快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒增龄性变化

[目的]研究快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒的增龄性变化。[方法]以快速老化模型小白鼠SAMP10为脑老化动物模型 ,采用Southern杂交方法 ,测定了不同月龄SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化情况。[结果]SAM的细胞端粒长度在17～25kb之间 ,SAMP10小鼠脑细胞端粒具有随增龄而减少的趋势。[结论]从SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化来看 。

淫羊藿苷对快速老化小鼠SAMP10脑组织单胺类及氨基酸类神经递质的影响

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对快速老化小鼠SAMP10脑组织单胺类及氨基酸类神经递质的影响。方法:本实验采取8月龄快速老化小鼠SAMP10为实验对象,随机分为模型SAMP10组、阳性药多奈哌齐组(1mg/kg)、ICA 3个剂量(50、100、200mg/kg)组,每组12只,以12只同月龄抗快速老化小鼠SAMR1为正常对照。灌胃给药30d,一天一次,高效液相-电化学法检测快速老化小鼠SAMP10大脑皮层的去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量来探讨ICA对SAMP10脑组织单胺类神经递质的影响,通过检测谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GA-BA)、牛磺酸(Tau)、甘氨酸(Gly)的含量来探讨ICA对SAMP10脑组织氨基酸类神经递质的影响。结果:ICA可显著降低SAMP10大脑皮层内Glu、Gln、GABA含量(P<0.01),升高NE、DA、DOPAC、5-HT、HVA、Asp以及Tau的含量(P<0.01或P<0.05),但对SAMP10大脑皮层内Gly的含量并没有显著影响(P>0.05)。结论:ICA可能通过升高脑内单胺类神经递质的含量、调节兴奋性氨基酸类递质的代谢平衡以及调节抑制性氨基酸的代谢平衡达到改善SAMP10的学习记忆的作用。

针刺对快速老化小鼠SAMP10氧化应激相关基因表达的影响

[目的]探讨快速老化小鼠SAMP10脑衰老的机制 ,揭示“益气调血、扶本培元”针法改善SAMP10脑衰老症状的部分机制。[方法]应用cDNA阵列技术 (cDNAArray) ,观察快速老化小鼠SAMP10与正常老化小鼠SAMR1前脑588个基因表达的差异 ,同时观察“益气调血、扶本培元”针法对上述基因表达的影响。[结果]SAMP10与SAMR1相比 ,谷胱甘肽S转移酶、热休克蛋白86、成纤维细胞生长因子8、NF -kappa -B转录因子p65亚单位4个与氧化应激反应有关的基因表达上调 ,而针刺可使这些基因的表达下调。[结论]SAMP10的快速老化可能与其脑内的氧化应激水平升高有关 ,针刺可改善氧化应激水平进而达到延缓脑衰老的作用。

赖氨大黄酸对快速老化小鼠SAMP 10肾组织COL1A1、COL3A1和COL4A1表达的影响

目的研究赖氨大黄酸(rhein lysinate,RHL)对快速老化小鼠(senescence accelerated mouse prone 10,SAMP 10)肾组织Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)和Ⅳ型胶原α1链(COL4A1)蛋白表达的影响。方法选取7月龄SAMP 10小鼠18只,并根据随机数字表分为空白对照组、低剂量RHL组(25 mg/kg)和高剂量RHL组(50 mg/kg),每组6只;另选抗快速老化小鼠(senescence accelerated mouse resistance 1,SAMR 1)6只作为青年对照,给药时间6个月。采用HE染色观察肾脏组织病理改变,Masson染色观察肾脏组织纤维化改变,Western blot方法检测肾组织COL1A1、COL3A1、COL4A1和NF-κB蛋白的表达。结果与SAMP 10空白对照组相比,25和50 mg/kg RHL组治疗后SAMP 10小鼠精神状态、活动度、毛色等方面较好;肾脏指数升高。HE染色显示SAMP 10空白对照组小鼠肾组织有节段性肾小球萎缩、硬化和明显的间质纤维化,SAMR 1组和RHL组小鼠则无肾小球萎缩、硬化和明显的间质纤维化。RHL能够抑制SAMP 10小鼠衰老过程中出现的肾组织COL1A1、COL3A1和NF-κB蛋白过度表达(P<0.05)。结论 RHL可通过抑制COL1A1、COL3A1和NF-κB蛋白过度表达,减轻衰老过程中SAMP 10小鼠肾组织纤维化程度,发挥肾脏保护作用。

