天然产物中酶抑制剂的快速筛选方法研究进展

酶是新药发现的重要靶点,酶抑制剂的开发对于疾病治疗具有重要意义。中药及天然产物种类繁多、结构多样、生物活性广泛,是酶抑制剂的重要源泉。然而,中药及天然产物结构复杂、活性成分含量较低,高效准确地从中筛选出酶抑制剂至关重要。近年来,随着生物大分子构象研究的深入及计算机科学的发展以及现代分离分析技术及仪器的创新,一系列酶抑制剂的快速筛选技术与方法应运而生。本文将系统介绍天然产物中酶抑制剂的快速筛选方法,包括计算机虚拟筛选、基于酶分子与配体之间特异性作用的亲和筛选以及结合色谱分离的生物活性测试等,并对此进行优缺点比较,以期为中药及天然产物中酶抑制剂的发掘提供参考。

农产品混合样品中农药残留的快速筛选定量检测方法

为提高农产品的检测效率,本文首次提出了农产品混合样品中农药残留快速筛选定量检测方法的概念和技术条件,同时提出了基于超高效液相色谱-串联质谱的农产品混合样品中108种农药残留快速筛选定量检测方法。本文依据色素含量进行分类制备混合样品开展筛选检测,结果显示,样品前处理中氮吹复溶溶剂丙酮-水-甲醇选择2∶3∶5 (体积比)的配比最为适合;108种农药化合物的定量限在0.5~5.0μg/kg之间,全部低于GB 2763-2021 《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》规定的各农药最大残留限量,满足检测要求;方法的线性范围为0~20.0μg/L,相关系数大于0.990。低浓度0.5~5.0μg/kg的加标水平下108种农药化合物的回收率在60%~120%范围内,中浓度10.0μg/kg、高浓度20.0μg/kg的加标水平下其回收率在80%~110%范围内,低浓度和中高浓度加标水平下变异系数分别≤20%和<11%,上述指标完全符合GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范食品理化检测》对检测方法回收率和精密度的要求。本文选择的108种农药有广泛代表性和针对性,因此在实际检测工作中本方法有很强的应用价值。

电场辅助筛选技术快速筛选窖泥中的产酸菌

中国浓香型白酒的风味形成中起着关键作用的是窖泥中的产酸菌。由于梭状芽孢杆菌的培养条件恶劣,一旦培养不当,容易造成窖泥老化,降低浓香型白酒的质量。因此,研究梭菌的培养条件具有重要意义。研究采用电场辅助筛选法和传统筛选法对窖泥中的产酸梭菌进行筛选。两种方法共筛选得到23株形态具有差异的细菌,其中电场辅助筛选的菌株产酸能力是传统筛选菌株的2倍以上,其中C2菌株初步总产酸能力达到830.9mg/L,己酸初步产量达到8.5 mg/L,是传统筛选菌株(己酸0.6 mg/L)的十倍以上。该技术可用于改善窖泥的老化,进一步提高浓香型白酒的质量。也可用于其它厌氧条件严格的微生物的筛选和培养。

EDX法对轨道交通地板布中铅、镉有害元素快速筛选的应用

本研究采用自制的地板布样品作为标准样品建立EDX法标准工作曲线,测定标准样品,研究EDX法的准确度,结果表明EDX法测试结果准确可靠;采用GB 18586-2001(GF-AAS)法测定地板布中铅、镉溶出量,研究地板布中铅、镉总量与溶出量的相关性,建立总量预测溶出量的预测模型并制订快速筛选规则。通过实验室间比对和筛选有值样品,验证预测模型和快速筛选规则的可靠性、适用性,结果表明预测结果与实测结果吻合性良好,快速筛选规则适用性广。预测模型和快速筛选规则联合应用,可快速有效地判定可溶性铅、镉含量合格和不合格品,帮助企业快速有效地掌握合格和不合格品中铅、镉的溶出情况,同时,可实现经过一次测试同时判定两个管控指标的效果,达到准确高效的环保检测目的。

基于林草湿数据的快速筛选造林图斑方法

国土“三调”与林草湿融合数据,以第三次全国国土调查数据为统一底板,厘清了林地、草地、湿地与其他土地范围界线,是开展国土绿化造林规划设计外业调查、实地举证、成果分析的重要基础。结合衢江区油茶生产保供专项工作任务,本文探讨如何利用ArcGIS软件相关工具,快速从2022年国土“三调”与林草湿融合数据中筛选适宜造林图斑,为后续各项工作的开展提供指引和参考。

试析纺织品中重金属快速筛选方法

我国纺织业是关系经济和社会发展的重要产业,保证纺织品的品质,成为各个纺织企业非常重视的工作内容。与此同时,环保和生态理念已经日益深入人心,在纺织品重金属快速筛选方面,行业提出了更高的要求。为了保证我国纺织品重金属含量不要超标,出现了许多重金属筛选的方法,确保检测技术的结果更为快速、精准。

