Sprouty2蛋白调节去势抵抗性前列腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

目的 探讨快速发育生长因子同源蛋白2抗体(Sprouty2)蛋白调节去势抵抗性前列腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制.方法 根据试验目的将人去势抵抗性前列腺癌细胞分为Sprouty2蛋白高表达组、阴性对照组、空白对照组.Sprouty2蛋白高表达组通过siRNA技术将小激活RNA(saRNA)转入人去势抵抗性前列腺癌细胞中进行干预;阴性对照组通过siRNA技术将空载体质粒转入人去势抵抗性前列腺癌细胞中进行干预;空白对照组进行常规培养;取对数生长期细胞用于后续实验.噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖情况;划痕实验测定细胞迁移能力;Annexin V-FITC和PI双染色测定细胞凋亡情况.Western blot测定Myc促癌基因(c-Myc)、SRY盒转录因子4(Sox4)、E-box结合同源盒1(ZEB1)蛋白、E-钙黏蛋白、波形蛋白表达.结果 Sprouty2蛋白免疫细胞百分比、Sprouty2蛋白免疫细胞荧光强度在各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05).细胞增殖活力在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);Sprouty2蛋白高表达组细胞迁移率明显低于阴性对照组和空白对照组,细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);细胞迁移率和细胞凋亡率在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).E-钙黏蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);c-Myc、Sox4、ZEB1蛋白、E-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Sprouty2蛋白高表达可能通过下调c-Myc、Sox4、ZEB1蛋白、波形蛋白表达,上调Sprouty2蛋白表达抑制去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡.

SPRY2基因在细胞表型中的研究进展

SPRY2作为重要信使RNA,参与多种疾病的病理过程,在维持细胞稳态中发挥关键作用,甚至是研究癌症发病机制潜在治疗靶点。虽然SPRY2已在诸多疾病中进行较为广泛和深入的探讨,但尚未见其在细胞表型研究中的系统报道。对SPRY2研究现状和动态分析,发现其在细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、细胞自噬、上皮间充质转化与血管生成等方面具有特异性,尤其在细胞增殖上,为SPRY2后续研究提供思路。

转移性宫颈癌细胞衍生的外泌体miR-21-5p促进宫颈癌侵袭及转移

目的探讨转移性宫颈癌组织的旁分泌作用对肿瘤细胞扩散的影响。方法选择22例转移性宫颈鳞癌患者的手术标本(癌组织和癌旁组织)和血清标本,以及22名健康体检者的血清标本,采用逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-21-5p在癌组织和癌旁组织中的表达水平;分别转染miR-21-5p模拟物/抑制剂到宫颈癌SiHa细胞,采用RT-qPCR、细胞集落形成实验、Transwell迁移实验、噻唑蓝(MTT)比色法、蛋白免疫印迹法、双荧光素酶报告分析差异;采用高速离心法提取血清外泌体;采用纳米颗粒跟踪分析(NTA)技术、蛋白免疫印迹法、透射电子显微镜(TEM)对外泌体进行表征鉴定;采用RT-qPCR检测宫颈鳞癌患者和健康体检者血清外泌体中miR-21-5p的表达差异;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清外泌体中miR-21-5p对肿瘤转移的诊断效能。结果miR-21-5p在转移性宫颈鳞癌组织中表达上调;miR-21-5p过表达能促进宫颈鳞癌SiHa细胞集落形成以及细胞增殖与迁移(P均<0.01);双荧光素酶报告显示,miR-21-5p可以靶向快速发育生长因子同源蛋白2抗体(SPRY2),对SPYR2的表达水平进行调控;miR-21-5p模拟物转染的SiHa细胞中,磷酸化丝裂原和应激激活的蛋白激酶、磷酸化核糖体S6蛋白激酶、磷酸化原癌基因C-RAF、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激酶和磷酸化MAPK蛋白的表达均上调(P均<0.05)。miR-21-5p在宫颈鳞癌患者的血清外泌体中上调(P<0.05)。血清外泌体评估宫颈癌转移的ROC曲线下面积为0.9375。结论转移性宫颈鳞癌患者组织中miR-21-5p通过外泌体传递促进肿瘤转移,其机制可能与靶向SPRY2/细胞外调节蛋白激酶/MAPK信号通路有关。

广西流行的猪瘟病毒株E2基因序列测定及分析

目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析。方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析。结果得到长度为1092nt猪瘟病毒E2基因,编码364个氨基酸残基的目的基因片段。广西株与HCLV、Shimen株的核苷酸同源性分别为81.5%～82.8%和82.8%～84.3%,推导的氨基酸同源性分别为87.1%～88.8%和88.5%～89.9%,广西毒株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为92.3%～99.9%和94.8%～100%。广西15株猪瘟病毒E2蛋白上的全部半胱氨酸(Cys)位点均未改变,推测其E2蛋白的抗原结构保持很高的稳定性。但广西毒株中与特定单克隆抗体结合的724、725、729、734和738位的氨基酸发生了变异,这些变异可能导致不完全免疫保护。把所测定的广西15株与国内外已发表的19株病毒相应序列进行比较,建立系统发育树,所比较的34株猪瘟病毒被分为两个群,广西毒株皆属于基因群Ⅱ。结论成功进行了广西流行猪瘟病毒E2基因序列分析,为进一步探讨猪瘟病毒E2蛋白的抗原结构提供了依据。

miR-21对宫颈癌Siha细胞增殖侵袭及调控SPRY2表达的影响

目的探讨微小RNA-21(miR-21)对人宫颈癌Siha细胞增殖、凋亡、侵袭及调控快速发育生长因子同源蛋白2抗体(SPRY2)表达的影响。方法收集2016年1月至2017年12月广州市番禺区中心医院收治患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织标本各22例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(QPCR)检测宫颈癌组织中miR-21和SPRY2的表达水平。采用Lipofectamine^Tm^2000脂质体法将miR-21模拟物(minic-21组)、模拟物对照寡核苷酸(minic-nc组)、抑制剂(inhibitor-21组)和抑制剂对照寡核苷酸(inhibitor-nc组)转染到宫颈癌Siha细胞。转染48h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,QPCR和Westernblot检测各组细胞中SPRY2mRNA和蛋白水平。结果与正常宫颈组织比较,宫颈癌组织中miR-21表达明显增高,SPRY2表达明显降低(P<0.05),二者呈负相关(P<0.01)。与相应对照组相比,minic-21组Siha细胞增殖率升高,凋亡率降低,侵袭能力提高(P<0.05);inhibitor-21组Siha细胞增殖率降低,凋亡率升高,侵袭能力减弱(P<0.05)。与相应对照组相比,minic-21组SPRY2蛋白水平明显降低(P<0.05),SPRY2mRNA水平无明显差异(P>0.05);inhibitor-21组SPRY2mRNA和蛋白水平均明显升高(P<0.01)。结论miR-21在宫颈癌中可能通过调控肿瘤抑制基因SPRY2发挥作用,有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点。