三种针法对快速老化痴呆模型小鼠老化度评分及行为学影响研究

目的探讨三种针刺方法对快速老化痴呆模型小白鼠(senescence-accelerated mice prone 8,SAMP8)认知功能的影响并进行针法优选。方法选取SAMP8小鼠60只随机分为SAMP8对照组、针刺腹穴组、针刺背俞穴组、针刺腹背穴组和针刺非穴组,每组12只,并设抗快速老化亚系小鼠(senescence accelerated mouse resistance1,SAMR1)对照组12只。针刺腹穴组采用"益气调血,扶本培元"针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;针刺背俞穴组采用双侧肺俞、脾俞和肾俞;针刺腹背穴组采用针刺腹穴加背穴组穴;针刺非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点;SAMP8对照组与SAMR1对照组均不做任何治疗。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果 (1)三种针刺方法均能显著性降低老化度评分,而腹穴组和腹背穴针刺有肯定、显著的疗效优势。(2)SAMP8小鼠存在学习记忆的获得、巩固、保留和再学习方面的认知损害,而三个针刺方法都能显著地改善这种认知功能损害且具有穴位特异性;其中,在隐蔽平台中,针刺背俞穴组起效早但疗效不稳定,针刺腹背穴组起效稳定且从第三天保持最短的平均潜伏期时间;反向试验中,SAMP8针刺腹穴组显示更快和更稳定的作用。结论三种不同针法均能抵抗SAMP8快速老化进程,改善SAMP8认知功能障碍,而改善特点不同。动物实验支持原有"益气调血、扶本培元"针法处方。

三七总皂苷对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8脑组织中NF-κB/p50表达的影响

目的观察三七总皂苷(PNS)对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8脑组织中大脑转录因子NF-κB/p50表达的影响。方法将60只SAMP8随机分为对照组、PNS高剂量组、PNS低剂量组、石杉碱甲(Huperzine A)组,每组15只。PNS高、低剂量组分别给予PNS 200 mg/kg、100 mg/kg灌胃,Haperzine A组给予Huperzine A 0.03 mg/kg灌胃,对照组给予相同容积生理盐水灌胃,均每天1次,连续给药2个月。灌胃结束后,取小鼠脑组织。分别采用real-time PCR技术、Western blotting、免疫组化法检测小鼠脑组织中的NF-κB/p50 mRNA、NF-κB/p50蛋白、NF-κB/p50阳性细胞。结果 PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50 mRNA的相对表达量分别为1.61±0.05、1.72±0.19、1.36±0.24、1.85±0.08;PNS高剂量组与对照组相比,P<0.05;Huperzine A组与对照组相比,P<0.01。PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50蛋白的相对灰度强度分别为0.696±0.029、0.910±0.038、1.315±0.014、1.436±0.025;PNS高剂量组、PNS低剂量组对照组相比,P均<0.01;Huperzine A组与对照组相比,P<0.05。PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50阳性细胞数分别为(35±6)、(5±7)、(63±4)、(71±11)个/HP;PNS高剂量组、PNS低剂量组与对照组相比,P均<0.01;Huperzine A组与对照组相比,P<0.05。结论 PNS能降低SAMP8脑组织中NF-κB/p50 mRNA和蛋白的表达,可能是其下调淀粉样前体蛋白基因表达的作用机制。

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠行为学变化的影响

目的研究金属硫蛋白(MT)3对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)水迷宫行为学变化的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,进行Morris水迷宫检测。结果与快速老化小鼠对照系(SAMR1)小鼠相比,SAMP8逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨越原平台次数明显减少(P<0.05);3种浓度MT3组当中高浓度MT3组逃避潜伏期最短,跨越原平台次数最多(P<0.05);高浓度MT3组与SAMR1相比,逃避潜伏期仍延长,跨越原平台次数减少(P<0.05)。结论高浓度MT3可以提高SAMP8小鼠的学习能力和记忆能力,其作用效果与浓度有关。

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠海马组织学变化的影响

目的研究金属硫蛋白(MT)3对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马结构CA1区神经元组织学变化的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,处死小鼠后应用光镜和电镜观察制备标本海马结构神经元的变化。结果快速老化小鼠对照小鼠(SAMR1)海马CA1区锥体细胞排列较整齐、均匀,胞膜完整,染色质分布均匀,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁清楚,细胞器清晰可见。SAMP8组海马CA1区可见锥体细胞稀疏、排列紊乱,大部分神经元肿胀、空化,出现凋亡细胞,很多胞核固缩深染,胶质细胞增多,有较多脂褐素沉积。低、中、高浓度MT3组海马CA1区锥体细胞较空白对照组结构较清晰,排列较整齐均匀。神经元核基质呈轻度空化改变,胞质内都可见线粒体、粗面内质网及脂褐素,胶质细胞减少。高浓度MT3组的超微结构最接近于SAMR1组,但仍处于老化状态。结论 SAMP8海马有组织结构和超微结构的改变。MT3对SAMP8海马锥体细胞有保护的作用。

三七总皂苷对老年性痴呆动物模型快速老化小鼠大脑Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)表达的影响

