香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种的快速检测与鉴定

【目的】从香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种特有的基因序列入手,建立一种快速可靠的分子检测技术,为防止香蕉枯萎病的传播蔓延、尽早采取防治对策、指导香蕉生产进行品种配置提供理论依据。【方法】根据研究室已经筛选到的4号生理小种候选致病相关基因序列设计引物,分别以来自海南、广东和广西的6个香蕉枯萎病菌1号生理小种菌株、7个4号生理小种菌株、7个尖镰孢其它专化型菌株以及2个外围菌株DNA为模板进行PCR扩增,筛选香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种特异性引物及尖镰孢菌的通用引物。【结果】筛选到的特异性引物不仅可用于香蕉枯萎病菌DNA的检测,还可直接用于对罹病香蕉组织和土壤中的香蕉枯萎病菌的检测;筛选到的尖镰孢菌通用引物,可作为内参照以检测DNA的质量,以避免假阴性情况的出现。【结论】所建立的三重PCR检测方法实现了在一次PCR反应中快速、准确地同步检测香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种,对检测香蕉苗是否感染枯萎病及蕉园土壤是否受到香蕉枯萎病菌的污染具有重要意义。

应用磁免疫技术快速检测食源性沙门氏菌方法研究

目的应用磁免疫分离技术建立快速检测食源性沙门氏菌应用方法。方法食品样品在含有免疫磁珠的循环体系中筛选,如有目标菌则被固化的免疫磁珠捕获,浓缩富集的免疫磁珠在显色培养基中直接培养,可疑菌落通过全自动细菌分析鉴定仪及荧光定量PCR方法确认。结果食品沙门氏菌免疫磁珠检测方法能快速有效富集食品基质中的目标菌,检测限达到<10cfu/25g,检测周期约为40小时。结论成功建立了可应用于日常食品微生物检测的食源性沙门氏菌磁免疫分离检测技术。

基于多重实时荧光PCR技术快速检测海产品异尖线虫

【目的】构建简单异尖线虫(Anisakis simplex)、费氏宫脂线虫(Hysterothylacium fabri)、内弯宫脂线虫(Hysterothylacium aduncum)、拟地新线虫(Pseudoterranova decipiens)、典型异尖线虫(Anisakis typica)、带鱼针蛔线虫(Raphidascaris trichiuri)、厦门宫脂线虫(Hysterothylacium amoyense)和中华宫脂线虫(Hysterothylacium sinense)的快速检测方法,实现对以上8种异尖线虫的高通量检测及准确分型。【方法】采集8种异尖线虫核酸进行凝胶电泳,测序并进行序列对比,设计引物和TaqMan荧光探针;通过优化体系及退火温度,建立多重实时荧光PCR检测体系,并添加海产品核酸背景验证其特异性和灵敏度。【结果】建立了基于多重实时荧光PCR技术针对海产品中异尖线虫的快速检测鉴定方法,可在一个反应体系里同时检测鉴定4种异尖线虫,双通道反应体系可一次性检测鉴定8种异尖线虫。体系中,引物和探针的终浓度分别为0.60、0.20μmol/L,DNA灵敏度为103拷贝/mL;对带鱼(Trichiurus lepturus)、鳕鱼(Gadus)、舟山宫脂线虫(Hysterothylacium zhoushanensis)、棘颚口线虫(Gnathostoma spinigerum)均无荧光信号;针对等量混合的4种异尖线虫模拟样本均可检出,检出限为1.0%。【结论】建立的海产品异尖线虫多重实时荧光PCR快速检测方法操作简便、灵敏度高、特异性强、重复性好,可应用于日常食品检验和异尖线虫分型鉴别研究。

MRSASelect显色培养基在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌鉴定中的研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistance Staphylococcus aureus,MRSA)是医院内最常见的病原菌,与乙型肝炎,艾滋病同为当今世界三大感染顽疾。MRSA是院内感染的主要杀手,由MRSA引起的感染在世界许多国家具有很高的发病率和病死率,对MRSA进行快速、精确的检测和筛查,成为关键环节。作为一种新型的专用显色培养基,MRSASelect培养基能应用于多种临床样品来源的MRSA检测和鉴定,具有较高的灵敏度和特异性,与传统培养法、商用培养基以及核酸扩增检测法相比,在耗时、耗费、简易性等方面,均具有一定优势。