29株食源性志贺氏菌病原学特征和耐药特性分析

目的:分析29株食源性志贺氏菌的病原学特征和耐药特性。方法:利用《食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验》(GB 4789.5—2012)中的血清学方法对29株食源性志贺氏菌进行分群血清凝集实验;利用高通量测序技术对菌株进行全基因组测序和生物信息学分析,确定其群型和血清型;利用微量肉汤稀释法对菌株进行药敏实验。结果:通过血清学鉴定和wgSNP分析,29株食源性志贺氏菌中仅有2株为福氏志贺氏菌,其余27株均为宋内氏志贺氏菌;29株菌均对氨苄西林、氨苄西林舒巴坦、氯霉素、环丙沙星、头孢噻肟、萘啶酸、复方新诺明和四环素有不同程度的耐药特性,对复方新诺明和萘啶酸耐药率最高(100.00%),对头孢噻肟和环丙沙星的耐药率较低,分别为6.90%和3.45%。结论:临沂市食源性志贺氏菌流行优势菌株为宋内氏志贺氏菌,耐药形势严峻,针对志贺氏菌感染病例应采用更加个性化的治疗方案。

一株可裂解动物源性多重耐药志贺氏菌的噬菌体分离鉴定及其生物学特性研究

从鸡的肠道内分离鉴定多重耐药志贺氏菌(Shigelle),纯化获得可侵袭、裂解该志贺氏菌的噬菌体,并研究其生物学特性。以养殖场病鸡肠道中分离的志贺氏病原菌为宿主,筛选鉴定噬菌体,聚乙二醇沉淀浓缩噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,双层平板法测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱耐受性和热稳定性,测定噬菌体对多重耐药致病性志贺氏菌的裂解效果。通过上述方法,共筛选到26株志贺氏菌分离株,分别命名为BS1~BS26。以志贺氏菌BS26为宿主菌分离得到一株裂解性噬菌体并命名为噬菌体PSF26,鉴定为有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,噬菌体对福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)和宋内志贺氏菌(Shigella sonnei)分离株均有裂解作用。噬菌体PSF26的最佳感染复数为0.1,感染周期为90 min,包括75 min的潜伏期和15 min的爆发期,裂解量为(58±17)pfu/cell。噬菌体PSF26在pH 5~8,温度0~40℃条件下能保持较高活性,对宿主菌的抑菌圈直径为(11.33±1.53)mm。结果表明,噬菌体PSF26爆发期短,裂解量高,有较好的酸碱、温度耐受性,对多重耐药性福氏和宋内志贺氏菌有良好的作用效果,为利用噬菌体防控饲养动物中食源性致病菌感染和饲用抗生素替代技术研发提供参考。

食品中志贺氏菌快速检测免疫磁分离样品前处理技术研究

采用Protein A磁珠与志贺氏菌混合血清制备抗志贺氏菌多靶标免疫磁珠,建立了25 mL志贺氏菌免疫磁分离体系,并通过测定代表性食品(牛奶、水果、面包)中志贺氏菌生长曲线,设计食品样品前处理可行性技术方案,与环介导等温扩增(LAMP)检测技术整合进行了食品中痕量志贺氏菌快速检测验证。结果显示:多靶标免疫磁珠能同时捕获福氏、宋内氏、鲍氏、痢疾氏等4种志贺氏菌,捕获效率为35%~94%,非特异性小于1%(金黄色葡萄球菌10%除外),1~2×10^(1)CFU志贺氏菌在25 mL纯牛奶、25 g梨/面包+25 mL志贺氏菌增菌肉汤基础中,通过6 h培养+免疫磁分离的策略可获得10^(2)CFU/mL以上的志贺氏菌,将志贺氏菌检测样品前处理时间由48 h缩短至8 h内,并能够满足后续检测技术检出限的需求,实现了食品中志贺氏菌的快速检测。

牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立

通过用超声波破碎的宋内氏志贺氏菌和福氏志贺氏菌的菌体碎片为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得4株能稳定分泌抗志贺氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株制备单抗,并用胶体金标记。同时抗志贺氏菌的兔多抗和驴抗鼠抗体(二抗)分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),研制了志贺氏菌胶体金快速检测试纸条。结果显示试纸条的灵敏度为105mL-1,并只与两株志贺氏菌有阳性反应外,而与其它23株常见的细菌无交叉反应。同时在检测添加有阪崎肠杆菌和长双歧杆菌的牛奶样品中,结果显示试纸条的灵敏度为106mL-1。志贺氏菌免疫胶体金试纸条的建立,为加强食品中志贺氏菌的检测工作,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。

4种分离培养基检测志贺氏菌效果比较

志贺氏菌是一类具有高度传染性的肠道致病菌。文中基于GB 4789.5—2012《志贺氏菌检验》标准,比较了4种分离培养基检测志贺氏菌的效果。通过4种分离培养基对福氏志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌的回收率、最低检出限及对不同样品检测效果的比较,对不同培养基的检测效果进行评价。结果显示4种分离培养基最低检出限相近,显色培养基01检测特异性优于其他3种;针对实际检测样品,应灵活选择培养条件,以提高检测的准确性及效率。

冬季检出一株福氏志贺氏菌4b血清型

2002年12月,从一例急牲腹泻标本中检出1株志贺氏菌,经形态、生化、血清学试证实该菌为福氏志贺氏菌4b血清型,系临床少见菌。现报告如下:1临床资料患者,女,14岁,2002年12月13日因高热(40.2℃)、头痛、腹泻(10余次/日)、双膝疼痛来院就诊。大便初为水样,继而为粘液便。

鸡志贺氏菌病在我国的发现及其病原特性研究

鸡群中发生了一种新的急性传染病 ,该病主要发生于幼龄雏鸡 ,主要特征为脓血痢疾和明显的肠道出血。发病率 10 0 % ,死亡率 3 84 %～ 33 3%。各种微生物学和血清学试验结果表明 ;该病由鲍氏志贺氏杆菌所引起 动物攻毒试验表明该菌对雏鸡具有很强的致病作用 ,症状和病理变化与自然病例表现相同 ,攻毒后 7d致死率分别达 5 0 %～10 0 %。药敏试验表明该菌对喹诺酮类药物和头孢类及其他抗生素类药物均敏感 。

药物对福氏志贺氏菌代谢抑制的微量热法研究

Bacterial growth thermograms of fungistatic action using a thermal activity monitor have been determined. The growth rate constants at different concentration drugs and the critical growth concentrations of the drug have also been calculated.

牛奶样品中志贺氏菌的快速PCR检测技术研究

建立牛奶中快速检测志贺氏菌的有效方法。根据GenBank公布的志贺氏菌ipaH基因的保守序列设计特异性引物,筛选合适的DNA模板制备方法,采用快速常规PCR和定量实时PCR结合,对培养液中及牛奶阳性样品中的志贺氏菌进行检测,检测敏感度可达到2CFU/ml,检出时间小于20h。新建的PCR方法具有特异性好,灵敏度高等特点,适用于快速、准确检测牛奶中志贺氏菌的需要。

鸡志贺氏菌感染的血清流行病学调查

利用研制的鸡志贺氏菌平板凝集抗原及微量平板凝集试验,对我国河南、山东等不同地区35家鸡场具有拉稀病史的670只鸡血清灭活样品进行了检测.通过检测对鸡志贺氏菌病的发病率、流行地区、品种、日龄及其混合感染等进行血清流行病学调查.结果表明:我国部分地区存在有鸡志贺氏菌感染,其血清抗体阳性率较高,达28.3%(155/547)～33.7%(226/670),已远远超过鸡白痢鸡伤寒(1.4%).目前该病在我国部分地区已广泛流行,不同品种和日龄的鸡均可发生,但血清阳性率存在显著差异,其中固始鸡和罗曼鸡血清阳性率高于其他品种,幼雏血清阳性率高于成鸡.鲍氏血清型阳性率高于痢疾型,并以二者混合感染为主,而该病与鸡白痢鸡伤寒的混合感染很少发生.

