降钙素基因相关肽调节核转录因子-κB信号转导对缺氧c-kit^+心脏干细胞凋亡的影响

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对缺氧环境下c-kit+心脏干细胞凋亡的影响。方法体外建立c-kit+心脏干细胞缺血缺氧模型,实验分为缺氧+CGRP组,缺氧+CGRP8-37(CGRP拮抗剂)组,细胞缺氧对照组,常氧细胞组,缺氧+BAY11-7082[核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂]组。采用免疫荧光检测细胞缺氧后NF-κB转位情况;采用Western blotting检测NF-κB通道蛋白的表达,同样方法检测CGRP干预后NF-κB转位及通道蛋白表达。同时用流式细胞仪检测CGRP干预后细胞凋亡率。结果在缺氧状态下,NF-κB信号通路被激活,NF-κBP65发生核转位(呈现红色荧光)。与细胞缺氧对照组比较,缺氧+CGRP组NF-κB相关信号蛋白P-I-κB、NF-κBP65及NF-κBP50表达减少(P<0.05);与缺氧+CGRP组比较,CGRP+CGRP8-37组上述NF-κB相关信号蛋白表达增加(P<0.05)。在细胞凋亡方面,与缺氧对照组比较,缺氧+CGRP组早、晚期细胞凋亡率均降低(P<0.05);与缺氧+CGRP组比较,缺氧+CGRP8-37组细胞早期凋亡增加(P<0.05)。结论 CGRP在调节NF-κB信号的同时抑制了缺氧环境下c-kit+心脏干细胞的凋亡。

降钙素基因相关肽对c-kit^+心脏干细胞生存活力的影响

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对缺氧状态下c-kit^+心脏干细胞(c-kit^+CSC)生存活力的影响及其可能的机制。方法体外建立细胞缺氧模型,实验随机分为缺氧细胞组、CGRP+缺氧细胞组、CGRP+CGRP8-37+缺氧细胞组和对照组(不缺氧细胞);通过CCK-8法检测细胞的活力,采用流式细胞仪和线粒体膜电位法来检测细胞凋亡。结果在缺氧状态下,缺氧细胞组细胞增殖活力较对照组下降,CGRP作用缺氧细胞后不同时间点,与缺氧细胞组比较,细胞增殖活力均增加(P<0.05),尤其以30 min和60 min最为明显;与CGRP+缺氧细胞组比较,CGRP+CGRP8-37+缺氧细胞组在30 min和60 min细胞增殖活力明显下降(P<0.05)。流式细胞仪结果显示:与对照组比较,缺氧细胞组早期凋亡率最高(P<0.05);与缺氧细胞组比较,CGRP+缺氧细胞组早期凋亡率降低(P<0.05);与CGRP+缺氧细胞组比较,CGRP+CGRP8-37+缺氧细胞组早期凋亡率增高(P<0.05)。线粒体膜电位结果显示:与缺氧细胞组比较,CGRP+缺氧细胞组红色荧光/绿色荧光比值增高(P<0.05);与CGRP+缺氧细胞组比较,CGRP+CGRP8-37+缺氧细胞组红色荧光/绿色荧光比值降低(P<0.05)。结论 CGRP能够促进缺氧状态下c-kit^+CSC增殖存活,抑制细胞早期凋亡。

c-KIT受体蛋白在犬皮肤肥大细胞瘤中的作用及其应用

皮肤肥大细胞瘤(MCT)是犬发生率较高的皮肤肿瘤类型之一,多发于老年犬,是危害犬类健康的重要疾病之一。c-KIT受体蛋白是一种跨膜蛋白,具有酪氨酸激酶活性,可调控肥大细胞的生长和分化。本文旨在阐明c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT中的作用及其应用,总结了c-KIT受体蛋白在肥大细胞增殖调控中的作用,深入探讨了c-KIT受体蛋白检测在犬皮肤MCT诊断中的应用价值,明确了c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT发生发展中的作用,同时也为进一步研究c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT中的发病机制提供了重要参考。

