荧光免疫层析法汗液CRP快速检测试纸条的研发及不同保存条件对汗液CRP的影响

背景研究发现人体汗液C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)与炎症有一定关联,但国内外未见关于汗液CRP快速检测和保存条件的研究。目的利用荧光免疫层析技术研发一种快速半定量检测汗液CRP含量的试纸条并探讨人体汗液不同保存条件下CRP的变化。方法利用双抗体夹心法研发汗液CRP试纸;于2021年5月24日7:00-16:00收集54例青年男性野外徒步50 km状态下的汗液,利用试纸条检测汗液CRP浓度并确定正常参考范围。取其中10例CRP相对高值汗液样本,设置不同保存温度和时间分别检测汗液CRP浓度变化。结果CRP抗原标准品和T/C值的标准曲线方程为Y=(7.5362+0.0105)/[1+(X/2186.5735)^(-0.7549)]-0.0105,R2值为0.9999;空白限(LoB)为1.94 ng/mL;检出限(LoD)为5.94 ng/mL;用相对偏差的绝对值验证准确度,结果均<10%;该测定结果与血清淀粉样蛋白A和降钙素原的交叉反应率分别为0和0.01%;重复性和实验室内精密度均<10%;目标青年男性人群汗液CRP正常参考范围为≤25 ng/mL;不同温度(4℃、25℃、37℃)条件下汗液保存1 h,CRP检测结果差异无统计学意义;保存3 h后,4℃和25℃条件下CRP浓度显著下降,37℃条件下浓度变化不显著。结论荧光免疫层析法快速半定量检测人汗液CRP的试纸条具有较好的准确度、特异性、重复性、实验室内精密度,应扩大样本量进一步研究,未来或可用于人汗液CRP含量快速检测。

胶体金免疫层析法同步快速测定畜禽肉中3种兽药残留

该文旨在建立一种胶体金免疫层析技术同步测定猪肉和鸡肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素药物残留的方法。动物肌肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素经酸化、衍生化及乙酸乙酯提取,并经含吐温-20的Tris-HCl缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、吐温-20添加量、衍生化试剂浓度和冻干保护剂种类等关键因素,并对检测卡的灵敏度、特异性和稳定性进行检测。结果显示,所建立的免疫层析方法可在35 min内检出猪肉和鸡肉中呋喃西林代谢物、呋喃唑酮代谢物和氯霉素药物,检出限分别为0.5、0.5、0.1μg/kg,灵敏度≥98%,假阳性率≤2%,假阴性率≤2%,稳定性可达到1年,且与现有标准方法检测结果一致。该方法操作简便、特异性强、灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

胶体金免疫层析法快速检测山药中的咪鲜胺

目的建立胶体金免疫层析法快速检测咪山药基质中的鲜胺残留量的方法。方法优化前处理过程中提取剂的pH和用量,将胶体金免疫层析快速检测方法应用于山药基质,验证方法的检出限、特异性、假阴性率和假阳性率,并通过液相色谱-串联质谱法确认方法的准确性。结果胶体金免疫层析法快速检测山药中咪鲜胺的检出限为0.3 mg/kg,假阳性率为2%,假阴性率为0;与咪鲜胺-脱氨基咪唑、咪鲜胺锰盐和咪鲜胺-脱咪唑甲酰胺基的交叉反应率分别为200%、100%、100%,可同时检测咪鲜胺及含有2,4,6-三氯苯酚部分的代谢物,实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法的符合率为88.2%。结论本方法操作简便,检测速度快,准确性高,可应用于基层行政、农产品交易市场或餐饮配送公司快速检测实验室,从源头上保障食品安全。

吡虫啉和啶虫脒胶体金免疫层析法试纸条性能评估及应用效果探究

目的研究吡虫啉和啶虫脒胶体金免疫层析法试纸条在不同基质中残留量检测的应用效果。方法实验考察了市场上主要流通的5种不同品牌的胶体金免疫层析法试纸条在蔬菜、水果和茶鲜叶基质中的检出限、灵敏度、交叉反应率、特异性、假阳性和假阴性率。结果各品牌胶体金试纸条在3种不同类型基质(白菜、苹果和茶鲜叶)中,检出限浓度水平有假阴性出现,其余浓度水平灵敏度较好;特异性和交叉反应性,结果均为阴性;假阳性率和假阴性率考察中,假阳性率为0%,但有假阴性情况出现。结论胶体金免疫层析法在检测吡虫啉、啶虫脒农药残留时具有简便快捷的特点,在蔬菜、水果基质的检测中,判定结果较为准确可靠;在茶叶基质中,由于基质效应的影响,出现假阴性的机率较高。