志贺氏菌研究及其快速检测技术发展现状

志贺氏菌是最常见的肠杆菌科的病原菌,可引起人类肠道传染病。因此,在食品中对这种病原菌建立快速的行之有效的检测方法显得至关重要。随着科学技术的发展,人类对生活的质量(如食品安全)提出了越来越高的要求,使得致病菌的检测技术日新月异。本文对几种志贺氏菌检测技术及研究现状进行综合比较,以期能够建立应用于食品及牛奶中的一种快速、有效的检测方法。

表面增强拉曼散射技术鉴别大肠杆菌和志贺氏菌的研究

以整个大肠杆菌和志贺氏菌为研究对象,通过和纳米银颗粒混合制片,利用表面增强拉曼效应检测并区分大肠杆菌和志贺氏菌.结果表明,未与纳米银颗粒混合的大肠杆菌和志贺氏菌没有明显的拉曼信号,而与纳米银颗粒混合后有明显的拉曼信号,二者有明显的区别,且重现性良好,可为鉴别大肠杆菌和志贺氏菌病原体研究及实际应用提供依据.

鸡志贺氏菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子进化

【目的】检测鸡志贺氏菌分离株和诱导株所产ESBLs的基因型,探讨其产酶耐药的分子进化机制。【方法】对1株诱导和5株临床分离产ESBLs细菌分别用TEM、SHV、CTX-M3种通用引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型和基因亚型。【结果】5株临床福氏志贺氏菌质粒上具有相同的TEM序列和相同的SHV序列,TEM型序列与AY903309(TEM-116)序列相比发生了2个位点基因突变即G157A、C409T,其中409位点碱基突变为沉默突变,157位点碱基突变导致相应氨基酸序列53位发生突变Gly53Ser,此氨基酸突变为新的突变位点,所以该TEM型ESBLs是一种新的TEM亚型,暂命名为TEM-1V型;SHV型与AY826418(SHV-12)序列完全相同,为SHV-12型。头孢噻呋诱导标准福氏志贺氏菌,诱导10代时产生了TEM-1型β-内酰胺酶,诱导50代时产生了TEM-1V型ESBLs。【结论】临床分离鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型为TEM-1V型和SHV-12型,鸡福氏志贺氏菌TEM-1V型ESBLs是由TEM-1型β内酰胺酶直接进化而来。

交叉引物等温扩增技术检测志贺氏菌

建立一种新型志贺氏菌简洁快速检测方法——交叉引物恒温扩增检测方法。针对志贺氏菌的四个血清型设计保守的特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法并应用免疫金标试纸条进行检测。用6株志贺氏菌,32株近源菌进行特异性试验;通过纯菌液计数、干扰菌试验检测进行灵敏度验证。建立方法具有较好的特异性,增菌液及干扰菌检测灵敏度均为103cfu/mL。建立的交叉引物恒温检测方法灵敏度高,可满足对志贺氏菌进行现场快速筛查目的。

肉制品中志贺氏菌DNA的快速提取方法

肉制品中致病菌DNA的提取对PCR检测具有重要意义。以污染志贺氏菌的猪肉为材料,比较了沸水浴法、裂解液煮沸法、CTAB/SDS法、改良的碱性异硫氰酸胍法4种提取方法对志贺氏菌DNA的提取效果,并以提取的DNA为模板进行PCR检测。结果表明:改良的碱性异硫氰酸胍法提取志贺氏菌DNA的效果较好,猪肉中志贺氏菌的PCR最低检出限为5×100CFU/g,整个检测时间<8h。经改良的碱性异硫氰酸胍法操作简便、经济省时,可用于肉类的PCR检测。