快速老化小鼠SAMP10的老化特征及其研究进展

快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse,SAM)是日本京都大学Takeda教授从AKR/J系小白鼠中通过表型选择培育出的快速老化模型。根据老化速度和病状特征,SAM鼠可以分为快速衰老的P系和抗快速老化的R系。快速老化小鼠SAMP10作为P系的一种,主要特征表现为与衰老相关的学习记忆障碍,具有β-淀粉样蛋白沉积、脑萎缩、神经DNA损伤、星形胶质细胞及小胶质细胞增生等病理变化,在行为学、神经递质以及分子水平方面均表现出一定的衰老变化,是目前较理想的研究阿尔采末病(AD)的动物模型。同龄对照组SAMR1具有正常的衰老特征,常用于SAMP10的正常对照。目前SAMP10是比较理想的用于研究学习记忆障碍的发病机制、评价抗衰老药物以及抗抑郁药的动物模型。

赖氨大黄酸对快速老化小鼠SAMP 10肾组织TNF-α、IL-6、NF-κB表达的影响

目的研究赖氨大黄酸(RHL)对快速老化小鼠(SAMP 10)肾组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及核因子κB(NF-κB)蛋白表达调控的影响及其意义。方法选取7月龄SAMP 10小鼠18只,随机分为空白对照组及不同剂量的RHL组,另选抗快速老化小鼠(SAMR 1)6只作为青年对照,给药时间6周。采用HE染色观察肾脏组织病理学改变,免疫组化和Western blotting方法检测肾组织TNF-α、IL-6、NF-κB蛋白的表达。结果 RHL治疗对SAMP10小鼠体重没有显著影响(P>0.05)。与SAMR 1组比较,SAMP 10小鼠肾组织有节段性肾小球萎缩、硬化和炎细胞浸润,而RHL(25mg/kg和50mg/kg)治疗能阻断这一病理进程。另外,RHL治疗能抑制SAMP 10小鼠肾组织TNF-α、IL-6、NF-κB和磷酸化的NF-κB蛋白过度表达(P<0.05)。结论 RHL可抑制SAMP 10小鼠肾组织炎症反应,这可能是其发挥肾保护作用,从而起到抗衰老作用的机制之一。

针刺对快速老化脑萎缩及痴呆模型小白鼠(SAMP10)行为学影响的实验研究

[目的]研究“醒脑开窍”针法和“调补气血”针法对SAMP10行为学异常改变的影响。[方法]采用自然快速老化脑萎缩及痴呆模型小鼠SAMP10,于实验前后各进行1次穿梭箱实验 ,并记录小鼠遭受电击次数、电击时间及主动反应时间。[结果]实验前 ,6月龄P10与R1相比 ,各行为学指标均有显著性差异 (P<0.01) ;P10各组之间无显著性差异 (P>0.05) ;实验后 ,醒脑组、补气血组各项指标与P10对照组比较 ,均有明显改善 (P<0.05,或P<0.01) ,与R1比较 ,均有显著性差异 (P<0 .01) ,而两种针法间比较 ,无显著差异(P>0.05)。[结论]P10较同月龄R1学习记忆能力显著下降 ,是理想的脑萎缩及痴呆动物模型。“醒脑开窍”针法和“调补气血”

“三焦针法”对快速老化痴呆鼠SAMP10血脂代谢的影响

目的：观察针刺对快速老化痴呆鼠SAMP10血脂代谢的影响,并从血脂代谢角度探讨针刺改善痴呆的机制。方法：以快速老化痴呆鼠SAMP10和正常老化鼠SAMR1为模型,随机分为R1对照组和P10针刺组、P10非穴组、P10对照组,通过Morris水迷宫隐蔽平台试验检测小鼠的学习记忆能力,采用全自动生化分析仪检测血脂中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）含量。结果：P10对照组与R1对照组比较,逃避潜伏期明显延长,两者有显著性差异（P〈0.05）;P10针刺组与P10对照组比较,逃避潜伏期明显缩短,有显著性差异（P〈0.05）;P10针刺组与R1对照组比较,第1～3天有显著性差异（P〈0.05）,第4、5天无显著性差异（P〉0.05）;P10非穴组与P10对照组比较,无显著性差异（P〉0.05）。P10对照组与R1对照组相比,血中TC、HDL-C、LDL-C含量明显降低,有显著性差异（P〈0.05）,TG、VLDL-C含量无显著差异（P〉0.05）;针刺后P10针刺组与P10对照组相比,TC、TG、VLDL-C、HDL-C明显升高,有显著性差异（P〈0.05）;与R1对照组相比亦有显著差异（P〈0.05）,但有接近趋势,与P10非穴组比较,TG、HDL-C有显著性差异（P〈0.05）。结论：＂三焦针法＂能调节SAMP10血脂代谢,这可能是该针法改善SAMP10痴呆状况的机制之一。