基于上转换纳米材料的C反应蛋白(CRP)高灵敏度免疫荧光检测方法的建立

目的采用镧系元素掺杂的上转换纳米材料增强检测体系的荧光强度,利用特异性识别C反应蛋白(CRP)的单克隆抗体,开发出一种高灵敏度、高光稳定性和高特异性的免疫荧光检测方法。方法制备以NaGdF_(4):Yb/Tm/Er为核心,以NaLuF_(4)为外壳的核壳结构上转换纳米颗粒,通过表面配体交换以得到水溶性纳米颗粒,以共价方式偶联FMU-CRP1特异性检测抗体,构建上转换发光检测试剂。通过双抗体夹心法,建立基于上转换纳米材料的免疫荧光法。结果基于上转换纳米材料的免疫荧光法,在(0.015~1)ng/mL CRP范围内具有良好的线性关系(R^(2)=0.9944),检测下限为0.015 ng/mL。与ELISA相比,本方法的检测灵敏度提高33倍,显著优于ELISA。结论基于上转换纳米材料的免疫荧光法兼具高灵敏度和高光稳定性特点,有望为临床应用提供新参考。

上转换荧光纳米材料免疫层析法快速检测恩诺沙星的研究

本研究旨在开发一种基于上转换荧光纳米材料的免疫层析法,以快速检测水产品中的恩诺沙星含量。上转换荧光纳米材料具备特殊的光学性质,能够提升方法的灵敏度和准确性。在抗体偶联pH值、标记荧光纳米粒径、检测线包被蛋白浓度达到最佳条件时,该技术方法的检出限为12.01 ng·mL^(-1),加标回收率为95.73%~115.03%,变异系数为7.78%~22.17%,检测过程约10 min。本方法为水产品中恩诺沙星的检测提供了参考,为检验方法的扩展提供了依据。

胶体金免疫层析法在韭菜农药残留检测中的应用研究

为验证胶体金免疫层析技术在韭菜农残检测中的可靠性和适用性,选用3种不同的农残胶体金免疫层析快速检测产品(胶体金农残快检试剂)检测韭菜中腐霉利、吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、克百威、三唑磷等6种农药残留,并将其与色谱质谱串联法进行比较,对其灵敏度、假阳性率及假阴性率进行验证评价。结果表明,在0.5 LOD的农药添加水平下,3种胶体金农残快检试剂对实验室空白样品的检测结果均为阴性;但当添加水平达到LOD或MLR时,其检测结果均为阳性,证明胶体金农残快检试剂灵敏度较高,且符合国家标准食品中农药最大残留限量要求;实验室加标试验和实际样品比对试验结果显示,胶体金农残快检技术与色谱质谱联用法的检测结果均无显著性差异(χ^(2)<3.84),其假阴性率和假阳性率均为0。故胶体金免疫层析法可在韭菜的农残快速检测中应用。

纳米酶侧流免疫层析法快速检测食品中肠炎沙门氏菌

目的基于氧化铈修饰的金纳米棒(CeO_(2)modified Au nanorod,AuNR@CeO_(2))构建纳米酶侧流免疫层析法(lateral flow immunoassay,LFIA),并用以检测食品中肠炎沙门氏菌。方法采用模板法制备AuNR@CeO_(2)纳米酶,对纳米酶的酶促活性进行考察。将AuNR@CeO_(2)标记抗体作为信号探针进一步构建纳米酶LFIA,并优化其关键参数,并利用AuNR@CeO_(2)纳米酶的酶促活性,催化放大试纸条的比色信号,最后将其用于奶粉中肠炎沙门氏菌的检测。结果成功制备了AuNR@CeO_(2)纳米酶,在最优条件下(2%牛血清蛋白+0.05%Tween-20的样品垫缓冲体系、0.8 mg/mL的T线抗体质量浓度和4μL的探针使用量),该试纸条可以实现目标菌的特异性检测,检出限低至10~3 CFU/mL,信号放大后灵敏度提高了10倍,在人工污染奶粉样品中检出限低至10~3 CFU/mL。结论本研究所制备的试纸条无需复杂仪器和专业人员即可实现目标物的检测,且具有易操作、便携、快速的特点,通过更换抗体类型便可用于各类食品有害物质的检测。

