快速老化鼠和自然衰老鼠中超氧化物歧化酶的比较研究

目的通过比较快速老化鼠(SAM-P/8)和昆明种自然衰老鼠中超氧化物歧化酶(SOD)表达情况,探讨两种衰老鼠之间异同及SOD在衰老过程中所起的作用。方法选用快速老化鼠(SAM-P/8)3月龄和6月龄各10只,昆明种小鼠3月龄和15月龄各10只,采用生物化学方法检测SOD蛋白活性和MDA含量;免疫组化对SOD蛋白的表达定位;蛋白印迹法检测SOD蛋白的含量变化;RT-PCR方法检测SOD基因的表达变化。结果两种衰老小鼠肝脏中SOD基因表达,SOD蛋白表达和活性均呈增龄性降低,MDA含量均呈现增龄性增加。结论快速衰老鼠和自然衰老鼠的SOD变化趋势相同,SOD在衰老过程中起了重要作用。

中药复方脑还丹对快速老化鼠SAM-P/8海马CA1区超微结构的影响

目的探讨中药复方脑还丹对快速老化鼠海马CAl区超微结构的影响。方法3月龄雄性SAM/P 8小鼠30只,随机分成对照组、脑还丹低剂量组、脑还丹高剂量组,分别给予生理盐水及不同剂量中药复方脑还丹灌胃治疗4月,取海马制作电镜标本,透射电镜观察海马CAl区神经元超微结构。结果对照组脂褐素增多,溶酶体数目增多且空化,粗面内质网偶有扩张或膜结构断裂,核糖体数目明显减少,线粒体数目减少,线粒体肿胀、核膜增厚,嵴断裂或萎缩成中空状,细胞核核膜模糊, 核周池不清,染色质呈凝聚样改变,核周空泡明显。脑还丹组上述变化明显减轻。结论脑还丹能够减轻神经元退行性变化。

快速老化鼠脑MT1和MT3 cDNA克隆及mRNA定量条件的建立

金属硫蛋白 (Metallothionein ,MT)基因家族的三种亚型MT1、MT2和MT3在脑组织中均有表达 ,它们在脑组织中具有重要的神经生理和神经调节功能 ,其中MT3可能是老年性痴呆 (Alzheimer′sdisease ,AD)潜在的病因学因子。本研究以快速老化鼠SAMP10脑组织总RNA为模板 ,通过RT PCR扩增出MT1的编码区序列和MT33′非翻译区序列的cDNA片段。将两个片段克隆到pGEM○R TEasy载体上 ,经测序分析确定两个cDNA片段分别为MT1编码区序列和MT33′非翻译区序列。Northern杂交结果表明 ,MT1和MT3mRNA在 2、4、6、8四个月龄的SAMP10和SAMR1脑组织中均有表达。同时建立了MTmRNA的定量条件 。

快速老化鼠耳蜗的cDNA微阵列分析

目的通过比较年轻与年老的快速老化鼠(SAM)耳蜗中基因表达水平,筛选并分析可能的与老年性耳聋相关的基因。方法将分别从年轻和年老的SAM耳蜗中提取的总RNA合成cDNA,并与载有1101个鼠基因的基因芯片进行杂交,杂交信号通过cyanine-3荧光显色,并使用微机对其图像进行分析。结果虽然多数的基因在老年耳蜗中的表达并没有明显的变化,但是我们发现有3个基因的表达较年轻耳蜗中有明显的增加,他们分别是Brainfactor-1,Single-minded-2和胸腺素beta-4。结论通过生物芯片技术,我们展示了老年鼠耳蜗中基因表达的情况,并发现三种mRNA的过表达有可能与老年性耳聋相关。这一研究为探讨老年性耳聋的分子生物学机制提供了基础。

白藜芦醇对快速老化鼠学习记忆能力的影响

将4月龄雄性快速老化鼠(SAMP/8)随机分为模型组、白藜芦醇低、中、高剂量组,并以4月龄正常老化鼠(SAMR/1)为对照组.对照组及模型组用生理盐水灌胃,白藜芦醇治疗组给予不同剂量白藜芦醇(25,50,100 mg/kg)灌胃.连续治疗8周后,运用Morris水迷宫方法测试各组小鼠的定位航行和空间探索能力.结果发现,SAMP/8鼠的学习记忆能力明显低于同月龄SAMR/1鼠,表现为逃避潜伏期从第2天起显著延长,原平台象限停留时间缩短,游泳速度较慢.给予白藜芦醇8周治疗,SAMP/8鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),原平台象限停留时间显著延长(P<0.05),游泳速度加快(P<0.05),且呈现出量效关系.推断白藜芦醇能显著改善SAMP/8鼠方向辨别的学习能力及记忆巩固能力.

