有氧和抗阻运动经IL-18/IL-18R通路对SAMP8小鼠抗皮肤老化的作用研究

目的:探讨有氧和抗阻运动经白细胞介素18(IL-18)/IL-18受体(IL-18R)通路对SAMP8小鼠皮肤老化的影响,为运动抗皮肤老化以及防治慢性炎症性皮肤相关疾病提供新思路。方法:健康雄性28周龄快速老化SAMP8小鼠24只,随机分为模型组、有氧运动组和抗阻运动组,每组8只,另设8只同龄抗快速老化SAMR1小鼠作为对照组。有氧运动组采用匀速水平运动跑台训练8周(每天1次,每周5次),模型组采用递增负重爬梯训练8周(隔天1次,每周3次)。HE染色观察皮肤表皮、真皮结构改变;间苯二酚碱性品红染色观察皮肤弹力纤维的变化;免疫组织化学观测皮肤衰老标志物P16和P21的表达;ELISA法检测血清和皮肤炎症指标IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量及皮肤IL-18R和IL-18结合蛋白(IL-18BP)含量;免疫荧光法双染IL-18和IL-18R;RT-qPCR检测IL-18和IL-18R的mRNA表达水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠表现出明显的衰老体征,HE染色可见皮肤纹理粗糙,皮肤变薄等;间苯二酚染色可见弹力纤维排列紊乱,出现分离、增粗变短、扭曲断裂现象;皮肤表皮层和真皮层中P16和P21蛋白表达升高(P<0.01);血清和皮肤IL-1β、TNF-α和IL-18含量显著升高,皮肤IL-18R含量显著升高,IL-18BP含量显著降低(P<0.05或P<0.01);IL-18与IL-18R存在共定位现象;皮肤IL-18和IL-18R的mRNA表达量均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,有氧运动和抗阻运动组皮肤外观明显改善;表皮厚度均显著增加(P<0.05或P<0.01),抗阻运动组真皮厚度显著增加(P<0.05);弹力纤维排列较整齐有序;有氧运动组皮肤P16蛋白表达降低(P<0.05);有氧运动组血清TNF-α含量、血清和皮肤IL-18含量显著降低(P<0.05),抗阻运动组血清和皮肤IL-1β、TNF-α和IL-18含量显著降低(P<0.05或P<0.01);有氧运动组和抗阻运动组皮肤IL-18R含量均显著降低(P<0.01),IL-18BP含量均显著升高(P<0.01),IL-18与IL-18R共定位表达均显著降低;IL-18和IL-18R的mRNA表达量均显著降低(P<0.01)。结论:有氧运动和抗阻运动均能延缓快速衰老小鼠的增龄性皮肤老化,运动下调的IL-18/IL-18R信号通路可能是其作用途径。

针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的改善作用

目的探讨针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的影响。方法选取SAMP8小鼠分为SAMP8对照组,针刺组,非穴组,并设SAMR1对照组。针刺组采用“益气调血,扶本培元”针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果与SAMR1对照组比较,SAMP8小鼠在隐蔽平台试验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长(P<0.05)。针刺组第5天的逃避潜伏期为(48.34±13.01)s,与SAMP8对照组比较显著缩短(P<0.05);反向试验中第3天的逃避潜伏期为(55.03±15.49)s,比SAMP8对照组亦显著缩短(P<0.05);探索试验中针刺组原平台象限的停留时间为(20.19±5.85)s,显著多于SAMP8对照组和非穴组(P<0.05),与SAMR1对照组比较无显著差异。结论针刺可以改善快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8的认知功能。

