纳豆芽孢杆菌T1生长必需因子的研究

从腐烂稻草上分离筛选出一株活性较高的芽孢杆菌T1,经鉴定为纳豆芽孢杆菌,为了更好的开发利用此菌株,对该菌株进行生长必需因子的试验,结果表明T1在合成培养基添加维生素和核酸碱基均不生长,加不同种类的氨基酸都能生长,在完全培养基上生长特别好,对蛋白胨的需要量有一定的要求,添加1%的蛋白胨生长好,高于2%的菌体生长好,对孢子的快速形成有一定的影响,小于0.1%的菌体生长缓慢,甚至不生长。摇瓶发酵培养基蛋白胨2%,葡萄糖2%比例最佳。

椎间盘退变患者髓核组织中HtrA1的表达及其与MMPs的关系

目的观察椎间盘退变患者髓核组织中高温必需因子A1(HtrA1)的表达及其与基质金属蛋白酶(MMPs)的关系。方法 78例接受椎间盘髓核切除患者,其中年轻脊柱骨折患者(改良Thompson分级Ⅰ级)10例,椎间盘退变患者68例(改良Thompson分级Ⅱ级22例、Ⅲ级24例、Ⅳ级22例)。采用real-time PCR和Western blotting法分别检测椎间盘髓核组织中的Htr A1及MMP-1、3、7、9、13 mRNA和蛋白,并采用Pearson法分析Htr A1和MMP-1、3、7、9、13的相关性。结果改良Thompson分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级患者椎间盘髓核组织中HtrA1 mRNA分别为0.56±0.49、0.70±0.45、1.47±0.86、4.10±1.17,蛋白分别为0.16±0.09、0.52±0.07、1.21±0.26、3.10±0.17,两两相比P均<0.05。不同改良Thompson分级患者椎间盘髓核组织中MMP-1、3、13的mRNA、蛋白表达两两相比P均<0.05。HtrA1 mRNA与MMP-1、3、13 mRNA表达呈正相关(r^2分别为0.144 8、0.240 6、0.869 5,P均<0.01)。结论椎间盘髓核组织中HtrA1的表达随椎间盘退变程度的升高而升高,且与MMP-1、3、13的表达有关。

HTRA1多态性与汉族人群湿性年龄相关性黄斑变性遗传易感性的关系

目的:探讨高温必需因子A-1(HTRA1)多态性与汉族人群湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)遗传易感性的关系。方法:选取本院2014-05/2017-01收治的汉族湿性AMD患者201例,汉族正常健康者201例,分别设为病例组和健康组。采集研究对象外周静脉血样并提取基因组DNA,利用Sequenom质谱分析平台对HTRA1基因的rs11200638、rs2248799位点进行基因型检测,分析HTRA1多态性与湿性AMD遗传易感性的关系。结果:两组研究对象rs11200638、rs2248799位点的基因型等级分布比较,差异均有统计学意义(P<0.01),病例组AA、TT的频率分别为51.2%、57.7%,健康组AA、TT的频率分别为20.9%、28.4%,前者均明显高于后者,差异均有统计学意义(P<0.01);病例组rs11200638位点危险性等位基因A与rs2248799位点危险性等位基因T分布的频率分别为69.7%、73.6%,健康组分别为45.8%、52.5%,前者均明显高于后者,差异均有统计学意义(P<0.01)。rs11200638基因型AA、AG的OR值分别为5.36与3.45,是湿性AMD发病的危险因素(P<0.01);rs2248799基因型TT、TC的OR值分别为2.36与1.98,是湿性AMD发病的危险因素(P<0.01)。结论:HTRA1基因rs11200638和rs2248799多态性与湿性AMD发病关系显著,基因型AA、TT与汉族人群湿性AMD患病风险关系密切,其频率增高可增加湿性AMD患病风险。

HtrA4在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及与滋养细胞缺氧的相关性

目的观测高温必需因子A4(HtrA4)在子痫前期(PE)孕妇胎盘组织中的表达情况,探讨其与滋养细胞缺氧和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的相关性。方法获取基因表达综合(GEO)数据库中PE孕妇胎盘组织芯片数据,分析差异表达基因(DEGs)及HtrA4表达水平。采用Western blot和qRT-PCR法验证HtrA4在PE孕妇胎盘组织中的表达水平。Bewo滋养细胞经HtrA4小干扰RNA(siRNA)(HtrA4 siRNA干扰组)或阴性对照siRNA(阴性对照组)转染后,分别采用MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭活性。按1×10^(6)个/孔接种细胞,在37℃、20%O_(2)、5%CO_(2)条件下常规培养48 h后,分为HIF-1α激活组、低氧组和对照组。HIF-1α激活组:采用含200μM HIF-1α激活剂氯化钴的细胞培养基,37℃、20%O_(2)、5%CO_(2)继续培养24 h;低氧组:37℃、1%O_(2)、5%CO_(2)继续培养24 h;对照组:继续常规培养24 h。另设立缺氧条件下的HIF-1α抑制组,即细胞经HIF-1αsiRNA干扰后,按1×10^(6)个/孔接种细胞,常规培养48 h,再在37℃、1%O_(2)、5%CO_(2)条件下培养24 h。分析HtrA4在缺氧条件下表达量及与HIF-1α表达的相关性。结果共得到13个DEGs。HtrA4在芯片数据和PE孕妇胎盘组织中表达水平均上调(均P<0.05)。与阴性对照组比较,HtrA4 siRNA干扰组侵袭活性下降(P<0.05),但各组间24、48和72h细胞增殖活性比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。与对照组比较,HIF-1α激活组和低氧组HtrA4和HIF-1α蛋白和mRNA表达水平均上调(均P<0.05)。与低氧组比较,HIF-1α抑制组HtrA4和HIF-1α蛋白和mRNA表达水平均下调(均P<0.05)。Pearson相关分析发现各组细胞HtrA4与HIF-1αmRNA表达水平呈正相关(r=0.87,P<0.01)。结论HtrA4在PE孕妇胎盘组织中表达上调,能促进滋养细胞的侵袭能力,其表达水平与细胞缺氧及HIF-1α表达水平相关,可能在PE发展中起重要作用。

