快速冷冻仪与恒温冷冻切片机的速冻效果对比

病理科出具术中冰冻诊断报告的时间为30 min[1],而病理技师制片的时间只有15 min,因此快速制作一张高质量的冷冻切片一直是病理技师追求的目标。对于一些富含脂肪(乳腺、淋巴结等)的组织,恒温冷冻切片机速冻效果较差,易产生冰晶,拖延制片时间,影响切片质量[2]。

术中快速冷冻病理检查对预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的临床价值

目的:探讨术中快速冷冻病理检查对预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的临床价值。方法:研究对象选自我院2018年1月至2022年8月间收治并经术后病理活检确诊为甲状腺乳头状癌患者60例,分析甲状腺乳头状癌患者术中快速冷冻病理与术后病理的一致性。结果:术中送检气管前淋巴结、气管旁淋巴结及喉前淋巴结的平均数量均为2枚,送检中央区淋巴结的平均数量11枚。甲状腺乳头状癌术中气管前淋巴结的快速冰冻病理与术后中央区淋巴结病理的阳性率(69.05%)最高;其次是气管旁淋巴结的快速冰冻病理与术后中央区淋巴结病理的阳性率为62.50%,喉前淋巴结的快速冰冻病理与术后中央区淋巴结病理的阳性率(25.57%)最低。经统计,三组术中淋巴结快速冷冻病理阳性者为48例(48/60,80.00%),阴性者为9例(9/60,15.00%),未送检者为3例(3/60,5.00%)。甲状腺乳头状癌术中切除>5个淋巴结数量时的病理阳性率(90.63%)高于1~5个淋巴结(60.71%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过将术中所切除的气管前、气管旁、喉前淋巴结进行术中快速冷冻病理,根据病理结果有助于评估中央区淋巴结是否累及,同时还可为患者制定更适合的手术方案。

NQ200全自动快速冷冻切片染色机使用体会

病理诊断作为医学诊断的金标准之一,在医院诊疗信息流程中具有重要地位,而术中快速冷冻病理诊断是病理科的急诊工作,需要在30 min内对病变组织定性,从而进一步协助确定临床手术方案及提高医疗质量[1-2],这不仅对病理医师、更对病理技术人员提出更高的要求。随着病理技术的发展,HE切片全自动染色机已被各大医院及研究机构所接受并深受好评,我科室今年新引进一台NQ200全自动快速冷冻切片染色机,现将使用体会介绍如下。

细胞学涂片联合快速冷冻切片检查诊断卵巢肿瘤的应用价值

目的 探讨细胞学涂片联合快速冷冻切片检查诊断卵巢肿瘤的应用价值。方法 选取60例卵巢肿瘤患者,分别对病理标本进行细胞学涂片、快速冷冻切片及联合检查。以石蜡切片诊断结果为金标准,比较单一检查及联合检查的诊断价值。结果 联合检查的敏感度(97.78%)、准确率(98.33%)高于细胞学涂片(84.44%、88.33%)及快速冷冻切片(77.78%、83.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。联合检查的肿瘤诊断符合率高于细胞学涂片、快速冷冻切片(P<0.05)。细胞学涂片检查时长短于快速冷冻切片(P<0.05)。结论 细胞学涂片联合快速冷冻切片检查对卵巢肿瘤的诊断效果更好,可提高病理诊断准确率,为临床治疗方案提供可靠依据,值得推广。

心肌组织和一些细胞器快速冷冻后的结构变化

作者应用低温快速冷冻技术对心肌组织及一些细胞器的冷冻损伤过程及损伤机理作了较全面的探讨。取大鼠心室部位,用振动切片机切成100～150μm厚的薄片,采用Reichert-Jung弹射式冷冻仪KF-80将切成片状的样品快速插入冷冻剂Freon 22中冷冻。被冷冻后的样品迅速转移到置换剂丙酮中并保持温度在:-80℃(28h)、-60℃(48h)、-20℃(12 h)和4℃(1 h)。经快速冷冻后的心肌组织在表层到深度约20μm的范围内,结构保存很好,无任何冰晶。30μm深度时,线粒体嵴,细胞间质和肌丝受到冷冻损伤。50μm深度以后,组织结构基本上全部被冰晶破坏。结果表明,心肌组织在快速冷冻后,细胞间质和线粒体嵴对冰晶最为敏感,尔后是肌丝和细胞核,质膜最不易遭受冷冻损伤。