三七总皂苷对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8脑组织中NF-κB/p50表达的影响

目的观察三七总皂苷(PNS)对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8脑组织中大脑转录因子NF-κB/p50表达的影响。方法将60只SAMP8随机分为对照组、PNS高剂量组、PNS低剂量组、石杉碱甲(Huperzine A)组,每组15只。PNS高、低剂量组分别给予PNS 200 mg/kg、100 mg/kg灌胃,Haperzine A组给予Huperzine A 0.03 mg/kg灌胃,对照组给予相同容积生理盐水灌胃,均每天1次,连续给药2个月。灌胃结束后,取小鼠脑组织。分别采用real-time PCR技术、Western blotting、免疫组化法检测小鼠脑组织中的NF-κB/p50 mRNA、NF-κB/p50蛋白、NF-κB/p50阳性细胞。结果 PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50 mRNA的相对表达量分别为1.61±0.05、1.72±0.19、1.36±0.24、1.85±0.08;PNS高剂量组与对照组相比,P<0.05;Huperzine A组与对照组相比,P<0.01。PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50蛋白的相对灰度强度分别为0.696±0.029、0.910±0.038、1.315±0.014、1.436±0.025;PNS高剂量组、PNS低剂量组对照组相比,P均<0.01;Huperzine A组与对照组相比,P<0.05。PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50阳性细胞数分别为(35±6)、(5±7)、(63±4)、(71±11)个/HP;PNS高剂量组、PNS低剂量组与对照组相比,P均<0.01;Huperzine A组与对照组相比,P<0.05。结论 PNS能降低SAMP8脑组织中NF-κB/p50 mRNA和蛋白的表达,可能是其下调淀粉样前体蛋白基因表达的作用机制。

“补肾活血”针法对快速老化模型小鼠SAMP8学习记忆能力及海马CA1区NEP表达的影响

目的研究"补肾活血"针法对快速老化模型小鼠SAMP8(Senescence Accelerated Mouse Prone 8,SAMP8)学习记忆能力及海马CA1区中性内肽酶(neprilysin,NEP)表达的影响。方法将6月龄雄性快速老化模型小鼠SAMP8 20只随机分为针刺组和SAMP8对照组,各组10只;另选取10只同龄雄性正常老化小鼠SAMR1(Senescence Accelerated Mouse/resistant 1)为正常对照组。针刺组针刺"百会"、双侧"血海"、"肾俞"以及"膈腧"4周。治疗结束后,采用Morris水迷宫测定"补肾活血"针法对小鼠学习记忆能力的影响,免疫组化方法检测小鼠海马CA1组织中NEP的表达情况。结果针刺组学习记忆能力明显较SAMP8对照组增强(潜伏期缩短、跨平台象限次数增加)(P<0.05);针刺组NEP相对表达量明显较SAMP8对照组增高(P<0.05)。结论"补肾活血"针法可能通过上调NEP表达,促进Aβ降解,改善Aβ相关的认知障碍来防治阿尔茨海默病,这可能是"补肾活血"针法防治阿尔茨海默病作用机制的一部分。

快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的增龄性变化

目的对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的增龄性变化进行较系统的研究,为利用该模型进行其他研究提供实验依据。方法此实验选用1、4、8、12月龄的快速老化痴呆模型小鼠SAMP8,与同龄的正常老化小鼠SAMR1作对照,从老化度评分、避暗实验、Morris水迷宫实验和自主活动实验等方面观察了SAMP8小鼠学习记忆能力的增龄性变化。结果与对照组SAMR1相比,SAMP8小鼠随月龄增加老化度评分呈增高趋势,在8、12月龄的老化度评分值显著高于同龄对照组(P<0.05);避暗实验中,8、12月龄的SAMP8小鼠在电击24h后进入暗箱的潜伏期比同龄SAMR1小鼠显著缩短(P<0.05);Morris水迷宫实验中,1、4月龄SAMP8小鼠找到暗台的潜伏时间与同龄SAMR1小鼠相比差异无显著性,而8、12月龄SAMP8小鼠与同龄对照组相比,潜伏时间显著延长(P<0.05);从自主活动实验看,1、4、8月龄SAMP8小鼠单位时间内自主活动次数与同龄SAMR1小鼠相比无显著变化,而12月龄SAMP8小鼠与同龄对照组相比单位时间内自主活动次数显著减少(P<0.05)。结论SAMP8小鼠随月龄增长学习记忆能力逐渐减退;与同龄对照组相比,8、12月龄SAMP8小鼠出现明显衰老特征,表现出学习记忆能力明显低下,故可作为老化痴呆的动物模型用于痴呆有关研究。