胶体金免疫层析法快速检测CRE碳青霉烯酶效果评价

目的评估胶体金免疫层析法(GICA)快速检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)碳青霉烯酶类别的临床应用价值。方法收集CRE非重复临床分离株73株,采用聚合酶链反应(PCR)鉴定碳青霉烯酶基因型,并采用GICA快速检测CRE的碳青霉烯酶。以PCR为参考方法,评估GICA快速检测CRE碳青霉烯酶的准确性。结果PCR检测结果显示,73株CRE中有51株(69.9%)bla_(KPC)基因阳性,19株(26.0%)bla_(NDM)基因阳性,2株(2.7%)bla_(IMP)基因阳性,1株(1.4%)bla_(VIM)基因阳性,未检测到bla_(OXA)基因阳性菌株。GICA对bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(IMP)及bla_(VIM)阳性菌株酶型检测的准确性均为100%。GICA与PCR在检测CRE碳青霉烯酶类型中的一致性为100%。结论GICA具有简便、快速、准确度高等特点,在早期监测耐碳青霉烯类菌株和临床抗感染治疗中具有重要的应用价值。

胶体金免疫层析法快速检测动物源性食品中西马特罗残留

西马特罗是一种国家明令禁止被检出的“瘦肉精”类物质的一种。采用胶体金免疫层析法快速检测动物源性食品中西马特罗残留,并对西马特罗胶体金免疫层析法进行方法验证和技术评价,相对准确度98.25%,假阴性率为3.5%,假阳性率为0,满足快速检测方法验证相关标准对假阳性率和假阴性率要求。不仅建立了一种快速检测动物源性食品中西马特罗残留的胶体金免疫层析法,而且避免了含有瘦肉精的动物源性食品的流通威胁人们的健康,确保人们餐桌上的安全。

芒果中农药残留胶体金免疫层析快速检测方法的建立与应用

目的:建立一种简便、快速检测芒果中吡唑醚菌酯等农药残留的方法。方法:芒果中的农药经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和试纸条中检测线(T线)上的抗原结合,从而产生检测线颜色深浅的变化。通过比较检测线(T线)与控制线(C线)颜色变化,对样品中吡唑醚菌酯、吡虫啉、噻虫胺进行定性判定。结果:该方法对吡唑醚菌酯、吡虫啉、噻虫胺的检出限分别为0.05 mg·kg^(-1)、0.20 mg·kg^(-1)、0.04 mg·kg^(-1),相对准确度分别为96.7%、100.0%、100.0%,经评价满足灵敏度≥95%、特异性≥85%、假阴性率≤5%、假阳性率≤15%的要求,胶体金试纸条检测结果与参比方法检测结果符合率为100%。结论:该快速检测方法无需大型仪器,操作简单,成本低,适用于芒果中农药残留的快速筛查。

化学发光免疫法检测糖尿病患者血清胰岛素和C肽水平及胰岛自身抗体的临床价值

目的分析化学发光免疫法检测糖尿病患者血清胰岛素和C肽水平及胰岛自身抗体的临床价值。方法选取2019年1月至2020年1月辽阳市中心医院收治的85例糖尿病患者纳入研究组,另选取同期80名健康体检者纳入对照组。两组均采用化学发光免疫法检测血清胰岛素和C肽水平,研究组另采用放射免疫法检测血清胰岛素和C肽水平,并采用两种检测方法检测胰岛自身抗体[胰岛细胞抗体(ICA)、糖尿病相关的谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白质酪氨酸磷酸酶抗体(IA2A)、胰岛素抗体(IAA)、锌抗8抗体(ZnT-8A)]。比较两组血清胰岛素和C肽水平,比较两种检测方法胰岛素、C肽水平及胰岛自身抗体阳性检出率,绘制ROC曲线分析两种检测方法对胰岛自身抗体的诊断价值。结果研究组胰岛素、C肽水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。化学发光免疫法检测胰岛素、C肽水平均低于放射性免疫法,差异有统计学意义(P<0.05)。化学发光免疫法ICA、GADA、IA2A、IAA、ZnT-8A阳性检出率均高于放射性免疫法,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,化学发光免疫法检测ICA、GADA、IA2A、IAA、ZnT-8A的AUC分别0.872、0.806、0.774、0.640、0.458;放射性免疫法检测ICA、GADA、IA2A、IAA、ZnT-8A的AUC分别为0.567、0.621、0.602、0.527、0.594;化学发光免疫法对5种胰岛自身抗体联合检测的AUC为0.892,大于放射性免疫法的0.635,差异有统计学意义(P<0.05),化学发光免疫法具有一定诊断价值。结论化学发光免疫法可准确检测胰岛素、C肽水平,胰岛自身抗体阳性检出率较高,且对5种胰岛自身抗体联合检测价值较高,对临床辅助诊断和治疗糖尿病具有重要意义。