过表达微小RNA-21对c-Kit^+心脏干细胞增殖、迁移及分化的影响

目的:探讨转染微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对c-Kit^+心脏干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法:采用酶消化法结合免疫磁珠分选法培养c-Kit^+心脏干细胞,以Lipofectamine~2000为载体将miR-21模拟物(mimics)和其阴性对照(mimics negative control,MNC)分别转染至c-Kit^+心脏干细胞。实验分为正常对照(control)组(正常培养的心脏干细胞)、MNC组(转染MNC 48 h的细胞)和mimics组(转染miR-21 mimics 48 h的细胞)。qPCR检测各组细胞miR-21的表达情况,以CCK-8法和EdU法检测细胞增殖状态,qPCR及免疫荧光检测细胞分化情况,划痕实验观察细胞迁移能力。结果:成功获取c-Kit^+心脏干细胞,经流式细胞术鉴定其高表达c-Kit(90.8%),低表达CD45(0.6%)及CD34(0.5%);与control组相比,mimics组中miR-21表达量显著增高(P<0.05),MNC组中miR-21表达量与control组无明显差异。CCK-8和EdU实验结果发现与control组比较,mimics组中细胞增殖能力明显增加(P<0.05),MNC组中细胞增殖能力无明显变化;免疫荧光及qPCR结果表明3组心肌细胞谱系标志物Nkx2.5、CD31和α-平滑肌肌动蛋白水平无明显差异;细胞划痕实验结果发现,3组间细胞迁移能力无明显不同。结论:过表达miR-21可显著促进c-Kit^+心脏干细胞的增殖能力,但对细胞迁移及分化能力无明显影响。

利用c-kit^+骨髓间充质干细胞与心脏脱细胞骨架共培育心肌组织

背景:研究发现c-kit阳性骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞,可能成为理想的种子细胞。目的:验证利用c-kit+骨髓间充质干细胞及心脏脱细胞骨架培育心肌组织的可行性。方法:取成年大鼠心脏脱细胞后备用。取大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第8代后行c-kit富集,采用5μmol/L的5氮杂胞苷诱导2周后行二氢吡啶受体α2富集,然后继续培养行心肌分化鉴定或种植于心脏脱细胞骨架内行心肌组织培养。6周后,利用心肌细胞特异性蛋白表达及动作电位鉴定心肌细胞分化,利用免疫荧光染色分析新生心肌组织结构。结果与结论:第2次富集6周后,约60%的骨髓间充质干细胞表达心肌肌钙蛋白T、GATA结合蛋白4、连接蛋白43,电生理分析显示这些细胞可产生心肌细胞样动作电位,证实c-kit+骨髓间充质干细胞可特异分化为心肌细胞,种植于脱细胞心脏骨架后可形成排列有序的心肌组织。

心脏X综合征患者中性粒细胞/淋巴细胞比值与MR心肌首过灌注相关研究

目的:探索心脏X综合征(CSX)患者磁共振心肌首过灌注指标均值和变异系数与血液中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)的相关性。方法:53例CSX患者和43例不稳定型心绞痛(UAP)患者均行静息态磁共振心肌首过灌注检查和血常规检查。分析左心室16个节段心肌灌注参数[包括灌注指数、斜率/基线信号强度(CPI)、峰值时间、20%~80%峰值时间、最大信号强度/基线信号强度(MaxSIBL)],及16个节段的均值和变异系数,比较心肌灌注参数及血液NLR的组间差异,并分析两者的相关性。结果:与UAP组比较,CSX组心肌各节段灌注参数和均值没有差异,但16节段的20%~80%峰值时间变异系数和MaxSIBL变异系数较UAP组升高(P<0.05),血液中性粒细胞(N)和NLR也升高(P<0.05),且CSX组的血液NLR值与心肌平均灌注系数负相关。CSX患者16个节段中CPI及MaxSIBL存在显著组间差异。经两两比较,节段1-5、2-4、2-5、2-10、2-11、3-4、3-5、3-10、3-11、5-14、11-14间的CPI及MaxSIBL均存在显著差异,主要是由节段4、5、10和11灌注系数较低所致。结论:本研究发现CSX患者心肌首过灌注指标不均匀性较UAP患者增加,CSX患者心肌灌注系数与血液NLR呈负相关,说明炎症反应在CSX发生发展过程中具有重要意义。