针刺对快速老化脑萎缩及痴呆模型小白鼠(SAMP10)行为学影响的实验研究

[目的]研究“醒脑开窍”针法和“调补气血”针法对SAMP10行为学异常改变的影响。[方法]采用自然快速老化脑萎缩及痴呆模型小鼠SAMP10,于实验前后各进行1次穿梭箱实验 ,并记录小鼠遭受电击次数、电击时间及主动反应时间。[结果]实验前 ,6月龄P10与R1相比 ,各行为学指标均有显著性差异 (P<0.01) ;P10各组之间无显著性差异 (P>0.05) ;实验后 ,醒脑组、补气血组各项指标与P10对照组比较 ,均有明显改善 (P<0.05,或P<0.01) ,与R1比较 ,均有显著性差异 (P<0 .01) ,而两种针法间比较 ,无显著差异(P>0.05)。[结论]P10较同月龄R1学习记忆能力显著下降 ,是理想的脑萎缩及痴呆动物模型。“醒脑开窍”针法和“调补气血”

地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8定位导航学习记忆影响的研究

目的:探讨地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8的定位导航学习记忆的影响。方法:运用Morris水迷宫实验检测地黄饮子对SAMP8小鼠的定位导航学习记忆的改善情况。结果:地黄饮子能够显著缩短SAMP8小鼠在定位导航实验中的逃避潜伏期,提高SAMP8小鼠的学习记忆能力,地黄饮子治疗组与模型组比较差异具有显著性意义。结论:地黄饮子对SAMP8小鼠的定位导航学习记忆能力有一定的改善作用。

益智健脑颗粒对快速老化鼠SAMP8学习记忆的改善作用

目的观察中药益智健脑颗粒对老年性痴呆模型小鼠的学习记忆能力的影响。方法运用Morris水迷宫方法测试SAMP8快速老化模型小白鼠的定位航行和空间探索能力。结果中药益智健脑颗粒干预寻找水下平台的潜伏期(61.35±3.67秒)较模型组(85.49±2.96秒)显著缩短(P<0.05),跨平台象限游泳次数(6.10±1.37次)较模型组(3.70±1.16次)显著增多(P<0.05)。结论中药益智健脑颗粒能有效改善SAMP8快速老化模型小白鼠的学习记忆能力。

地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8海马神经元凋亡相关蛋白影响的研究

目的观察地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8海马神经元凋亡相关蛋白的影响,探讨地黄饮子治疗AD的作用机制。方法以快速老化小鼠SAMP8为研究对象,依据"补肾益髓,化痰行瘀,开窍醒神"的原则,给予地黄饮子灌胃,1次/d,连续灌胃28 d。采用免疫组化法观察地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8小鼠海马组织凋亡相关蛋白bax、bcl-2及cyt-c的影响。结果与模型组比较,地黄饮子可降低快速老化小鼠bax、cyt-c的表达,提高bcl-2的表达。结论地黄饮子可改善SAMP8小鼠海马神经元的细胞凋亡情况。

三七总皂苷对快速老化小鼠SAMP8空间探索和学习记忆力的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对快速老化小鼠SAMP8空间学习记忆功能的改善作用。方法采用Morris水迷宫方法以寻求次数、逃避潜伏期、原平台象限比、跨平台次数等为指标观察其行为学改变。结果PNS高、低剂量组在Morris水迷宫测试中,逃避潜伏期明显低于空白组;寻求次数、原平台象限比、跨平台次数明显增加,与空白组比较有显著性差异(P<0.05)。结论PNS对SAMP8学习记忆功能有明显改善作用。