白藜芦醇对快速老化鼠肝脏抗氧化能力的影响

分析白藜芦醇对快速老化鼠(SAMP/8)肝脏抗氧化能力的影响.将4月龄雄性SAMP/8鼠随机分为模型组和白藜芦醇低、中、高剂量组,4月龄正常老化SAMR/1鼠为正常对照组.对照组及模型组用生理盐水灌胃,白藜芦醇治疗组给予25、50和100mg/kg白藜芦醇灌胃.连续给药8周,测定各组小鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量,以HE染色进行肝组织形态学观察.结果表明:白藜芦醇各剂量组能提高SAMP/8鼠肝组织SOD活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01),且能改善肝组织形态结构,尤以高剂量组效果显著.因此,白藜芦醇能显著提高SAMP/8鼠肝组织的抗氧化能力,具有一定的延缓衰老作用.

针刺对快速老化鼠SAMP10体温的影响

目的探讨“益气调血,扶本培元”针法对快速老化鼠SAMP10体温的影响。方法采用24只7月龄快速老化SAMP10雄性小鼠,随机分为气血组、非穴组、SAMP10对照组,每组8只,9只正常老化的SAMR1雄鼠作为R1正常组,于每日1400和1700测量两次各组小鼠腹部体温。结果1400时,P系各组之间体温无差异(P>0.05);1700时,气血组体温低于非穴组和对照组,均表现显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论“益气调血,扶本培元”针法能够在一定程度上调节SAMP10小鼠体温变化,抑制体温升高,从而可能有助于延缓SAMP10小鼠的寿命。

洗心汤对快速老化模型小鼠血脑屏障通透性及海马组织P-gp、CB1、CB2蛋白表达的影响

目的观察洗心汤对快速老化模型(SAMP8)小鼠血脑屏障通透性及海马组织P-糖蛋白(P-gp)、大麻素受体1(CB1)和大麻素受体2(CB2)蛋白表达的影响,探讨洗心汤治疗阿尔茨海默病(AD)的可能机制。方法60只SAMP8小鼠随机分为模型组、益生菌组和洗心汤高、中、低剂量组,每组12只,另12只抗快速老化(SAMR1)小鼠作为对照组,各给药组分别予相应药物灌胃10周,对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,伊文思蓝法检测小鼠血脑屏障通透性,ELISA检测血清基质金属蛋白酶9(MMP9)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子(NF)-κB含量,Western blot检测海马组织P-gp、CB1、CB2蛋白表达,免疫荧光染色检测海马组织P-gp表达。结果与对照组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,脑组织伊文思蓝渗出量明显增加,血清MMP9、TNF-α和NF-κB含量明显增加,海马组织P-gp、CB2蛋白表达明显降低,CB1蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,洗心汤高剂量组小鼠学习记忆能力明显提高,脑组织伊文思蓝渗出量明显减少,血清MMP9、TNF-α和NF-κB含量明显降低,P-gp、CB2蛋白表达明显升高,CB1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论洗心汤可改善AD模型小鼠学习记忆能力,其机制与调节血脑屏障通透性及相关蛋白表达,抑制神经炎症有关。

