体内D-酸性氨基酸分析的自动二维手性高效液相色谱法的建立及应用

D-酸性氨基酸的生理功能和疾病标志物作用已逐渐成为代谢组学和创新药物开发的研究热点,本研究利用硅胶基质ODS整体柱为第一维分离色谱柱,乙腈-三氟醋酸-水（9∶0.05∶92,V/V）为流动相;Chiralpak QD-1-AX微径手性色谱柱为第二维手性分离柱,10 mmol/L柠檬酸的甲醇-乙腈（50∶50,V/V）溶液为流动相,4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑（NBD）-F衍生化荧光法检测,建立了二维手性高效液相色谱全自动分析系统。本系统实现了对生物样品中酸性氨基酸异构体的高效快速分离（Rs〉2.5）;高灵敏度检测（LOD=1 fmol）及定量值的确证,酸性氨基酸异构体回收率均在97%-104%之间,日内日间精密度的RSD〈5%。应用本系统对免疫功能低下的老年病小鼠动物模型快速老化小鼠亚系1（SAMP1）进行分析,测得SAMP1小鼠胸腺和脾脏中D-天门冬氨酸的含量分别为（206±18）nmol/g和（264±21）nmol/g。首次发现了其胸腺和脾脏中D-天门冬氨酸的含量较对照组同龄抗快速老化小鼠亚系1（SAMR1）有显著升高趋势（p〈0.01）。