开心散对快速老化痴呆小鼠SAMP8炎症因子及β-APP影响随机平行对照研究

[目的]观察开心散对快速老化痴呆小鼠SAMP8炎症因子及β-APP影响。[方法]使用随机平行对照方法,将40只SAMP8小鼠按随机数字标法分为4组,10只/组,模型对照组、开心散组(高、低剂量组)、艾地苯醌组。正常对照组10只SAMR1小鼠。采用ELISA双抗体夹心法测定干预后脑组织及血清TNF-α、IL-8和β-APP含量。[结果]与正常对照组比较,模型组小鼠脑组织TNF-α、IL-8和β-APP含量明显升高(P<0.01),血清TNF-α、IL-8和β-APP浓度明显降低(P<0.01);与模型组比较,开心散低剂量组、开心散高剂量组小鼠脑组织TNF-α、IL-8和β-APP含量明显降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-8和β-APP浓度明显升高(P<0.01)。[结论]开心散可减少脑组织的β-APP含量,降低炎症因子TNF-α、IL-8水平。

快速老化模型小鼠SAMP6骨组织形态计量学观察

目的 验证SAMP6小鼠自日本引进中国以来 ,其自发性骨质疏松的病理特点是否得以保持。方法 通过观察比较快速老化模型小鼠SAMP6与正常老化小鼠SAMR1骨组织形态计量学及其增龄性变化 ,确定SAMP6小鼠是否存在骨质疏松。结果 SAMP6不仅骨量低 ,骨的显微结构也表现为骨小梁稀疏、细小 ,骨小梁间隙大。结论 SAMP6小鼠引进成功 。

淫羊藿苷对快速老化小鼠SAMP8学习记忆功能影响的研究

目的:研究淫羊藿苷(Icaritin,ICA)对快速老化小鼠SAMP8学习记忆功能的影响。方法:按体重随机挑选10只8月龄抗快速老化小鼠SAMR1和50只同月龄快速老化小鼠SAMP8,并将SAMP8随机分为5组(模型组、多奈哌齐组和ICA50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg组),灌胃给药1个月,在给药前后分别用Morris水迷宫、SMG-2迷宫和跳台方法检测SAMR1和SAMP8的学习记忆功能能力。结果:与给药前相比,给药后的快速老化小鼠SAMP8定位航行和空间搜索能力以及被动反应能力得到提高。结论:ICA可以改善SAMP8的学习记忆能力。

红芪替换玉屏风散中黄芪对SAMP8小鼠抗免疫老化作用的比较

目的比较研究含红芪和黄芪玉屏风散对快速老化小鼠8(SAMP8)抗免疫衰老作用。方法通过MTT法确定最佳含药血清质量分数和作用时间,并检测最佳含药血清对T淋巴细胞增殖能力的影响。流式细胞术检测含药血清对T淋细胞亚群分化的影响。ELISA法检测培养上清液中白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。RT-PCR法检测含药血清对T淋巴细胞Pi3k mRNA表达的影响。结果当含药血清质量分数为40%,作用时间为48 h时对SAMP8小鼠的脾淋巴细胞促进增殖的作用最强;含红芪和黄芪的含药血清对SAMP8小鼠T淋巴细胞亚群的分化作用不明显,没有统计学差异;红芪和黄芪含药血清均可增加IL-2、IFN-γ的分泌(P<0.05);红芪和黄芪玉屏风散均可增加Pi3k mRNA的相对表达量,且红芪组明显优于黄芪组(P<0.05)。结论含红芪和黄芪的玉屏风散均有抗免疫老化的作用,且红芪玉屏风散在诱导T淋巴细胞增殖、上调Pi3k mRNA的表达方面作用优于黄芪,所以在抗免疫衰老方面红芪可以替代黄芪。

