比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果

目的探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响。方法以体外成熟培养18h的水牛卵母细胞为实验材料，分别以0．25ml冻精塑料细管（A）、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管（D）和两种制作核移植工具针的玻璃细管（B、C）为冷冻载体卵母细胞，解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标。结果A组卵母细胞冷冻保存效果最差（成熟率：AVSB、C、D为43．9％VS51．7％、51．9％、55．9％，2～4细胞率：AVSB、C、D为34．1％VS40．0％、40．7％、41．2％），D组卵母细胞冷冻效果最好，但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组（DVSA、B、C为69．2％VS87．0％、94．1％、91．9％）。B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组，低于D组，但差异不明显，且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组（P〈0．05）。结论综合回收率和解冻后早期胚胎发育率，B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体。

玻璃化快速冷冻仪在猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻中的应用

为了提高猪成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果,应用玻璃化快速冷冻仪(Vit-Master)进行猪成熟卵母细胞的冷冻,以观察其冷冻效果。结果显示:浆状液氮降温速率[(21 345±l768)℃/min]远远高于普通液氮降温速率[(11 982±1 936)℃/min];各组冻后形态完整率无显著差异;冻后存活率为:使用玻璃化快速冷冻仪的不同浓度保护剂组[A':(57.87±10.66)%、B':(76.5±10.33%)、C':(79.07±14.90)%和D':(81.94±6.98%)]均分别高于对应的不使用玻璃化快速冷冻仪组[A:(49.73±2.91)%、B:(60.63±12.45)%、C:(71.33±14.38)%和D:(78.50±7.40)%],但均无显著差异,B'和C'组均高于C和D组,但差异不显著,A和A'组均显著低于B'、C'和D'组。因此,通过使用Vit-Master冷冻装置提高冷冻速率,可以降低冷冻保护剂使用浓度并提高冻后存活率。

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片(A)组、冷冻小钩(B)组、电镜铜环(C)组、自制冷冻叶片(D)组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.01);D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。