猪精液0.5ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法:分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20min后投入液氮保存,37℃×30s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25s、47℃×20s、52℃×15s、57℃×10s和62℃×5s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3cm×10min冷冻方法,解冻0、8h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对"高温短时"解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10s和62℃×5s解冻的精子各项指标无显著差异(P>0.05),但前4项指标显著高于对照组(P<0.05),丙二醛浓度显著降低(P<0.05)。【结论】优化猪精液0.5ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3cm×10min冷冻、57℃×10s或62℃×5s解冻方法效果最佳。

753例甲状腺疾病快速冷冻切片的病理诊断分析与探讨

目的探讨甲状腺疾病快速冷冻切片的诊断及鉴别诊断并分析导致漏诊的原因。方法对753例甲状腺疾病进行分析,其中结节性甲状腺肿622例,乔本病及其他甲状腺炎共58例,甲亢32例,甲状腺癌共41例(其中甲状腺乳头状癌32例,髓样癌5例,滤泡癌2例,未分化癌2例)。结果甲状腺疾病快速冷冻切片的总符合率为98.9%,漏诊率为1.1%。术后诊断良性符合率为100%,术后诊断为恶性的符合率为80.48%,漏诊率为19.52%。甲状腺乳头状癌快速诊断符合率为84.38%,漏诊率为15.62%。滤泡癌2例在术中均未作出诊断,漏诊率为100%。未分化癌2例均作出明确诊断。髓样癌5例,其中1例漏诊。结论甲状腺癌在快速冷冻病理诊断中有较高的漏诊率,尤其是甲状腺乳头状癌和滤泡癌,提高诊断率需要不断总结经验教训,把大体取材、组织学特点及临床沟通有机结合起来,同时加强与技术人员的合作。

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

目的 为扩大胚胎来源并获取特定胚龄胚胎 ,建立小鼠冷冻胚胎库。方法 运用超数排卵、体外受精与胚胎培养及胚胎冷冻技术系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律。卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻。结果 (1)注射hCG后 12～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,4 2～ 4 8h为 2 细胞期 ,4 8～ 6 0h为 4 细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8 细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～ 92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中。 (2 )培养液中添加促性腺激素 (FSH与hCG) ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育。 (3)在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 细胞阻断 ,其 2 细胞胚的发育率达 10 0 % ,8 细胞胚发育率达 5 5 %以上 ;牛、羊上皮细胞培养液上清也能有效克服 2 细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞期胚的发育率显著提高。 (4)以D PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9 3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 4 %。结论 研究为将生物技术应用于小鼠 。

人类稀少精子细管法超快速冷冻的实验研究

目的研究人类稀少精子超快速冻存方法,寻求稀少精子冷冻保存的最优方式。方法选取20份在上海市人类精子库捐精的20名健康志愿者的精液。将精液稀释后密度调至(3～5)×106/mL(每个高倍视野3～5条精子),按照不同冷冻方式分为四组进行冷冻:A组应用0.5 mL麦管和精子冷冻剂,以程序降温方式冷冻;B组应用毛细玻璃管和精子冷冻剂,以程序降温方式冷冻;C组应用毛细玻璃管和改良甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)型冷冻保护剂,以程序降温方式冷冻;D组应用毛细玻璃管和改良GYC型冷冻保护剂,以超快速降温方式冷冻。比较四种方法复苏后精子活率和正常形态率。结果冷冻前精子活率为(68.6±21.3)%;A、B、C、D组复苏后活率分别为(32.2±17.2)%、(41.5±18.4)%、(44.9±18.0)%和(50.2±19.7)%,B、C、D各组复苏后活率高于A组(P<0.05),D组高于其他三组(P<0.05)。冷冻后A、B、C、D组精子正常形态率分别为(14.2±4.1)%、(15.0±4.7)%、(14.5±5.2)%和(15.9±4.9)%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用超快速降温冷冻模式冷冻稀少精子,具有较高的冷冻复苏率。改良GYC冷冻保护剂具有与精子冷冻剂相似的冷冻保护效果。