三七总皂苷对快速老化模型小鼠大脑β-分泌酶活性及含量的影响

目的研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)对快速老化小鼠亚系8(senescence accelerated mouse-prone 8,SAMP8)小鼠大脑β-分泌酶(Beta-site amyloid precursor protein cleavage e-zyme,BACE,主要是BACE1)活性及含量的影响。方法选择SAMP832只,随机分为对照组、PNS高剂量组(200mg/kg)、PNS低剂量组(100mg/kg)和石杉碱甲组(0.3mg/kg),每组8只,对照组给予等容积双蒸水灌胃。每天灌胃1次,连续给药2个月。分别采用直接荧光法和Westernblot法检测SAMP8大脑BACE1的活性和BACE1蛋白含量。结果 PNS高低剂量组(高剂量组:2.008±0.031;低剂量组:2.221±0.029)和石杉碱甲组(2.267±0.076)相对荧光单位(RFU/μg)值均比对照组(2.403±0.058)低(P<0.01)。PNS高低剂量组(高剂量组:0.900±0.028;低剂量组:1.000±0.032)和石杉碱甲组(0.837±0.080)BACE1蛋白表达均比对照组低(2.210±0.074,P<0.01)。结论高于100mg/kg的PNS可以降低SAMP8脑内BACE1活性,下调BACE1蛋白表达。

三种针法对快速老化痴呆模型小鼠老化度评分及行为学影响研究

目的探讨三种针刺方法对快速老化痴呆模型小白鼠(senescence-accelerated mice prone 8,SAMP8)认知功能的影响并进行针法优选。方法选取SAMP8小鼠60只随机分为SAMP8对照组、针刺腹穴组、针刺背俞穴组、针刺腹背穴组和针刺非穴组,每组12只,并设抗快速老化亚系小鼠(senescence accelerated mouse resistance1,SAMR1)对照组12只。针刺腹穴组采用"益气调血,扶本培元"针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;针刺背俞穴组采用双侧肺俞、脾俞和肾俞;针刺腹背穴组采用针刺腹穴加背穴组穴;针刺非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点;SAMP8对照组与SAMR1对照组均不做任何治疗。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果 (1)三种针刺方法均能显著性降低老化度评分,而腹穴组和腹背穴针刺有肯定、显著的疗效优势。(2)SAMP8小鼠存在学习记忆的获得、巩固、保留和再学习方面的认知损害,而三个针刺方法都能显著地改善这种认知功能损害且具有穴位特异性;其中,在隐蔽平台中,针刺背俞穴组起效早但疗效不稳定,针刺腹背穴组起效稳定且从第三天保持最短的平均潜伏期时间;反向试验中,SAMP8针刺腹穴组显示更快和更稳定的作用。结论三种不同针法均能抵抗SAMP8快速老化进程,改善SAMP8认知功能障碍,而改善特点不同。动物实验支持原有"益气调血、扶本培元"针法处方。

快速老化小鼠SAMP10的老化特征及其研究进展

快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse,SAM)是日本京都大学Takeda教授从AKR/J系小白鼠中通过表型选择培育出的快速老化模型。根据老化速度和病状特征,SAM鼠可以分为快速衰老的P系和抗快速老化的R系。快速老化小鼠SAMP10作为P系的一种,主要特征表现为与衰老相关的学习记忆障碍,具有β-淀粉样蛋白沉积、脑萎缩、神经DNA损伤、星形胶质细胞及小胶质细胞增生等病理变化,在行为学、神经递质以及分子水平方面均表现出一定的衰老变化,是目前较理想的研究阿尔采末病(AD)的动物模型。同龄对照组SAMR1具有正常的衰老特征,常用于SAMP10的正常对照。目前SAMP10是比较理想的用于研究学习记忆障碍的发病机制、评价抗衰老药物以及抗抑郁药的动物模型。