采用微波消解—电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法快速筛选纺织品中有机锡

检测纺织品中有机锡含量的传统方法成本高、周期长,因此需建立一种快速筛选方法,即将纺织品加酸后微波消解,消解液经稀释定容后测试其中的总锡含量,通过锡占有机锡阳离子质量分数折算纺织品中有机锡含量。为探讨该方法的可行性进行了试验。该试验结果表明,ICP-MS测定锡元素的方法定量限为0.03 mg/kg,17种有机锡在不同基质的纺织品中加标回收率在70%~120%之间,相对标准偏差(RSD)小于5%。该试验表明,该方法稳定性好,操作简单,成本低,可快速筛选大量样品。

采用三角坐标图法快速筛选5%己唑醇悬浮剂配方

【目的】建立快速筛选己唑醇悬浮剂最佳配方的实用方法。【方法】以5%己唑醇悬浮剂配方为例,将悬浮剂体系分为润湿分散体系和抗沉降体系,分别运用于三角坐标图法。将确定的3个供筛因素,作为三角坐标系的3个顶点,并研磨3个母液,再按照配方利用10 000转/min剪切条件进行调配制得配方,选用重要且快速简单的性能评价指标如粘度、贮存析水率、悬浮率和分散性等,在得到质量较优的配方区域的基础上,进一步筛选得到最优配方。【结果】得到了5%己唑醇悬浮剂理想的配方:5%己唑醇,0.5%NP-10,1%1602,3.5%木质素磺酸钠,0.025%黄原胶,2%硅酸镁铝,2.5%钠基膨润土,3%乙二醇,水补至100%。筛选过程中共需要约1 040 g样品,研磨和调制配方共耗时约13 h,比全部采用砂磨工艺可节省时间3/4,节省原材料1/2以上。【结论】三角坐标图法操作简便、节省材料,提高了悬浮剂配方筛选的科学性和效率,具有良好的实用性。

油菜苗期耐淹性快速筛选方法的建立及验证

为建立一种快速准确的油菜苗期耐淹性鉴定方法,对油菜种质资源进行耐淹试验。通过调查幼苗期湿害/渍害、半淹、全淹三种处理下的死苗率,发现全淹(没顶淹水)6d、排水后7d的相对死苗率可作为幼苗耐淹性鉴定指标。具体过程如下:选取饱满种子,置于铺有1层湿润滤纸的培养皿中,25℃处理36h,取正常发芽的种子均匀移栽到塑料杯里的潮湿土壤中,培养条件为光照10h 25℃、黑暗14h 20℃,生长36h;待幼苗子叶平展时,每杯留苗20株全淹6d,排水后7d调查死苗率。用此方法对50份油菜种质资源进行耐淹性鉴定,获得3个较耐淹材料和5个淹水敏感材料。与已知耐湿系数的材料相比,它们的耐淹特性在形态和生理上均得到验证,表明本文方法可行,具有快速、准确的优点。

纺织品中禁用偶氮染料的快速筛选

建立了一种快速筛选纺织品中禁用偶氮染料的方法。通过改变现行标准方法中的浸润时间、浸润试剂和剥色方法,缩短检测时间。该方法称样量是标准方法的1/5,有机溶剂的使用量降低至标准的1/40,利用加速溶剂萃取装置,将剥色时间缩短到标准的1/3。

一种简单、快速筛选水稻种胚脂氧合酶-3缺失体的新方法

根据水稻种胚脂氧合酶 3(LOX 3)催化产物的氧化特性 ,结合脂氧合酶的专一性抑制剂———去甲二氢愈创木酸 ,建立了筛选水稻种胚脂氧合酶 3缺失体的I2 KI比色法 ,并探讨其最佳实验条件 .与常用的单克隆抗体筛选技术相比 ,该方法具有准确、简单且成本低的特点 。

利用荧光定量PCR进行饲料中牛羊源性成分检测的快速筛选

通过荧光定量PCR进行饲料中牛羊源性成分的快速筛选研究,其可以快速的检测饲料中是否含有牛羊源性成分,避免了常规检测中大量阴性样品造成的巨大工作量,并首次对饲料中牛羊源性成分进行定量分析,推导出定量计算公式,且灵敏度比常规的PCR检测方法高100倍以上。

生物转化共轭亚麻酸乳酸菌的快速筛选

共轭亚麻酸是一种具有共轭双键的十八碳三烯酸,具有抗炎、抗癌等多种生理活性,是功能性脂质研究的热点之一。运用共轭双键的光谱吸收特性,建立了快速筛选高产共轭亚麻酸乳酸菌的方法。利用GC-MS对快速筛选法的结果进行了进一步验证,两者结果完全一致,表明快速筛选法可有效、准确地运用于高通量筛选高产共轭亚麻酸的菌株。

海因酶产生菌的微孔快速筛选法

目的 建立微孔快速筛选法以筛选海因酶活力较高的菌株。方法 比较底物对羟基苯海因的多种有机溶剂对酶反应的影响。结果 筛选出一株酶活力较高的海因酶产生菌腐臭假单胞菌 95 0 5 (Pseudomonasputida95 0 5 )。发现吐温 - 80 (1% )能很好溶解底物 ,促进酶反应。结论 为从大批量菌株中快速筛选出较高酶活力的菌株提供了一种新的方法。