快速冷冻工艺对牛肉品质和组织结构的影响

通过对比普通冷冻工艺与快速冷冻工艺对牛腱子肌的色泽、解冻汁液损失率、蒸煮损失率、剪切力指标的影响,并且结合苏木精-伊红染色法、扫描电子显微镜、透射电子显微镜观察两种冷冻工艺对牛肉组织结构的影响。结果发现:快速冷冻工艺使解冻后牛腱子肌的H值仅上升了0.9%,而普通冷冻工艺处理后的H值上升了9.4%,两种冷冻工艺对H值的影响差异显著(P<0.05)。普通冷冻工艺处理的牛腱子肌解冻汁液损失率极显著高于快速冷冻工艺(P<0.01)。同时,普通冷冻工艺处理的牛腱子肌的蒸煮损失率明显高于快速冷冻工艺,两者差异显著(P<0.05)。另外,普通冷冻工艺处理的牛腱子肌的剪切力低于快速冷冻工艺和对照组,但是差异不显著。电子显微镜观察得出,普通冷冻工艺处理明显比快速冷冻工艺处理处理使解冻后牛肉的肌束间隙更大、肌原纤维间隙更大,同时普通冷冻工艺也破环了肌纤维横截面的结构。结果表明:快速冷冻工艺很好地保护了牛肉鲜艳的色泽,提高肉的食用品质。另外,快速冷冻工艺极大地降低了肉中冰晶的大小,保护了肉的组织结构,优化了肉的口感。

无冷冻防护剂保护的大鼠心肌组织超低温快速冷冻研究

作者采用无冷冻防护剂保护的超低温快速冷冻法，对心肌组织进行固定，得到了保存极佳的组织结构形态，可溶性离子如钾、磷等也得到很好的保存，并与采用冷冻防护剂保护的心肌组织快速冷冻效果作了比较及探讨。

Thermo Fisher快速冷冻切片染色机进行快速染色的应用体会

术中快速病理学检查结果可为临床医师在术中选择最佳手术方案。快速病理学检查要求病理医师在很短的时间内根据送检标本的大体观察和组织块快速冷冻切片呈现的组织学改变对病变性质及类型做出准确判断。

甲状腺微小乳头状癌术中快速冷冻诊断质量控制分析及临床病理意义

目的探讨甲状腺微小乳头状癌(PTMC)术中快速冷冻诊断与石蜡诊断符合率及影响诊断符合率的因素,探究PTMC术中快速冷冻诊断的临床应用价值及规范质量控制方法。方法收集2007年1月至2019年12月首都医科大学附属北京安贞医院冷冻与石蜡对照诊断的228例PTMC患者的临床资料进行回顾性分析。分析术中冷冻诊断符合率、漏诊率、误诊率等以及影响冷冻符合率的因素,并观察其临床病理特点。结果 228例患者术中诊断符合203例,诊断符合率89.0%;漏诊25例,漏诊率为11.0%。25例冷冻漏诊患者中,2例为取材漏诊;2例因肿瘤偏小;17例为诊断漏诊;2例组织有钙化,脱钙组织出现病变;2例冷冻切片制作出现问题。228例患者男女之比为1∶3.75,女性明显多于男性。PTMC合并甲状腺疾病者156例,占68.4%,且均发生于女性。结论病理诊断医师需掌握PTMC的临床病理特点,强化冷冻取材、掌握诊断标准,病理技师提高切片制作技术,是提高术中快速冷冻诊断与石蜡诊断符合率的关键。

