玉米种子纯度快速分子检测技术研究

种子纯度检测是产品质量检测的中心,检验种子纯度是促进农业发展和维护种业秩序的必经之路。随着信息化发展,种子纯度快速分子检测技术不断更新优化,如何使用现代化纯度快速分子检测技术验证玉米种子纯度是值得思考的问题。文章阐述了机器视觉技术、分子标记技术、DNA快速提取法,分析了玉米种子纯度快速分子检测技术应用方法,结合试验结果得出玉米种子纯度快速分子检测技术步骤以及梯度要求。

基于SCAR标记的小麦禾谷孢囊线虫快速分子检测技术

【目的】建立从禾谷孢囊线虫及其近缘种的混合群体中检测禾谷孢囊线虫的快速分子检测方法。【方法】使用随机扩增多态性DNA(RAPD)和特征序列扩增区域(SCAR)标记的方法,运用PCR技术进行特异性检测。【结果】用本研究建立的SCAR标记快速分子检测体系对9种32个线虫种群进行检测,能够直接从混合线虫样品中检测出禾谷孢囊线虫。该检测方法对禾谷孢囊线虫的孢囊、2龄幼虫具有扩增能力,最低检出阈值为1/2000个孢囊,1/80头2龄幼虫。【结论】本研究设计的SCAR标记快速分子检测体系能够从禾谷孢囊线虫及其近缘种的混合种群中快速检测出禾谷孢囊线虫,且检测准确、灵敏度高。

以Ypt1基因序列为靶标的辣椒疫病菌快速分子检测

辣椒疫霉（Phytophthora capsici）是一种重要的植物病原卵菌，寄主范围广泛，除了辣椒以外，还可以侵染番茄、茄子及多种瓜类，造成疫病，危害作物生产。随着设施农业的大规模发展，蔬菜种植面积日益扩大．该菌所致病害及造成的经济损失逐年加重。对辣椒疫霉菌进行早期检测可以及时采取防治措施，控制病害进一步扩展。

基于术中快速分子病理检测的脑胶质瘤手术策略研究进展

根据2021版《WHO中枢神经系统肿瘤分类》(WHOCNS5)[1],成人弥漫性脑胶质瘤主要分为:星形细胞瘤,IDH突变型;少突胶质瘤,异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变和1p/19q共缺失;胶质母细胞瘤,IDH野生型。研究表明,最大程度的安全切除可以改善胶质瘤病人术后症状、生活质量、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)[2-3]。

仿刺参腐皮综合征病原灿烂弧菌RPA-Cas13a检测方法的建立

为预防和控制灿烂弧菌引发的仿刺参腐皮综合征,促进仿刺参养殖业的健康可持续发展,利用LwCas13a中特异性CRISPR RNA(crRNA)与靶RNA结合后可激活Cas13a蛋白对外源RNA分子附属切割活性的特征,结合重组酶介导的聚合酶扩增技术(RPA),建立1种针对灿烂弧菌gyrB基因的快速、灵敏、特异的定量检测方法——RPA-Cas13a。RPA-Cas13a可实现在37℃恒温下、60 min内对灿烂弧菌的快速实时检测。灵敏度测试结果显示,RPA-Cas13a检测限为550拷贝/μL(gyrB),与荧光定量PCR的检测灵敏度水平一致;特异性测试结果表明,RPA-Cas13a对创伤弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌等其他弧菌及产黑假交替单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌等常见水产动物病原菌均无交叉反应,特异性较强。RPA-Cas13a方法对仿刺参体表黏液(32份)、养殖池塘水体(15份)和表层沉积物(10份)等57份环境样本的阳性检出率为8.77%,与传统荧光定量PCR方法的检出一致性高(Kappa=1.00),无统计学差异(P>0.05)。试验结果表明,灿烂弧菌的RPA-Cas13a新型定量检测方法,快速简便、灵敏特异,可为预防和控制仿刺参腐皮综合征的发生提供有力的分子工具。

四川地区念珠菌性外阴阴道炎快速鉴定和菌种构成研究

目的建立快速诊断、鉴定外阴阴道念珠菌病病原体的方法,并分析四川地区外阴阴道念珠菌病菌种构成情况。方法直接从阴道炎患者宫颈分泌物中提取真菌DNA,扩增ITS1-2区,与培养法比较检出阳性率。分析念珠菌性阴道炎患者致病菌种构成特点;比较VVC患者与RVVC患者以及不同年龄段阴道炎患者菌种分布特点。结果对阴道分泌物的快速分子检测无论敏感性还是时效性都明显优于传统培养法;白念珠菌是引起念珠菌性阴道炎的优势致病菌。非白念珠菌在RVVC患者以及40岁以上患者感染比例增高。结论用分子生物学方法快速鉴定外阴阴道念珠菌病的病原菌有利于正确、及时地制订治疗方案。

PCR荧光技术在阪崎肠杆菌检测中的应用

本文就婴幼儿配方奶粉中食源性致病菌阪崎肠杆菌的分类、来源、特性、致病性以及减少婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的措施进行了介绍和综述。着重介绍了阪崎肠杆菌国内外检测标准、技术和检测仪器;综述了国际通行的保证食品安全的荧光PCR食源菌检测标准、仪器和方法;论述了荧光PCR法检测阪崎肠杆菌的政策要求、技术标准、实验技术、检测步骤以及荧光PCR实验室建设要点。

重组酶介导的等温扩增技术联合CRISPR-Cas13a快速检测4种腹泻病原菌

目的重组酶介导的等温扩增技术(RAA)联合规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a),建立对沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、肠出血性大肠杆菌O157:H74种腹泻病原菌的快速分子检测方法,即RAA-Cas13a。方法设计4种腹泻病原菌的RAA特异性引物和CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a恒温荧光检测,以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)为对照方法,评价RAA-Cas13a优化方法的灵敏度与特异性。结果RAA-Cas13a方法可在35 min内完成检测。检测志贺菌、霍乱弧菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7的最低检测限为10 copies/μL,沙门菌最低检测限为1 copy/μL;特异性实验表明每一种病原菌与其余10种对照细菌均无交叉反应。应用建立的方法检测200份实际样本和40份人工污染样本,结果表明同RT-qPCR检测结果一致性高(分别为Kappa=0.927和Kappa=1.000)。结论RAA-Cas13a检测方法具有灵敏度高,特异性强等优点,能用于4种腹泻病原菌的快速检测。

CRISPR-Cas13a辅助RAA快速检测金黄色葡萄球菌的研究

目的建立一种金黄色葡萄球菌快速分子检测技术。方法根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)保守区序列设计合成特异性引物,通过对反应条件进行优化,建立金黄色葡萄球菌重组酶介导的等温扩增技术(Recombi-naseaidedamplification,RAA);表达纯化CRISPR-Cas13a蛋白,设计特异的crRNA(CRISPR RNA),以crRNA引导CRISPR-Cas13a蛋白对RAA产物进行检测;对优化的方法进行灵敏性和特异性评价,同时采用该方法与real-timePCR法对食品标本中的金黄色葡萄球菌进行检测,评价方法的一致性。结果CRISPR-Cas13a辅助RAA检测金黄色葡萄球菌的灵敏度为101 CFU/ml,高于real-timePCR,约102 CFU/ml,检测时间仅需30min,与其他食源性致病菌无交叉反应;该方法和real-timePCR检测80份食品样品的阳性率均为8.75%,具有高度一致性(Kappa=1,P>0.05)。结论建立的CRISPR-Cas13a辅助RAA方法具有简便、快速、灵敏、特异等优点,为金黄色葡萄球菌的检测提供了新的技术手段。