电针对快速老化模型小鼠骨骼肌线粒体动力学的影响

目的观察电针对快速老化模型(SAMP8)小鼠运动功能及骨骼肌线粒体动力学的影响,从线粒体动力学角度探讨电针改善阿尔茨海默病(AD)运动功能障碍的作用机制。方法18只SAMP8小鼠随机分为模型组和电针组,每组9只,另9只同龄抗快速老化(SAMR1)小鼠作为对照组。电针组选取“百会”“大椎”“肾俞”,每日电针20 min,8 d为1个疗程,间隔2 d,共3个疗程,模型组和对照组不予干预。抓力测试、悬挂实验、后肢伸展实验和Morris水迷宫实验检测小鼠运动功能,HE染色观察腓肠肌组织形态,比色法检测腓肠肌组织三磷酸腺苷(ATP)含量,实时荧光定量PCR检测腓肠肌组织视神经萎缩症蛋白1(OPA1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)和线粒体动力相关蛋白1(DRP1)mRNA表达,Western blot检测腓肠肌组织OPA1、MFN2和DRP1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠抓力、悬挂实验评分及Morris水迷宫实验平均速度和最大速度显著降低(P<0.01);腓肠肌纤维排列混乱、间隙变宽、细胞核分布不均匀,腓肠肌组织ATP含量显著降低(P<0.01),OPA1、MFN2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),DRP1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组小鼠抓力、悬挂实验评分及Morris水迷宫实验平均速度和最大速度显著升高(P<0.01);腓肠肌纤维排列较整齐、间隙变窄、细胞核分布较均匀,腓肠肌组织ATP含量显著升高(P<0.01),OPA1、MFN2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),DRP1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论电针可改善SAMP8小鼠骨骼肌形态结构和运动功能障碍,其机制可能与调节骨骼肌线粒体动力学失衡状态,提高骨骼肌ATP含量有关。

快速老化SAMP6小鼠骨代谢及其分子机制研究进展

老年性骨质疏松(senile osteoporosis, SOP)是一种易发骨折的全身性骨病,发病过程复杂,机制研究不足。目前,快速老化小鼠P6品系(senescence accelerated mouse prone 6,SAMP6)是用于研究SOP发病机制和防治SOP的理想模型。该模型表现出骨脆性增加、骨微观结构退化、骨基质流失、骨内细胞代谢异常与功能紊乱等特征,从宏观到微观均能复制SOP发生和发展的过程。

“益气调血,扶本培元”针法对快速老化小鼠SAMP8海马和颞叶皮质神经元数量及形态的影响

目的探讨针刺疗法对阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的治疗作用和机制。方法18只快速老化的SAMP8小鼠随机分为针刺组、非穴组、SAMP8对照组(P8组),每组6只,6只正常老化的SAMR1小鼠作为SAMR1对照组(R1组)。针刺组采用“益气调血,扶本培元”针法;非穴组针刺非穴点;P8及R1对照组捉抓,均每日1次,共14日。处理结束后,制备脑切片,作甲苯胺蓝染色,光镜下观察,并用病理图像分析系统进行定量分析。结果P8组海马和颞叶皮质神经元形态发生退行性改变,尼氏体平均总面积和积分光度、平均单位面积细胞数目、平均单个细胞面积及平均CA1区厚度均明显小于R1组(P<0.01);针刺组神经元形态接近R1组,上述指标均大于P8组(P<0.05),平均单位面积细胞数目在CA3区与R1组无差异(P>0.05),在颞叶皮质大于R1组(P<0.05),尼氏体平均总面积和积分光度、平均单个细胞截面积及平均CA1区厚度均小于R1组(P<0.01)。结论“益气调血,扶本培元”针法可以改善SAMP8小鼠神经元形态和功能状态,减少或延迟神经元的丢失,对阿尔茨海默病可能有较好的治疗作用。

自愿运动对快速老化小鼠学习记忆能力和海马生长相关蛋白43的影响

目的观察自愿运动对快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse prone 8,SAMP8)学习记忆能力和海马生长相关蛋白43(growth-associated protein-43,GAP43)表达的影响,探讨运动提高认知能力延缓衰老的机制。方法 60只3个月龄雌性SAMP8小鼠随机平均分为跑笼环境组(RCE组)和标准环境组(SE组)。饲养3个月后,用Morris水迷宫测试小鼠的寻找平台潜伏期及搜索策略。行为学测试后,各组分别取10只小鼠的鼠脑用RT-PCR法检测海马GAP43mRNA的表达;取10只小鼠的鼠脑用免疫印迹实验检测海马GAP43蛋白的表达;剩余10只取鼠脑用免疫组织化学实验观察海马GAP43免疫反应产物的表达。结果 Morris水迷宫实验表明RCE组小鼠寻找平台潜伏期较SE组缩短(P<0.01,P<0.05),在第Ⅰ象限游泳时间比SE组延长(P<0.01),在第Ⅳ象限游泳时间比SE组缩短(P<0.05)。RCE组与SE组比较,海马GAP43表达增加(P<0.01)。结论自愿运动能提高SAMP8小鼠学习记忆能力,其机制可能与运动能促进海马GAP43表达有关。