中性粒细胞/淋巴细胞比值对冠状动脉粥样硬化性心脏病三支病变PCI术后患者预后的判断价值

目的:探讨中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)三支病变患者经皮冠状动脉介入术(PCI)术后预后评估中的价值。方法:回顾性收集2019年6月1日至2023年10月31日郑州大学第一附属医院收治并接受PCI的CAD三支病变患者的临床资料,根据NLR中位数分为高NLR组(n=209)和低NLR组(n=208),绘制Kaplan-Meier风险曲线,采用Cox回归分析NLR与不良结局的关系。结果:在完全调整模型中,NLR对于全因性死亡和主要不良心血管事件的HR(95%CI)分别为1.057(1.021~1.092)和1.031(1.004~1.055),而高NLR组的HR(95%CI)分别为2.730(1.244~6.009)和1.883(1.171~3.033)。NLR对于全因性死亡和主要不良心血管事件的曲线下面积(95%CI)、敏感度、特异度分别为0.823(0.782~0.863)、0.886、0.312和0.750(0.658~0.842)、0.692、0.324,具有良好的预测价值。结论:NLR可作为CAD三支病变患者PCI术后预后的可靠预测指标。

灵长类动物心脏衰老中的单细胞转录组生物信息学研究

目的:利用单细胞转录组数据探究灵长类动物心脏衰老的潜在分子机制。方法:利用高通量测序数据库Genome Sequence Archive中查找到的和“primate cardiac aging”有关的单细胞测序原始数据集CRA002689和CRA002810,通过细胞聚类、注释和差异表达基因分析筛选调控心脏衰老可能的信号通路。结果:过滤得到220915个细胞测序数据,其中年轻组心脏细胞78546个,年老组心脏细胞142369个,聚类成15个细胞亚群,纤维原细胞(Fib)细胞亚群占比最高。上皮细胞(Epi)中差异表达基因数目最多,而抗炎巨噬细胞(M2)中差异表达基因数目最少。差异表达基因显著富集于“supramolecular fiber organization”和“actin filament-based process”等通路。结论:上皮细胞在心脏衰老过程中发生了较大的变化,其可能在心脏衰老过程中起着重要的作用,上皮细胞的“supramolecular fiber organization”和纤维原细胞“actin filament-based process”通路与衰老密切相关。

心脏骤停患者红细胞分布宽度与神经功能预后的关系研究

目的探讨红细胞分布宽度(red cell distribution width,RDW)对心脏骤停(cardiac arrest,CA)患者神经功能预后的预测价值。方法回顾性分析2020年1月至2023年11月笔者科室收治的107例CA患者的病例资料、RDW及生化指标,根据脑功能分类量表(cerebral performance category,CPC)评估患者的神经功能预后,将患者分为神经功能预后良好组和预后不良组,比较两组患者临床资料及RDW的组间差异。采用多因素Logistic回归分析影响CA患者神经功能预后的危险因素。受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估RDW对神经功能预后不良的效能,并确定最佳阈值,按RDW的最佳阈值分为高RDW组(≥13.45%)和低RDW组(<13.45%),比较两组患者神经功能预后不良的发生情况。结果共107例CA患者纳入分析,其中神经功能预后不良73例,预后良好34例,神经功能预后不良的发生率为68.22%。神经功能预后不良组的RDW、心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)时间、急性生理与慢性健康评分Ⅱ、年龄、丙氨酸转氨酶、血钠明显高于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示年龄、RDW、CPR时间是预测神经功能预后不良的独立危险因素(P<0.05)。RDW预测CA患者神经功能预后不良的曲线下面积为0.766,当RDW最佳阈值为13.45%时,敏感度为73%,特异性为71%。高RDW组患者的神经功能预后不良发生率为84.13%,明显高于低RDW组的45.45%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RDW升高是CA患者神经功能预后不良风险增加的独立危险因素,具有一定的预测价值。