肝脏特异性敲除核因子-κB必需调节蛋白基因对Myc过表达诱导的小鼠原发性肝癌发生发展的影响

目的:探讨IκB激酶(IKK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对Myc过表达诱导的小鼠原发性肝癌发生发展的影响。方法:利用转基因小鼠将LAP-tTA小鼠与Alb-cre小鼠杂交,再与NEMO f1(NEMO为NF-κB必需调节蛋白)小鼠杂交,以产生LAP-tTA+/Alb-cre+/NEMO fl/wt小鼠,最后与tetO-Myc+小鼠杂交。本实验包括4组:(1)WT小鼠;(2)NEMOΔLPC小鼠(肝细胞中NEMO敲除,无Myc过表达);(3)Myc LAP-tTA小鼠(Myc过表达,无NEMO敲除);(4)Myc LAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠(肝脏Myc过表达和NEMO敲除)。记录小鼠的生存曲线,观察肝脏大体形态。苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理结构,免疫组织化学染色、蛋白质印迹法(Western blot)检测肝脏肿瘤指标及肝祖细胞指标、定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测相关蛋白的mRNA水平。使用t检验比较独立样本组与相应组。结果:小鼠带瘤生存曲线显示Myc LAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠中位生存期明显短于Myc LAP-tTA小鼠(中位生存期M/P 5056 d比83 d,P<0.01);Myc LAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠对比Myc LAP-tTA小鼠,谷草转氨酶[(739.40±35.61)U/L比(441.50±78.79)U/L,t=2.464,P<0.05]、碱性磷酸酶[(3142.0±287.6)U/L比(1702.0±278.8)U/L,t=3.129,P<0.01]、γ-谷氨酰基转移酶[(101.70±12.82)U/L比(37.31±9.34)U/L,t=3.927,P<0.01]和总胆红素[(1.281±0.232)mg/dl比(0.618±0.051)mg/dl,t=3.889,P<0.01]均显著升高,且差异有统计学意义;Western blot检测显示细胞角蛋白19(CK19)、性别决定区Y框蛋白9(SOX9)水平在Myc LAP-tTA/NEMOΔLPC较Myc LAP-tTA组小鼠肝脏亦明显升高;肝祖细胞标志物如角蛋白(CK19,4.336±1.970比0.680±0.234,t=1.843,P<0.01)、CK7(3.884±0.338比2.370±0.525,t=2.422,P<0.01)、甲胎蛋白(AFP,3614.0±2070.0比1399.0±319.9,t=1.057,P<0.01)、上皮细胞黏附分子(EpCAM)的mRNA水平在Myc LAP-tTA/NEMOΔLPC较Myc LAP-tTA组小鼠肝脏显著增高(7.900±0.997比3.084±0.711,t=3.943,P<0.01)。结论:肝细胞中特异性敲除NEMO从而抑制经典的IKK/NF-κB信号通路,可促进肝肿瘤的发生发展,并诱导混合型肝细胞癌-胆管细胞癌的发生。白细胞介素(IL)-6/信号转导与转录激活因子-3(STAT3)通路与细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路可能参与混合型肝癌的发生发展。

整Chebyshev问题及其应用

整Chebyshev问题是要寻找一个次数不超过n的非零整系数多项式,使其在给定区间上的绝对值的最大值(即上确界范数)最小,并分析当n趋于无穷时,该最小上确界范数的变化趋势.本文概述了该问题的研究历史、方法及其推广和应用,并讨论了两类长度小于4的区间上的整Chebyshev问题.我们发现上述区间上具有最小上确界范数的n(当n足够大时)次整系数多项式的部分因子都具有一种特定的性质,并猜测该性质对任意同类区间都成立.

马铃薯StRcd1基因克隆及其在非生物胁迫下的表达分析

Rcd1(细胞分化必需因子)蛋白是CCR4-NOT蛋白复合体的主要亚基,是真核生物中发现的最保守的蛋白质之一,其同源物在多种分化组织中表达。为了解Rcd1蛋白在马铃薯应答非生物胁迫中的功能,以马铃薯品种‘青薯9号’为材料,克隆了StRcd1基因,分析了在模拟干旱胁迫和盐胁迫下该基因的表达模式。结果表明,StRcd1的全长为1 223 bp,开放阅读框为897 bp,编码298个氨基酸,亚细胞定位于细胞核。StRcd1在马铃薯块茎中高表达,响应干旱和盐胁迫应答,但不同组织中表达模式存在差异,在根部12 h的盐胁迫和24 h的干旱胁迫下表达量最高,分别为对照的5.96倍和9.37倍。推测StRcd1在马铃薯响应干旱和盐胁迫应答中发挥重要作用。