玻璃化快速冷冻仪在猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻中的应用

为了提高猪成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果,应用玻璃化快速冷冻仪(Vit-Master)进行猪成熟卵母细胞的冷冻,以观察其冷冻效果。结果显示:浆状液氮降温速率[(21 345±l768)℃/min]远远高于普通液氮降温速率[(11 982±1 936)℃/min];各组冻后形态完整率无显著差异;冻后存活率为:使用玻璃化快速冷冻仪的不同浓度保护剂组[A':(57.87±10.66)%、B':(76.5±10.33%)、C':(79.07±14.90)%和D':(81.94±6.98%)]均分别高于对应的不使用玻璃化快速冷冻仪组[A:(49.73±2.91)%、B:(60.63±12.45)%、C:(71.33±14.38)%和D:(78.50±7.40)%],但均无显著差异,B'和C'组均高于C和D组,但差异不显著,A和A'组均显著低于B'、C'和D'组。因此,通过使用Vit-Master冷冻装置提高冷冻速率,可以降低冷冻保护剂使用浓度并提高冻后存活率。

无冷冻防护剂保护时的心、肾组织快速冷冻研究

无冷冻防护剂保护时的心、肾组织快速冷冻研究＊＊本研究为国家自然基金资助项目内容之一，批准号：３９５７０３５４。杨勇骥郑尊邵晓良吴越夏愿耀夏金辉（第二军医大学生物物理教研室，上海２００４３３）超低温快速冷冻以极高的冷冻降温速率（理论上认为应大于１０００...

牛胚胎玻璃化超快速冷冻一步法移植试验

应用 30 %乙二醇 +0 .3mol/ L 蔗糖 - m- PBS液 (VS1)、30 %乙二醇 +0 .3m ol/ L 蔗糖 +5 %葡聚糖 (T- 5 0 0 ) - m-PBS液 (VS2 )、30 %乙二醇 +0 .3mol/ L蔗糖 +10 %葡聚糖 (T- 5 0 0 ) - m- PBS液 (VS3)玻璃化超快速冷冻奶牛胚胎 ,一步法移植。结果显示 ,VS1、VS2、VS3组玻璃化超快速冷冻奶牛胚胎解冻后的形态正常率分别为 10 0 % (2 0 / 2 0 )、95 %(19/ 2 0 )和 5 5 .6 % (5 / 9) ;培养存活率分别为 70 % (14 / 2 0 )、75 % (15 / 2 0 )和 2 2 .2 % (2 / 9) ;囊胚孵化率分别为 0、2 0 % (4/2 0 )和 0。VS1、VS2组玻璃化冷冻奶牛胚胎解冻后的形态正常率极显著地高于 VS3组 (P<0 .0 1) ;VS1、VS2组玻璃化冷冻奶牛胚胎解冻后的培养存活率分别显著 (P<0 .0 5 )和极显著 (P<0 .0 1)地高于 VS3组。 VS1组冷冻的胚胎经一步法移植了 5头 (1枚 /头 ) ,未获得妊娠 (0 / 5 ) ;VS2组冷冻的胚胎用一步法移植了 10头 (1枚 /头 ) ,结果获得 2头妊娠(2 / 10 ) ,并产下 2头正常犊牛。

快速冷冻干燥法制备多孔氧化硅陶瓷

为制备氧化硅多孔陶瓷,尝试了快速冷冻干燥法,探索了氧化硅浆体的分散剂和pH值对孔结构的影响。结果表明:使用0.1wt%六偏磷酸钠作为分散剂时,孔壁处团聚现象明显;改用聚甲基丙烯酸钠团聚显著减少。主要原因是氧化硅表面的Si-OH可能与六偏磷酸钠络合成Si-Na_4P_6O_(18)^-,但其在水中易断裂,减弱了颗粒之间排斥力,未能抑制团聚;而聚甲基丙烯酸钠吸附在氧化硅表面,可能形成Si-C_4H_5O_2等空间位阻抑制团聚。在聚甲基丙烯酸钠的基础上再调节浆体pH值至~10使氧化硅的zeta电位达到^-60 mV,可更好抑制团聚。综上所述冻干法适合制备开口通孔结构的多孔氧化硅陶瓷。