C-kit^+心脏干细胞治疗缺血性心脏病:研究现状及面临挑战和发展前景

背景:研究发现C-kit+心脏干细胞具有高度自我更新能力,能够特异性分化为心脏结构细胞,是目前被认为最有希望以完全心肌再生应用于缺血性心脏病及其他终末期心脏病替代治疗的干细胞类型。目的:就C-kit+心脏干细胞的发现、来源、特性,心脏干细胞治疗缺血性心脏病的历史和现状,目前心脏干细胞治疗缺血性心脏病存在的问题及可能的解决方法作一综述,从而加强对C-kit+心脏干细胞特性的理解,以便更好地预测其生物学行为并解决其修复心肌的相关问题。方法:应用计算机检索Pub Med数据库中2003年1月至2014年6月关于心脏干细胞的文献,在标题和摘要中以"stem cell,C-kit+cardiac stem cells,cardiac infarction"为检索词进行检索。选择文章内容与C-kit+心脏干细胞有关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文献,最终选择38篇文献进行综述。结果与结论:众多基础实验研究均证明C-kit+心脏干细胞确实能够明显改善动物模型的心功能,改善心室重构,并且有关临床试验也已经证明其能够改善缺血性心脏病患者的心功能和生活质量。虽然试验中发现移植细胞很快流失,并不能发挥修补替代纤维瘢痕的作用,但是其对心脏的有利作用并不随着种子细胞的流失而停止,而是能够长期存在,主要考虑跟各种细胞因子的旁分泌作用有关。目前应用基因修饰种子细胞改善其移植后驻留率和分化相关问题已经取得了一些积极成果,但是仍然有很多问题需要进一步研究。

8周运动预适应增强脂肪干细胞治疗心肌梗死大鼠的效果

背景:干细胞移植是心肌梗死的崭新疗法,然而梗死区域极其恶劣的微环境造成干细胞存活率低下并导致远期疗效甚微。运动预适应是一种通过运动诱导机体产生内源性保护效应的方式,可作为心脏康复预防与治疗的新策略。目的:评估运动预适应是否能够增强大鼠心肌梗死后脂肪干细胞移植的心脏保护效应,探讨血管生成在其中的作用机制。方法:6周龄雄性SD大鼠随机分为对照组、造模组、干细胞组以及干细胞运动组。利用冠状动脉闭塞术制作急性心肌梗死模型,对照组同期行假手术;干细胞运动组于造模前进行8周有氧运动,造模后30 min进行脂肪干细胞移植;干细胞组仅进行脂肪干细胞移植。干细胞移植后1 d和7 d,利用免疫印迹法测定心肌总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)、总内皮型一氧化氮合酶(t-eNOS)和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白表达量,计算p-Akt/t-Akt和p-eNOS/t-eNOS比值;4周后利用彩色多普勒超声诊断系统检测心脏结构与功能以及心肌血流量,TTC染色法检测心肌梗死面积,Masson染色法检测心肌间质胶原沉积,免疫荧光染色法测定心肌毛细血管密度,TUNEL染色法评估心肌细胞凋亡。结果与结论:(1)干细胞移植后4周:与对照组比较,造模组左心室缩短分数、左心室射血分数、心肌毛细血管密度和心肌血流量下降(P<0.05),心肌梗死面积、胶原容积分数和细胞凋亡增加(P<0.05);与造模组比较,干细胞组上述指标(除左心室缩短分数和左心室射血分数外)得到改善(P<0.05);与干细胞组比较,干细胞运动组以上各参数进一步改善(P<0.05)。(2)干细胞移植后1 d:与对照组比较,造模组t-Akt、p-Akt、VEGF、t-eNOS、p-eNOS蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt、p-eNOS/t-eNOS比值均无显著性变化(P>0.05);与造模组比较,干细胞组上述指标均无显著性变化(P>0.05),干细胞运动组磷酸化p-Akt蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt比值上调(P<0.05)。(3)干细胞移植后7 d:与对照组比较,造模组p-Akt、VEGF、p-eNOS蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt、p-eNOS/t-eNOS比值下降(P<0.05);与造模组比较,干细胞组各参数均无显著性变化(P>0.05),干细胞运动组p-Akt、VEGF、p-eNOS蛋白表达量以及p-Akt/t-Akt、p-eNOS/t-eNOS比值升高(P<0.05)。结果表明:运动预适应可增强脂肪干细胞对心肌梗死大鼠心脏重塑的治疗效果,其机制与促进心肌血管生成并增加血流灌注有关。

嵌合抗原受体T细胞治疗对心脏的影响

嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗是一种通过体外基因工程改造自身T细胞,使其表达靶向癌细胞受体的肿瘤免疫治疗手段,但此方法具有心脏毒性。近期研究表明使用含有编码成纤维细胞激活蛋白受体的信使RNA的脂质纳米颗粒可在体内产生CAR-T细胞,这种细胞具有瞬时抗纤维化作用,为心肌纤维化的治疗迎来了突破性进展。该文介绍CAR-T细胞治疗相关心脏毒性的机制、临床表现、治疗现状和抗心肌纤维化作用,为预防、监测和治疗提供建议。