快速老化小鼠的学习记忆缺陷及其生化机制

目的用快速老化小鼠(SAMP8)模拟老年痴呆,观察其学习记忆能力,并探讨其学习记忆能力下降的可能机制。方法采用10月龄SAMP8,并用同龄抗快速老化小鼠(SAMR1)作为正常对照。用水迷路检测近记忆以及空间学习记忆能力。用生物化学方法检测大脑皮层线粒体膜电位和ATP酶活力,观察线粒体功能;检测皮层和海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的活力,观察中枢胆碱能神经功能;检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,观察其全身性氧化应激状况。结果与SAMR1相比,SAMP8出现明显的衰老体征,其近记忆和空间学习记忆能力明显减弱,具有衰老和痴呆特征;皮层线粒体膜电位和ATP酶活力显著降低,海马ChAT活力显著下降,AChE活力显著升高,血清SOD活力稍有增高。结论SAMP8可以很好地模拟老年痴呆,其机制包括大脑皮层线粒体功能降低、海马胆碱能神经功能下降以及氧化应激等。

快速老化小鼠的听功能和耳蜗螺旋神经元的增龄性变化

目的探讨快速老化小鼠听觉功能和耳蜗螺旋神经元的增龄性变化。方法选取1、3、5、7、9月龄的快速老化小鼠亚系1(Senescence accelerated mouse/prone 1,SAMP 1)作为实验组,而同龄抗快速老化小鼠亚系1(Senescenceaccelerated mouse/resistance 1,SAMR 1)作为SAMP 1的正常对照组。分别观察其8 kHz短纯音听觉脑干反应阈值、耳蜗螺旋神经节细胞透射电镜形态学、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记[terminal deoxynucle-otidyl transferase(TdT)dUTP nick end labeling]TUNEL免疫组化染色等方面的增龄性变化。结果①听功能检测。第7、9个月龄SAMP 1小鼠跟同龄SAMR 1小鼠比较听觉脑干反应阈值差异有统计学意义;②耳蜗螺旋神经节细胞形态学检测。第79、个月龄SAMP 1小鼠可见螺旋神经元凋亡,而同龄SAMR 1小鼠罕见螺旋神经元凋亡;③耳蜗中轴位切片TUNEL染色。第7个月龄SAMR 1小鼠SGN细胞核基本上不着色[TUNEL染色阳性率为(2.27±2.43)%],第7个月龄SAMP 1小鼠部分SGN胞核着色[染色阳性率为(11.36±4.96)%],两者的染色阳性率差异有统计学意义。结论SAMP 1小鼠随月龄增长耳蜗螺旋神经元凋亡、听功能减退,7月龄SAMP 1小鼠即出现明显的听功能老化特征,可作为老年聋动物模型用于耳聋的相关研究。

快速老化小鼠SAMP8研究进展

快速老化小鼠SAMP8(senescence-accelerated mouseprone/8)是一个从普通的遗传群AKR/J系小鼠中通过表型选择培育出的快速老化小鼠,表现为早期增龄性学习记忆缺陷,同时伴有Aβ淀粉样蛋白沉积,是目前公认的有效的研究阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)动物模型。同属SAMR1表现为抗快速老化,具有正常的老化特性,常用作正常对照。目前SAMP8已被广泛应用于研究快速学习记忆缺陷的发病机制,以及评价抗衰老及改善学习记忆功能的药物等。

