.5的BMSC(心梗模型过表达组)各200μL。采用Western blot法检测肌间线蛋白(desmin)、α肌动蛋白(α-actin)、肌钙蛋白T(cTnT)和缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色观察小鼠梗死面积变化,免疫组织化学染色检测梗死组织desmin、α-actin、cTnT和Cx43表达。结果与对照组比较,BMSC组、空载体组、过表达组desmin、α-actin、cTnT、Cx43蛋白表达增加(P<0.05);与BMSC组和空载体组比较,过表达组desmin、α-actin、Cx43蛋白表达增加(P<0.05)。心梗模型过表达组梗死面积小于心梗模型未处理组、心梗模型BMSC组和心梗模型空载体组(P<0.05)。心梗模型过表达组desmin、α-actin、cTnT和Cx43表达高于心梗模型未处理组、心梗模型BMSC组和心梗模型空载体组。结论过表达Nkx2.5可以促进BMSC向心肌细胞分化。

冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的机制。方法 选取胰腺癌SW1990和Panc-1细胞株作为研究对象。采用细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况,蛋白印迹法检测内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-12(cleaved cystein aspartate specific proteinase-12,cleaved Caspase-12)、活化的(active)Caspase-3、cleaved Caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸多聚酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]的蛋白表达水平,实时荧光定量RCR检测GRP78、CHOP、Caspase-12的m RNA表达水平。结果 冬凌草甲素浓度和时间相关性抑制SW1990和Panc-1细胞增殖,冬凌草甲素可诱导SW1990和Panc-1细胞凋亡,可增加SW1990细胞中cleaved Caspase-3和cleaved PARP的蛋白表达水平(P<0.05);进一步研究发现冬凌草甲素能上调GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA及GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12的蛋白表达水平,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。且在内质网应激抑制剂4-PBA的作用下,冬凌草甲素处理后细胞凋亡率和GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、active Caspase-3蛋白表达水平均被逆转,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草素对SW1990和Panc-1细胞的促凋亡作用依赖于内质网应激的激活,冬凌草甲素可通过激活内质网应激介导胰腺癌细胞凋亡,为冬凌草甲素治疗胰腺癌中的抗肿瘤活性研究提供了新的思路。