Methocult M3534培养基培养小鼠c-kit^+心脏干细胞向心肌细胞和窦房结细胞分化的结果观察

目的观察Methocult M3534(简写为M3534)培养基培养小鼠c-kit^+心脏干细胞(CSCs)向心肌细胞与窦房结细胞分化的结果。方法首先测定成年小鼠c-kit^+CSCs的自我增殖能力和多向分化潜能,然后置于CSCs常规培养基(对照组)或含1%M3534的培养基(M3534组)中培养。培养2周或3周后分别通过RT-PCR、细胞免疫荧光染色检测心肌细胞特异标记物(Gata4、cTnI、Serca2a和α-SA)和窦房结细胞特异标记物(Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45)的基因和蛋白;应用Western blotting法检测两组中Serca2α、Hcn4、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-Erk)和总细胞外调节蛋白激酶(t-Erk)蛋白(检测Erk信号通路在细胞分化中的作用),并比较。结果分离纯化的c-kit^+ CSCs具有自我增殖和多向分化能力。培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit^+CSCs心肌细胞特异标记物Gata4、cTnI、Serca2a和α-SA基因表达升高,Serca2α、α-SA阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述心肌细胞特异标记物培养3周高于培养2周时(P均<0.05)。培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit^+ CSCs窦房结细胞特异标记物Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45基因表达升高,Hcn4阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述窦房结细胞特异标记物培养3周高于培养2周时((P均<0.05)。培养3周时,与对照组比较,M3534组Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2升高(P均<0.05);M3534组培养2周时Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2高于培养3周时(P均<0.05)。结论与CSCs常规培养基比较,M3534培养基培养的c-kit^+CSCs向心肌细胞和窦房结细胞分化的效能更高,分化过程中可能有Erk通路参与。

诱导多能干细胞在遗传性心脏疾病模型中的应用与机制

背景:遗传性心脏病具有较高的患病率及死亡率,至今其发病机制仍未阐明。尽管部分遗传性心脏病已经建立了相应的动物模型,为研究遗传性心脏病的发病机制提供了一定的基础,但是由于物种间的差异等原因显著降低了这些研究结果的价值,因此,需要全新的模型来探索其发生发展过程。目的:综述了目前诱导多能干细胞在构建多种遗传性心脏病模型中的作用和潜在的应用前景。方法:第一作者于2023年1-3月期间应用计算机在Pub Med数据库中检索近13年的相关文献,以“induced pluripotent stem cell,inherited heart disease,congenital heart disease”等为检索词,最终纳入76篇文献进行分析。结果与结论:自2007年诱导多能干细胞从人体体细胞中诱导建立以来,已有许多针对疾病特异性诱导多能干细胞的研究报道。由于疾病特异性诱导多能干细胞能够再现疾病表型,因此有望成为体外疾病建模的一种新研究工具,用于分析发病机制和研制辅助药物。在心血管遗传性疾病的研究方面,从患者特异性诱导多能干细胞分化得到的心肌细胞中含有参与心脏发育异常相关的基因突变,因此,其可作为一种全新的工具研究遗传性心脏病的潜在机制。到目前为止,诱导多能干细胞来源心肌细胞已被广泛用于多种遗传性心脏疾病的分子机制研究,如心脏电生理性疾病、心肌病以及一些综合征性遗传性心脏疾病。

温胃阳汤对功能性消化不良大鼠肥大细胞活化及SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:基于肥大细胞活化及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/受体酪氨酸激酶c-Kit信号通路探讨温胃阳汤治疗大鼠功能性消化不良的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激加不规则喂养复合番泻叶法建立大鼠功能性消化不良模型,模型建立后,空白组及模型组灌胃给予生理盐水,温胃阳汤低、中、高剂量组和雷尼替丁组则分别用温胃阳汤(0.743 g/mL、1.485 g/mL和2.970 g/mL)及盐酸雷尼替丁胶囊(3 g/L)灌胃。治疗结束后,以碳墨推进法测定小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察大鼠十二指肠组织肥大细胞并计数;ELISA测定大鼠十二指肠中肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)和组胺(histamine,HA)的含量;RT-qPCR检测十二指肠中SCF和c-Kit mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测十二指肠中SCF和c-Kit蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,温胃阳汤治疗显著提高大鼠的小肠推进率(P<0.05);ELISA结果显示,温胃阳汤治疗可减少大鼠十二指肠黏膜组织肥大细胞数量及MCT和HA含量(P<0.05);Western blot和免疫组化结果表明,温胃阳汤治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF蛋白的表达水平(P<0.05),增加SCF和c-Kit阳性细胞数(P<0.05);RT-qPCR结果显示,WWYD治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.01)。而且,小肠推进率分别与MCT和HA含量呈负相关,与SCF和c-Kit的表达呈正相关。结论:温胃阳汤能促进大鼠十二指肠动力,其作用机制可能与抑制大鼠十二指肠MCT和HA的生成,及激活SCF/c-Kit信号通路有关。