抗C3d单抗制备及免疫金层析法的建立

目的 研制抗C3d单抗 ,建立免疫金层析法检测血浆补体片段C3d ,判断补体活化情况。方法 用菊糖 C3b作抗原 ,免疫Balb/c小鼠 ,并制备杂交瘤 ,以羊抗C3包被酶标反应板并结合C3d为检测板 ,筛选分泌抗C3d单抗的杂交瘤。利用proteinG柱亲和层析提取抗C3d单抗IgG和C3d结合物 ,进行SDS PAGE电泳 ,鉴定单抗的特异性。将抗C3d单抗标以胶体金 ,制备免疫金层析测试条。通过在免疫金中加未标金的抗C3d单抗 (游离单抗 )来调整试纸条的灵敏度 ,并测定C3d。结果 SDS PAGE电泳图上 ,出现IgG的重链、轻链、及C3d 3个条带 ;金标记抗C3d单抗的试条 (Ⅰ )测C3d的灵敏度在 6～ 10ng/ml,当加入 0 .1μg/ml游离抗C3d单抗 (Ⅱ )后 ,灵敏度为 10～ 15ng/ml。利用两种试条灵敏度的不同 ,对轻、中重型肝炎检测 ,结果轻型肝炎患者在纸条Ⅰ上阳性率为 83 3% (2 5 / 30 ) ,纸条Ⅱ全为阴性 ,中重型肝炎者在纸条Ⅰ、Ⅱ的阳性率为 10 0 % (30 / 30 )。结论 用本试验建立的免疫金层析法测定肝炎患者血浆C3d水平 ,可判断补体活化程度 ,辅助乙型肝炎轻、重分型。

上海地区儿童快速免疫层析法cTnⅠ参考区间的建立

目的采用快速免疫层析法检测上海地区儿童末梢血心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)水平,初步建立儿童末梢血cTnⅠ的参考区间,为临床诊断儿童心肌损伤提供实验室依据。方法选取7个月～12岁儿童240名,采用快速免疫层析法检测其末梢血cTnⅠ。先进行方法学评估(准确性、精密度、最低检测限、线性范围验证、方法比对),然后采用百分位数法确定cTnⅠ的参考区间。结果快速免疫层析法检测高、低值质控品的结果分别为4.73和0.49 ng/mL,均在质控品标示的预期范围内;低值质控品日间和日内精密度[变异系数(CV)]分别为5.97%和5.36%,高值质控品日间和日内精密度(CV)分别为6.35%和7.14%,均符合要求(CV<10%);最低检测限为0.02 ng/mL;线性范围为0.028～26.400 ng/mL;与化学发光法的相关性良好(r=0.988),检测cTnⅠ的第99百位数值为0.1 ng/mL,第99百位数值的不精密度为18.5%。采用百分位数法计算99%参考区间上限值为0.5 ng/mL,同时结合试剂说明书中标示的参考区间(<0.3 ng/mL),确定基于快速免疫层析技术的儿童末梢血cTnⅠ参考区间:<0.3 ng/mL为阴性、>0.5 ng/mL为阳性。cTnⅠ为0.3～0.5 ng/mL时需进一步检查,以判断是否有心肌损伤。结论初步建立了基于快速免疫层析法的上海地区儿童末梢血cTnⅠ的参考区间。

血清淀粉样蛋白A、C反应蛋白荧光免疫层析联合检测方法的建立

目的:建立一种可同时定量检测人血清中SAA、CRP含量的荧光免疫层析方法。方法:采用双抗体夹心原理制备SAA、CRP联合检测荧光免疫层析试纸条,对标记、包被抗体量进行研究后,对试纸条线性范围、精密性、交叉反应等性能指标进行评价。结果:最终确定SAA、CRP标记量均为20μg,包被浓度分别为2 mg/ml、1.5 mg/ml,SAA、CRP线性范围为0.78~200μg/ml;批内精密性与批间精密性均小于15%,平均回收率分别为101.7%和103.5%;且SAA和CRP两种抗原进行联合检测时无交叉反应,与西门子BN ProSpec~?特定蛋白分析系统上平行检测80份临床血清其相关性良好。结论:初步建立了联合定量检测SAA、CRP的荧光免疫层析方法,为感染性疾病的早期筛查提供一种新的检测手段。