圈养猕猴志贺氏菌的分离鉴定及药敏分析

目的确定猕猴感染志贺氏菌的状况,寻找有效治疗措施。方法采用不同选择培养基对13份病猴粪便样品进行分离培养、细菌革兰氏染色、镜检,并对分离的疑似菌株进行细菌生化鉴定和分子鉴定,经小白鼠致病性实验后,再用纸片扩散法测定分离菌株对23种抗生素的敏感性。结果从13份猕猴粪便样品中共检出12株志贺氏菌,检出率为92.31%,其中痢疾志贺菌(A群)1株、福氏志贺菌(B群)10株、宋内氏志贺菌(D群)1株;致病性试验结果表明,12株菌均能在72h内致死小白鼠,并能回收到注射的菌株;药敏试验结果表明,本实验中分离到的志贺氏菌对头孢噻肟(86.49%)最敏感,对头孢三嗪(75.00%)、头孢他啶(66.67%)次之,对多粘菌素B、羧苄西林、苄唑西林素等抗生素耐药性强。结论初步确定猕猴感染志贺氏菌普遍存在,进而引起腹泻、痢疾的可能性较大,头孢噻肟等为最敏感药物。

河南省鸡志贺氏菌病和鸡白痢的血清流行病学调查

为了解腹泻病鸡群中鸡志贺氏菌病和鸡白痢的发生情况，利用鸡鲍氏型、鸡痢疾型志贺氏菌凝集抗原和鸡白痢鸡伤寒多价抗原对河南省6个县市52家鸡场的鸡血清进行血清抗体检测。结果显示：鸡鲍氏型、痢疾型志贺氏菌血清抗体阳性率分别为31．5％和14．6％，鸡白痢为3．2％。所有县市的鸡鲍氏型志贺氏菌血清抗体阳性，4／5的县市鸡痢疾型和鸡白痢血清抗体阳性；78．8％的鸡场为鲍氏型血清抗体阳性，61．2％的鸡场为痢疾型血清抗体阳性，24．4％鸡场为鸡白痢血清抗体阳性。不同鸡群中，鸡鲍氏型血清抗体阳性率为4．4％～85．7％，鸡痢疾型为0．0～60．0％，鸡白痢为0．0～30．0％。不同品种鸡中，罗曼鸡鲍氏型、痢疾型血清抗体阳性率都较高，其次为固始鸡。不同日龄中，22～28日龄鸡的血清抗体阳性率最高，鸡鲍氏型为68．8％，鸡痢疾型为27．1％，而鸡白痢仅为6．5％。混合感染中，鸡鲍氏型和痢疾型混合感染占待检血清总数的10．1％。

河南省部分地区鸡志贺氏菌病病原分离鉴定及药敏试验

为了对河南省部分地区鸡志贺氏菌病的病原进行分离鉴定和药物敏感性调查,对河南省6个地区的鸡腹泻病病料进行了细菌学检查,经细菌分离培养、形态染色镜检、生化试验和动物试验,共分离鉴定出12株鸡源志贺氏菌。血清学试验结果显示,分离菌株存在种和型的差异,其中8株为福氏志贺氏菌,3株为鲍氏多价志贺氏菌,1株为痢疾Ⅱ型志贺氏菌。动物试验结果表明,分离的12株鸡志贺氏菌均具有致病性,且毒力不同,其中,从三门峡分离的菌株有很强的毒力,发病率和死亡率均为100%。药敏试验结果显示,大多数鸡志贺氏菌对氨苄/舒巴坦和阿米卡星较为敏感,对其他药物具有严重的耐药性,且不同地区分离的鸡志贺氏菌对药物的敏感性不同。

鸡志贺氏菌凝集抗原及其标准血清的研制

利用分离鉴定的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌，分别经细菌培养、灭活、浓度调整等方法研制诊断用鸡志贺氏菌凝集抗原，并用鸡志贺氏菌疫苗免疫清洁级小白鼠研制鸡志贺氏菌标准血清。结果显示，制备细菌抗原的最佳培养基是1％葡萄糖营养琼脂，抗原最佳灭活温度和时间为121℃和120min，凝集抗原合适浓度为40亿／mL，最佳稀释液为pH7．2的0．5％石炭酸生理盐水。制备的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌阳性血清经效价测定分别可达8log2和10log2，阴性血清与鸡志贺氏菌凝集抗原作用无凝集反应发生。通过研究同时确定了平板凝集试验反应的合适温度为20～35℃，结果判定时间为3～5min。研制的凝集抗原及其标准血清具有特异性强、稳定性好、使用方法简便、便于保存和检测结果准确可靠等优点，便于在基层生产单位推广应用。