高产谷氨酰胺转胺酶茂原链霉菌的快速筛选

【目的】考察茂原链霉菌单菌落表面纹饰特征及边缘特征与产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)能力的关系,建立一种根据菌落形态快速初筛高产株的方法。【方法】通过自然选育,将原始菌株分离纯化后得到不同形态的单菌落,从中选出典型的表面纹饰特征和边缘特征单菌落。用试管发酵48h后测定各形态菌落的酶活,并通过摇瓶发酵验证依据菌落形态特征初筛MTG酶高产株方法的可行性。【结果】表面厚实饱满呈馒头型且边缘毛糙的菌落酶活最高,而表面平薄、边缘光滑的菌落酶活最低。根据这一形态鉴定法,通过摇瓶发酵,筛选出了一株产MTG酶活高达6.33U/mL的菌株,其活性比原始出发株提高了20.1%。【结论】根据菌落形态筛选MTG酶高产株的方法是可行的。

快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究

目的研究快速筛选调节肝脂酶活性中药成分的方法。方法利用大鼠肝组织匀浆和比色法检测肝脂酶(HL)活性,观察不同实验条件及中药成分对HL活性的影响。结果正常大鼠肝组织匀浆具有明显的HL酶促动力学特性,其HL脂解活性有明显Ca2+依赖性,受钙调蛋白拮抗剂盐酸异丙嗪抑制,符合纯化HL的酶促动力学特性;筛选得到齐墩果酸和人参皂苷Rb22个增强肝脂酶活性成分。结论首次用大鼠肝组织匀浆和脂酶比色测定法建立了一种简便易行、快捷的调节肝脂酶活性中药有效成分筛选方法,可用于影响肝脂酶活性的中药调脂活性成分的筛选,并从有效方药组分中筛选得到有增强HL活性的组分。

环糊精糖基转移酶高产菌株的快速筛选

以酚酞作指示剂 ,在琼脂固态培养基上 ,根据酚酞变为无色所形成变色圈大小筛选环糊精糖基转移酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。嗜碱芽孢杆菌 1177菌株经紫外线和γ射线诱变处理后 .经该法筛选得到突变株圈 7- 12 ,该菌株产环糊精糖基转移酶达 5 6 0 0u/ml,较出发菌株提高 183%。连续 5代传代试验表明 ,突变株 7-

一种快速筛选阳性克隆的方法——反向Northern印迹杂交技术

本实验采用反向Northern印迹杂交 (reverseNorthernblot)技术 ,对经反转录差异显示PCR(differentialdisplayre versetranscriptionalPCR ,DDRT PCR)获得的 5 6个差异片段 (cDNA)进行阳性片段的初步筛选 ,获得 8个候选阳性片段 ,经Northern印迹杂交实验 ,确证 5个阳性片段。实验表明该方法是一种快速检测和筛选阳性克隆片段的方法 ,并具有简便、经济的优点。它不仅可用于各种分离差异片段的方法中差异片段的初步筛选 。

酶联免疫检测技术在水环境雌激素快速筛选中的应用研究

采用酶联免疫(ELISA)检测技术,对长江口水样和污水处理厂水样中的典型雌激素雌二醇(E2)进行分析,并与化学检测浓度进行验证比较.结果表明:ELISA的检测限可低至0.5 ng.L-1,试验的变异系数小于30%,具有较高的灵敏性和良好的重复性;ELISA检测长江口采集的水样中E2浓度范围在0.5 ng.L-1以下到0.7 ng.L-1,污水处理厂水样中E2浓度范围在2.5～11.5 ng.L-1,与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的分析结果相比,相关系数R2为0.9147,表明两种方法具有良好的相关性;ELISA检测所需的水样量比LC-MS/MS更少,使用96微孔板可同时对43个样品进行检测,从而缩短了单个样品的分析时间,具有快速简便和经济适用性.

快速筛选技术的评价验证

快速筛选技术是指包括样品制备在内,能够在较短时间内出具检测结果的行为,也称之为快速检测技术。随着我国食品安全问题广受关注,快速筛选技术便成为研究的重点。快速检测目前主要应用于食品中农、兽药残留,微生物致病菌,营养成分,不明污染物等针对食品安全的现场快速检测及常规检测。本文介绍了分子光谱法、免疫分析方法、酶抑制法和生物传感器等几种快速筛选技术的研究进展以及在食品安全检测等领域的应用。随着快速筛选技术的不断发展使得快速检测方法及其相关仪器产品种类越来越多且原理复杂,快速检测方法的质量控制和方法验证显得尤为重要。本文重点阐述了快速筛选技术与方法的评价验证,其主要技术参数包括:敏感度、阴性和阳性界限值的准确性、选择性和特异性、检出限、定量限、重复性和再现性等,并对其发展前景进行了展望。