负压微柱层析法快速测定糖化血红蛋白HBA1c

目的对传统的微柱层析法操作过程进行改良,以缩短层析柱分离样品的时间,从而提高该法测定糖化血红蛋白HBA1c的检测速度。方法利用负压装置对糖化血红蛋白HBA1c微层析柱下端进行负压引流,使液体过柱时间大幅缩短,显著提高糖化血红蛋白HBA1c检测速度。结果采用负压微柱层析法测定糖化血红蛋白HBA1c可将样品分离时间由原来的2 h缩短到15 min。经对比试验,改良方法与原方法无显著性差异(P>0.05),测定结果相关性显著(r=0.931,P<0.01);与高效液相色谱法测定结果亦呈显著性相关(r=0.946,P<0.01);该方法批内变异CV=3.63%,批间变异CV=4.11%。结论负压微柱层析法有效提高了糖化血红蛋白HBA1c检测速度,其测定结果与原方法无显著差异,且改良所需成本低廉,可应用于临床实验室HBA1c的快速测定。

酶联免疫法测定甘精胰岛素中单链前体残留研究

目的 建立酶联免疫法检测甘精胰岛素中单链前体残留,为甘精胰岛素药物质量控制和安全性评价提供新方法。方法采用双抗夹心酶联免疫法,以甘精胰岛素原为标准品,建立单链前体残留检测方法,验证方法的重复性、准确度、范围和精密度,并应用该方法检测9批甘精胰岛素原料药。结果在0.156~10.00 ng·mL^(-1)浓度范围内,对甘精胰岛素原标准品进行四参数曲线拟合,曲线相关系数R~2大于0.99,方法准确度较高、重复性良好。重复检测3批甘精胰岛素原料药,平均加标回收率在104%~113%范围内,RSD%小于10%,方法精密度良好。9批样品中单链前体残留量均小于1 ng·mg^(-1)。结论建立的酶联免疫法可用于甘精胰岛素及其他重组人胰岛素类似物中单链前体残留量的质量控制和安全性评价。

快速检测猪囊虫抗体的金免疫层析法的建立及应用

目的 研制一种简便快速检测囊虫抗体的新方法 ,提供基层单位使用。方法 应用胶体金和免疫层析合成技术进行研究 ,建立检测囊虫抗体的金免疫层析法 ;以ELISA为对照 ,观察GICA法敏感性、特异性和稳定性。结果 每ml胶体金中兔抗猪IgG最适标记量为 30 8μg ,最佳抗原包被浓度为 1mg/ml。建立的GICA法检测囊虫病猪血清均为阳性 ,正常猪及其他疾病猪血清 ,结果均为阴性 ;整个实验仅一步操作 ,检测时间 5～ 15min。同ELISA法比较 ,两种方法检测囊虫抗体的相符率达 96 8% (P >0 0 5 )。GICA试纸条分别在 4℃和室温下保存 10 5d及 37℃保存 4 5d ,检测结果均未发现改变。结论 检测囊虫抗体的GICA法简便、快速、敏感、特异、稳定。

应用快速免疫层析法检测恙虫病特异性IgM、IgG及总抗体

目的 建立快速免疫层析法检测恙虫病特异性IgM、IgG及总抗体 ,并对其敏感性和特异性进行评价。 方法 以胶体金标记纯化的基因工程重组抗原 ,在玻璃纤维上预包被金标记的纯化抗原 (Au -Ag)和鼠IgG ,在硝酸纤维素膜上检测线处包被羊抗人 μ链、羊抗人IgG或重组抗原 ;在对照线处包被羊抗鼠IgG ,组装成检测试纸。在试纸条的玻璃纤维上加待检血清 ,再滴加 2滴反应液。观察金标抗原释放后NC膜上检测线和对照线的反应情况 ,检测线和对照线同时出现红色条带判为阳性 ,仅对照线出现红色条带判为阴性 ,对照线未出现条带为无效试验。结果 间接免疫荧光法IFA检测IgG和金标免疫层析法检测IgM、IgG、总抗体的敏感性分别为 88 1% ,92 3% ,90 9%和 98 6 % ;特异性分别为 96 0 % ,94 7% ,94 7%和93 3%。结论 金标免疫层析法可替代传统方法用于检测恙虫病东方体特异性抗体。

胶体金免疫层析法快速检测食品中庆大霉素残留

应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测食品中庆大霉素残留的方法。采用免疫竞争法,柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记抗庆大霉素单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,庆大霉素偶联抗原和羊抗兔二抗分别包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线)和控制线(C线),制备检测庆大霉素的胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性进行测定。测试结果表明:庆大霉素快速检测试纸条的灵敏度为0.7μg/mL,检测时间为10min,稳定性和特异性良好,与其他同类物质无交叉反应,其检测结果与酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果呈现了很好的一致性。该方法快速简便、灵敏度高、特异性强、准确性和稳定性好,非常适合现场快速检测庆大霉素。