中药保护心脏微血管内皮细胞在慢性冠脉综合征治疗中的研究进展

心脏微血管内皮细胞是心脏微血管系统的重要组成部分,在冠状动脉粥样硬化、急性心肌梗死后无复流及再灌注损伤、微血管性心绞痛、缺血性心律失常、心肌梗死后心力衰竭等慢性冠脉综合征(CCS)的发生发展的过程中具有重要作用。本研究基于当前证据对心脏微血管内皮细胞与CCS的发病机制以及中药复方及单体抑制心脏微血管内皮细胞损伤的相关研究机制进行综述,以期为临床提供参考。

过表达整合素连接激酶促进心脏c-Kit^+细胞的存活和增殖

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)过表达对心脏c-Kit^+细胞存活和增殖的影响,以及移植ILK过表达的心脏c-Kit^+细胞改善心肌梗死(MI)大鼠心功能的作用。方法:从新生SD大鼠分离培养心脏c-Kit^+细胞,构建含人ILK全长的腺病毒载体并感染心脏c-Kit^+细胞。感染48 h后,应用细胞计数和CCK-8法测定细胞活力和增殖,并通过Western blot法检测c-Kit^+细胞中增殖相关蛋白cyclin D1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。40只8周龄SPF级大鼠经冠状动脉结扎建立MI模型,结扎15 min后于梗死区及梗死边缘区分3点通过心肌注射移植心脏c-Kit^+细胞。采用随机数字表法将大鼠分为假手术组(sham组)、心梗+生理盐水注射组(MI组)、心梗+感染空载体的c-Kit^+细胞注射组(Ad-null-c-Kit^+cell组)和心梗+感染携带ILK腺病毒载体的c-Kit^+细胞注射组(ILKc-Kit^+cell组),每组10只。术后2周,免疫组化法检测梗死区和梗死边缘区c-Kit的表达;术后4周,通过血流动力学检测心脏功能。结果:过表达ILK促进了心脏c-Kit^+细胞的存活和增殖(P<0.05)。过表达ILK的心脏cKit+细胞中cyclin D1和PCNA的表达明显增加(P<0.05)。细胞移植2周后,ILK-c-Kit^+cell组心肌组织中c-Kit表达明显增加(P<0.05);细胞移植4周后,ILK-c-Kit^+cell组大鼠心功能改善比Ad-null-c-Kit^+cell组更明显(P<0.05)。结论:过表达ILK通过提高cyclin D1和PCNA的表达,促进了心脏c-Kit^+细胞的存活和增殖。ILK-c-Kit^+细胞移植能更好地改善MI大鼠的心功能。

姜黄素对TGF-β1诱导的心脏成纤维细胞表达NGF、IL-1β、TNF-α的影响及机制研究

目的观察姜黄素对转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的心脏成纤维细胞表达神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)和炎症因子的影响,并探讨其可能的作用机制。方法在体外通过TGF-β1刺激心脏成纤维细胞,模拟心肌梗死(Myocardial in-farction,MI)模型。分组为Control组、TGF-β1组、美托洛尔(Myto)组,姜黄素微、低、中、高剂量(CCM-5、10、20、40)组。造模时间为48 h,药物处理时间为48 h。使用RT-qPCR检测NGF、Hes1、Hey1、NICD的mRNA表达水平,Western blot法检测NGF、Hes1、Hey1、NICD的蛋白表达水平,Elisa检测细胞上清中炎症因子IL-1β、TNF-α含量。结果与Control组比较,TGF-β1组细胞中NGF、Hes1、Hey1、NICD的mRNA及其蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞上清中IL-1β、TNF-α含量明显升高(P<0.05)。与TGF-β1组比较,CCM-5组、CCM-10组、CCM-20组、CCM-40组的NGF、Hes1、Hey1、NICD的mRNA及蛋白表达水平与IL-1β、TNF-α含量均有不同程度的降低,部分组间比较差异有统计学意义(P<0.05),并且这些指标具有姜黄素浓度依赖性。结论姜黄素可以下调TGF-β1诱导的心脏成纤维细胞中NGF和IL-1β、TNF-α的表达,具有抗交感神经重构和抗炎作用,其机制可能与Notch信号通路的活化有关。