病理快速冷冻切片染色的质控切片制备

目的探索一种较佳的病理快速冷冻切片染色质控片的制备方法。方法随机抽取60例快速冷冻组织,每例取2块组织,随机分为A、B二组,在-25℃速冻后,A组(标准组)切片放入AAF液(由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85:5:10的比例配制而成)固定30s后立即进行HE染色,B组切片放入AAF液固定30s后取出室温晾干后放进冷冻切片机内过夜。余下的A组及B组组织进行后续2种不同的操作。C组:得到A组切片后的组织不做任何处理,直接放冷冻切片机机箱内,并将冷冻切片机箱体温度调高至-10℃,第二天上午再次调至-25℃;D组:得到B组切片后的组织于组织上加包埋剂覆盖后放冷冻切片机机箱内,余操作同C组。C、D两组于第二天上午8点再次进行冷冻切片后同B组一同进行HE染色,以十分制评定切片有无裂隙、皱褶或冰晶,染色后组织结构、细胞核着色和核质对比清晰度等6项指标的得分,分别与A组的染色片进行比较。结果 A、B两组切片质量评价指标得分无明显差别,C组切片无裂隙指标得分低于A组,D组无冰晶指标得分低于A组;B、C两组的组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分与A组比较无显著差异;D组组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分均低于A组。结论新鲜的组织冷冻切片后,切片立即放入AAF液固定30s,随后取出,常温晾干后再次放进冷冻切片机机箱内过夜直至第二天上午放入全自动染色机内进行HE染色,观察染液的染色力,适用于每天快速冷冻切片工作开展前的全自动染色机的染色质控。

655例卵巢肿瘤术中快速冷冻病理检查的准确性分析

目的通过分析卵巢肿瘤术中快速病理检查与常规病理检查结果的符合率来评估快速病理检查在不同卵巢肿瘤中的诊断准确性。方法回顾性收集655例卵巢肿瘤术中快速冷冻病理检查结果以及术后常规病理检查结果,分析恶性、交界性、良性卵巢肿瘤快速冷冻病理检查和常规病理检查的符合率以及诊断的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值。结果 655例卵巢肿瘤快速冷冻病理检查与常规病理检查总符合率为94.7%,在恶性、交界性以及良性肿瘤中确诊符合率分别为91%、82.5%和97%。其灵敏率、特异率、阳性预测值、阴性预测值在良性肿瘤中分别为97%、89.2%、95.5%和92.6%;在交界性肿瘤中分别为82.5%、98.5%、78.6%、98.9%;在恶性肿瘤中分别为91%、100%、100%和97.3%。结论术中快速冷冻病理检查能够快速并且准确的对卵巢肿瘤进行分类及定性诊断,对卵巢肿瘤的切除范围与术式的选择提供了可靠的依据。

淋巴结组织术中快速冷冻切片的优化

目的优化淋巴结组织术中快速冷冻切片的条件,以期提高淋巴结组织冷冻切片的时效性,改善冷冻切片的质量。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2018年1月至2019年7月接收的120例术中淋巴结组织标本。根据组织取材大小不同分为3组,每组随机抽取一定数量的冷冻头,从组织冷冻前是否运用"吸水吸油法"、小淋巴结组织的摆放方式及冷冻切片机样本头的温度设置3个方面分别进行对比实验,比较不同条件对淋巴结组织的冷冻制片时间及切片质量(无皱褶、无裂隙、无冰晶3个指标)的影响。结果冷冻前先将淋巴结组织进行"吸水吸油"操作、将多枚小淋巴结组织并列排列、设置冷冻切片机样本头温度为-20℃的条件下淋巴结组织冷冻切片制片时间最短,无皱褶、无裂隙、无冰晶3个指标得分最高,切片质量最佳。结论优化淋巴结组织"吸水吸油"操作、小淋巴结组织的摆放方式、冷冻切片机样本头的温度设置等条件,可以显著缩短淋巴结组织冷冻制片时间,提高切片质量,值得推荐。