不同饲养环境对快速老化小鼠学习记忆能力和海马突触蛋白Ⅰ的影响

目的观察不同饲养环境对快速老化小鼠(SAMP8)学习记忆能力和海马突触蛋白Ⅰ(SynapsinⅠ)表达的影响,探讨丰富环境(EE)及跑笼环境(RCE)提高认知能力延缓衰老的机制。方法 60只3月龄雌性SAMP8小鼠随机平均分为丰富环境组(EE组)、跑笼环境组(RCE组)和标准环境组(SE组)。将小鼠在不同环境中饲养3个月后,用Morris水迷宫实验测试小鼠的寻找平台潜伏期及在第Ⅰ象限和第Ⅳ象限的游泳时间。水迷宫实验测试后,各组分别取10只小鼠的鼠脑中海马组织用RT-PCR测试海马SynapsinⅠmRNA的表达;取10只小鼠的鼠脑中海马组织用免疫印迹实验测试海马SynapsinⅠ蛋白的表达。结果 Morris水迷宫实验表明:EE组和RCE组小鼠寻找平台潜伏期较SE组缩短(P<0.01,P<0.05),EE组小鼠寻找平台潜伏期较RCE组缩短(P<0.01,P<0.05);EE组和RCE组小鼠在第Ⅰ象限游泳时间比SE组延长(P<0.05),EE组小鼠在第Ⅰ象限游泳时间比RCE组延长(P<0.05);EE组和RCE组小鼠在第Ⅳ象限游泳时间比SE组缩短(P<0.05),EE组小鼠在第Ⅳ象限游泳时间比RCE组缩短(P<0.05)。EE组和RCE组小鼠海马SynapsinⅠmRNA及蛋白表达高于SE组(P<0.01,P<0.05),而EE组小鼠海马SynapsinⅠmRNA及蛋白表达高于RCE组(P<0.05)。结论丰富环境及跑笼环境能提高SAMP8小鼠学习记忆能力,其机制可能与丰富环境及跑笼环境能促进海马SynapsinⅠ表达有关,而丰富环境优于跑笼环境。

针刺对快速老化骨质疏松小鼠P6骨代谢因子OPG、BMP-2的影响

目的:探讨针刺治疗骨质疏松的机制。方法:以快速老化骨质疏松小鼠P6(SAMP6)及正常同源抗快速老化小鼠R1(SAMR1)为模型,采用Western Blot等方法,观察SAMP6对照组、SAMP6针刺组、SAMP6非穴位刺激组和SAMR1对照组股骨护骨素(OPG)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达的变化。结果:SAMP6对照组股骨OPG、BMP-2表达显著下调(P<0.05);针刺后两者表达上调并趋于正常(P<0.05)。结论:SAMP6小鼠发生骨质疏松与OPG、BMP-2等骨代谢因子表达异常有关,针刺可通过促进成骨细胞形成并分泌骨代谢因子来刺激骨形成,降低骨转换率,达到改善骨质疏松的作用。

淫羊藿苷对快速老化小鼠SAMP10脑组织单胺类及氨基酸类神经递质的影响

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对快速老化小鼠SAMP10脑组织单胺类及氨基酸类神经递质的影响。方法:本实验采取8月龄快速老化小鼠SAMP10为实验对象,随机分为模型SAMP10组、阳性药多奈哌齐组(1mg/kg)、ICA 3个剂量(50、100、200mg/kg)组,每组12只,以12只同月龄抗快速老化小鼠SAMR1为正常对照。灌胃给药30d,一天一次,高效液相-电化学法检测快速老化小鼠SAMP10大脑皮层的去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量来探讨ICA对SAMP10脑组织单胺类神经递质的影响,通过检测谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GA-BA)、牛磺酸(Tau)、甘氨酸(Gly)的含量来探讨ICA对SAMP10脑组织氨基酸类神经递质的影响。结果:ICA可显著降低SAMP10大脑皮层内Glu、Gln、GABA含量(P<0.01),升高NE、DA、DOPAC、5-HT、HVA、Asp以及Tau的含量(P<0.01或P<0.05),但对SAMP10大脑皮层内Gly的含量并没有显著影响(P>0.05)。结论:ICA可能通过升高脑内单胺类神经递质的含量、调节兴奋性氨基酸类递质的代谢平衡以及调节抑制性氨基酸的代谢平衡达到改善SAMP10的学习记忆的作用。