单细胞测序揭示心脏移植物中树突状细胞和B细胞的抗原提呈特性

目的探讨心脏移植物中树突状细胞(DC)和B细胞的抗原提呈特性。方法将BALB/c小鼠的心脏移植到C57BL/6J小鼠腹腔内,术后5 d(急性排斥反应早期)提取并流式分选心脏移植物中的CD45+细胞,进行单细胞RNA测序。以心脏移植物中的DC和B细胞的亚群为主要对象,通过生物信息学分析和流式细胞术,研究其在心脏移植后变化趋势、抗原提呈能力及其与T细胞之间的胞间通讯情况。采用基因本体(GO)功能富集差异分析佐证细胞亚群特异性功能和细胞亚群注释可信度。结果生发中心样B细胞(GC-L B)是急性排斥反应期心脏移植物中增幅最大、比例高达87%的B细胞亚群,经典DC(cDC)2是心脏移植急性排斥期间唯一大量增多的DC亚群,占44%,是心脏移植后与T细胞的胞间通讯中占据最高通讯强度的DC亚群;单核样DC(moDC)与记忆性B细胞(MBC)是未心脏移植中T细胞输入信号的主要发出者,而在心脏移植后急性排斥反应期中,转变为cDC2与GC-L B;其中MBC与GC-L B分别是心脏移植前后的主要T细胞输入信号来源。结论在未移植心脏和移植心脏指向T细胞的胞间通讯中,与DC相比,B细胞均占据更高的通讯数量和权重,推测在心脏移植急性排斥反应早期,B细胞的抗原提呈活动比DC更加活跃,强度更大。

初始T1值及细胞外容积分数对心脏淀粉样变的诊断价值:Meta分析

目的 采用Meta分析方法探讨初始T1值及细胞外容积分数(extracellular volume fraction,ECV)对心脏淀粉样变性(cardiac amyloidosis,CA)的诊断价值。材料与方法检索数据库PubMed、 Embase、 Cochrane Library、 Web of Science、Wanfang Database、CBM、VIP及CNKI中有关探讨初始T1值及ECV对CA诊断价值的文献,检索时间为从建库开始至2022年11月。由2名研究者单独完成文献筛选,提取纳入文献的相关资料并进行质量评估。应用Revman 5.3、Stata 16.0和Meta-Disc1.4软件进行偏倚风险评价和统计分析,进行异质性、发表偏倚分析。使用敏感性分析验证Meta分析结果的稳定性与可靠性。结果 最终纳入文献12篇,共1 045例患者。Meta分析显示初始T1值诊断CA的合并敏感度(sensitivity,Sen)、特异度(specificity,Spe)、阳性似然比(positive likelihood ratio,PLR)、阴性似然比(negative likelihood ratio,NLR)、诊断比值比(diagnostic odds ratio,DOR)、曲线下面积(area under the curve,AUC)和95%置信区间(confidence interval,CI)分别为86%(95%CI:82%~89%)、86%(95%CI:80%~91%)、6.2(95%CI:4.2~9.3)、0.16(95%CI:0.12~0.22)、38(95%CI:19~75)、0.92(95%CI:0.90~0.94);ECV诊断CA的Sen合并、Spe合并、PLR合并、NLR合并、DOR合并、AUC分别为90%(95%CI:83%~94%)、90%(95%CI:83%~94%)、8.8 (95%CI:5.3~14.6)、0.11 (95%CI:0.07~0.19)、79 (95%CI:38~162)、0.95 (95%CI:0.93~0.97)。结论 初始T1值和ECV对CA具有较高的诊断价值,可为CA的早期诊断提供影像学依据。