目的:探讨三七总皂苷(PNS)对快速老化小鼠SAMP8大脑Aβ1-40、Aβ1-42表达的影响。方法:采用免疫组织化学方法,随机选取快速老化小鼠大脑顶叶皮层、海马周围白质连续五个视野在高倍显微镜下观察,并计数五个视野下Aβ1-40、Aβ1-42免疫阳性细胞的平均个数。结果:PNS能明显减少快速老化小鼠大脑Aβ1-40、Aβ1-42免疫阳性神经元的数量。结论:PNS对SAMP8小鼠大脑Aβ1-40及Aβ1-42的表达有明显的抑制作用。

金属硫蛋白3对快速老化痴呆小鼠海马胶原纤维酸性蛋白表达的影响

目的研究金属硫蛋白3(MT3)对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马结构的胶原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,处死小鼠后应用免疫组化和免疫印迹方法检测海马结构GFAP的表达。结果 8月龄的SAMP8小鼠海马结构内可见大量浓染的GFAP阳性星形胶质细胞,GFAP含量最多。随着给予MT3浓度的增加,SAMP8小鼠海马结构内的GFAP阳性细胞减少,GFAP含量减少。结论 SAMP8小鼠海马结构星形胶质细胞增生,GFAP表达增多。MT3有减低GFAP表达的作用,随着浓度增加作用增强。

开心散对SAMP8小鼠神经递质的影响

目的观察开心散对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8神经递质的影响。方法将40只SAMP8小鼠按随机数字表法分为模型组、开心散高剂量组、开心散低剂量组、艾地苯醌组,每组10只,选10只SAMR1小鼠为正常组。灌胃给药干预8 w后,取血浆及组织上清,采用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织及血浆5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量。结果与正常组比较,各组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,开心散高剂量组和低剂量组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01)。结论开心散可以通过改善快速老化痴呆模型小鼠单胺类神经递质的含量,调整神经递质的不平衡状态,进而改善阿尔茨海默病(AD)的行为和精神症状。

调补气血针法对SAMP10脑中枢神经递质含量影响的研究

目的 :旨在揭示调补气血针法治疗痴呆的中枢作用机制。方法 :采用HPLC -ECD法对SAMP10及SAMR1脑组织单胺类神经递质和乙酰胆碱 (Ach)含量进行测定。结果 :①SAMP10脑组织DA、5 -HT、Ach的含量显著低于SAMR1的含量 ;②调补气血针法可使脑组织降低的DA、5 -HT、Ach的含量显著提高。结论 :①SAMP10小鼠的学习、记忆障碍发病机制之一可能是脑组织Ach和单胺类神经递质的代谢异常出现了神经损害 ;②调补气血针法改善了SAMP10的学习。

叶黄素对老年痴呆小鼠学习记忆能力的改善作用

目的探讨叶黄素对老年痴呆(AD)模型小鼠学习记忆能力的影响及相关作用机制。方法采用5月龄雄性快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)作为自然发病的AD模型,随机分为AD模型组和3个叶黄素剂量组(15、30、60 mg/kg BW),采用正常老化小鼠(SAMR1)作为正常对照组,连续灌胃8周。灌胃结束后采用Morris水迷宫对小鼠进行学习记忆能力测验,取小鼠脑组织检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和乙酰胆碱酯酶(Ach E)水平,取小鼠海马组织进行病理学观察。结果与AD模型组比较,叶黄素中、高剂量组的潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);3个叶黄素剂量组的CAT、Ach E活性均明显升高,GSH含量明显增加,MDA含量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);叶黄素高剂量组海马组织细胞异常明显减少。结论叶黄素可改善快速老化痴呆模型小鼠的学习记忆能力,其作用机制之一可能是提升小鼠的抗氧化能力,减少氧化应激损伤。

补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠海马区形态功能和皮层胆碱能系统的影响

目的研究补益脾胃元气方药人参、大补元煎、洗心汤对快速老化痴呆模型(SAMP8)小鼠空间学习记忆能力、海马区形态功能和皮层胆碱能系统的影响,探讨其治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法3月龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、人参组、洗心汤组、大补元煎组,以雄性抗快速老化型(SAMR1)小鼠为对照组。除对照组和模型组ig蒸馏水外,其余各组ig药物(10 mL/kg),1次/d,连续3个月。实验结束后采用Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力,透射电镜观察小鼠海马CA3区突触超微结构,免疫组化法检测CA1区神经元密度、脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)水平,生物化学法检测海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性。结果补益脾胃元气方药各组小鼠逃避潜伏期平均值明显下降,在目的象限游泳时间、穿过平台次数显著增加(P<0.05、0.01);各组小鼠Aβ阳性细胞数目显著降低(P<0.05、0.01),神经元特异核蛋白(NueN)阳性细胞密度有上升趋势,但无显著差异;各组小鼠ChAT活性升高(P<0.05、0.01),人参、洗心汤组小鼠AChE活性降低(P<0.05)。结论补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠空间识别和学习记忆能力有明显改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构、促进海马神经元修复、降低小鼠脑内Aβ表达、调节海马胆碱能系统有关。