快速老化小鼠P8海马神经元突触可塑性相关的AMPA受体表达异常

目的比较快速老化小鼠P8(SAMP8)与抗快速老化小鼠R1(SAMR1)海马神经元突触可塑性相关的谷氨酸α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙酸(AMPA)受体表达差异,为阿尔兹海默病(AD)的发病机制提供实验依据。方法取雄性10月龄SAMP8 10只和SAMR1 9只,应用Morris水迷宫实验评价动物学习记忆能力,透射电子显微镜观察海马CA1区神经元突触界面超微结构,蛋白质免疫印迹法检测海马AMPA受体亚基GluR1、GluR2的表达。结果与SAMR1比较,SAMP8逃避潜伏期延长,目标象限时间百分比下降,穿台次数减少;海马CA1区神经元突触后致密带变薄,突触间隙增宽,突触界面曲率下降;海马GluR2含量下降,GluR1含量有下降趋势,但差异无统计学意义。结论海马AMPA受体异常可能是导致突触可塑性受损,引发SAMP8认知障碍的原因之一,AMPA受体在AD的发病中可能占有重要地位。

快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒增龄性变化

[目的]研究快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒的增龄性变化。[方法]以快速老化模型小白鼠SAMP10为脑老化动物模型 ,采用Southern杂交方法 ,测定了不同月龄SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化情况。[结果]SAM的细胞端粒长度在17～25kb之间 ,SAMP10小鼠脑细胞端粒具有随增龄而减少的趋势。[结论]从SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化来看 。

丰富环境联合褪黑素对SAMP8小鼠学习记忆功能及脑神经细胞凋亡的影响

背景:脑老化后神经细胞凋亡增多,其机制不明确。近年研究表明,褪黑素可调节多种凋亡因子的表达,丰富环境作为一种治疗阿尔茨海默病的有效方案已投入临床使用,然而二者合用是否有更好的疗效及其各自的作用机制目前尚不清楚。目的:探讨丰富环境与褪黑素联合干预对SAMP8小鼠学习记忆功能及脑神经细胞凋亡的影响。方法:选用3月龄雄性SAMP8小鼠24只,利用随机数字表法分成4组:对照组、丰富环境组、褪黑素组和联合处理组,每组6只。对照组和褪黑素组小鼠饲养于标准环境,丰富环境组和联合组饲养于丰富环境,直至小鼠满4月龄;满4月龄次日,褪黑素组、联合处理组小鼠开始皮下注射褪黑素8 mg/(kg·d),对照组、丰富环境组皮下注射等量生理盐水,共30 d。给药结束后继续饲养于原环境至11月龄,采用筑巢实验和Morris水迷宫实验评估小鼠学习记忆能力;行为学实验结束后,采用NeuN免疫荧光/TUNEL双标染色及尼氏染色观察海马CA1区细胞凋亡情况,采用Western blot法检测海马中凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2、P53的表达。结果与结论:①与对照组相比,其他3组小鼠的筑巢实验得分、Morris水迷宫跨平台次数、海马CA1区NeuN免疫反应性、尼氏染色阳性细胞数量、海马中Bcl-2蛋白表达显著增加(P<0.05),联合处理组上述指标值显著多于丰富环境组、褪黑素组(P<0.05);②苏木精-伊红染色显示,与对照组相比,其他3组小鼠海马CA1区神经细胞形态和排列较佳;③与对照组相比,其他3组小鼠的Morris水迷宫逃避潜伏期、海马CA1区免疫荧光/TUNEL双阳性细胞数量及Caspase-3、Bax、P53蛋白表达水平显著降低(P<0.05),联合处理组上述指标值显著低于丰富环境组、褪黑素组(P<0.05);④结果表明,丰富环境和褪黑素对SAMP8小鼠的学习记忆功能、脑神经细胞凋亡具有改善作用,其机制可能与调控小鼠海马神经细胞P53/P21通路来减少细胞凋亡有关;且将丰富环境和褪黑素联合应用的疗效很可能高于单方案治疗。