皮肤活检标本中海分枝杆菌定量PCR检测方法的建立和价值评估

目的建立海分枝杆菌皮肤感染定量PCR(qPCR)快速检测方法并分析其临床检测效能。方法提取海分枝杆菌菌落DNA进行梯度稀释(10-1至10-8),采用既往文献报道的12对海分枝杆菌检测DNA引物探针及本研究设计的6对引物和探针分别进行qPCR扩增,筛选出最灵敏的引物和探针。收集山东第一医科大学附属皮肤病医院2021年确诊的72例海分枝杆菌感染患者(实验组)和68例其他分枝杆菌感染患者(对照组)皮损组织,取实验组和对照组皮损组织分别进行qPCR扩增、γ干扰素释放试验(IGRA)、抗酸染色和组织培养,评估检测效能。结果本研究设计的海分枝杆菌增强感染位点2(Mel2)引物和探针的灵敏度最高,其检测限为0.86拷贝/μl(CT值=37);Mel2引物和探针在其他分枝杆菌包括麻风分枝杆菌、葡萄球菌等的检测中qPCR扩增均阴性。实验组72例患者中,qPCR阳性44例(敏感性61.1%,95%CI:49.6%~71.5%),培养阳性47例(敏感性65.2%,95%CI:53.8%~75.3%),对照组68例qPCR、培养均为阴性,特异性均为100%;在65例患者中,31例IGRA阳性(敏感性47.7%,95%CI:36.0%~59.6%),25例对照中16例IGRA阴性(特异性64.0%,95%CI:44.5%~79.8%);58例患者中,37例抗酸染色阳性(敏感性63.8%,95%CI:50.9%~74.9%),66例对照组中,52例阴性(特异性78.8%,95%CI:67.5%~86.9%);qPCR与海分枝杆菌培养联合检测的敏感性为93%,对照组均为阴性,特异性100%。结论本研究建立了一种高敏感性的海分枝杆菌qPCR检测方法,其联合培养方法可进一步提高海分枝杆菌检测的敏感性。