Shh信号通路对快速老化小鼠肾脏衰老的影响

目的探究Shh信号通路的异常激活对肾脏纤维化的影响。方法用10月龄快速老化(SAMP)8小鼠与同龄抗快速老化(SAMR)1小鼠进行比较,采用苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色方法观察肾小球、肾小管间质病理形态改变和纤维化程度;免疫荧光法检测Shh、平滑蛋白(Smo)、胶质瘤相关癌基因同源物(Gli1)蛋白的表达。结果与SAMR1小鼠相比,SAMP8小鼠肾脏可见肾小球及小管间质纤维化明显,Shh、Smo、Gli1蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论衰老肾脏纤维化的程度可能与Shh信号通路的异常活化密切相关。

针刺对快速老化鼠SAMP10体温的影响

目的探讨“益气调血,扶本培元”针法对快速老化鼠SAMP10体温的影响。方法采用24只7月龄快速老化SAMP10雄性小鼠,随机分为气血组、非穴组、SAMP10对照组,每组8只,9只正常老化的SAMR1雄鼠作为R1正常组,于每日1400和1700测量两次各组小鼠腹部体温。结果1400时,P系各组之间体温无差异(P>0.05);1700时,气血组体温低于非穴组和对照组,均表现显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论“益气调血,扶本培元”针法能够在一定程度上调节SAMP10小鼠体温变化,抑制体温升高,从而可能有助于延缓SAMP10小鼠的寿命。

三七总皂苷对快速老化模型小鼠大脑β-分泌酶活性及含量的影响

目的研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)对快速老化小鼠亚系8(senescence accelerated mouse-prone 8,SAMP8)小鼠大脑β-分泌酶(Beta-site amyloid precursor protein cleavage e-zyme,BACE,主要是BACE1)活性及含量的影响。方法选择SAMP832只,随机分为对照组、PNS高剂量组(200mg/kg)、PNS低剂量组(100mg/kg)和石杉碱甲组(0.3mg/kg),每组8只,对照组给予等容积双蒸水灌胃。每天灌胃1次,连续给药2个月。分别采用直接荧光法和Westernblot法检测SAMP8大脑BACE1的活性和BACE1蛋白含量。结果 PNS高低剂量组(高剂量组:2.008±0.031;低剂量组:2.221±0.029)和石杉碱甲组(2.267±0.076)相对荧光单位(RFU/μg)值均比对照组(2.403±0.058)低(P<0.01)。PNS高低剂量组(高剂量组:0.900±0.028;低剂量组:1.000±0.032)和石杉碱甲组(0.837±0.080)BACE1蛋白表达均比对照组低(2.210±0.074,P<0.01)。结论高于100mg/kg的PNS可以降低SAMP8脑内BACE1活性,下调BACE1蛋白表达。

丰富环境联合褪黑素对SAMP8小鼠学习记忆功能及脑神经细胞凋亡的影响

背景:脑老化后神经细胞凋亡增多,其机制不明确。近年研究表明,褪黑素可调节多种凋亡因子的表达,丰富环境作为一种治疗阿尔茨海默病的有效方案已投入临床使用,然而二者合用是否有更好的疗效及其各自的作用机制目前尚不清楚。目的:探讨丰富环境与褪黑素联合干预对SAMP8小鼠学习记忆功能及脑神经细胞凋亡的影响。方法:选用3月龄雄性SAMP8小鼠24只,利用随机数字表法分成4组:对照组、丰富环境组、褪黑素组和联合处理组,每组6只。对照组和褪黑素组小鼠饲养于标准环境,丰富环境组和联合组饲养于丰富环境,直至小鼠满4月龄;满4月龄次日,褪黑素组、联合处理组小鼠开始皮下注射褪黑素8 mg/(kg·d),对照组、丰富环境组皮下注射等量生理盐水,共30 d。给药结束后继续饲养于原环境至11月龄,采用筑巢实验和Morris水迷宫实验评估小鼠学习记忆能力;行为学实验结束后,采用NeuN免疫荧光/TUNEL双标染色及尼氏染色观察海马CA1区细胞凋亡情况,采用Western blot法检测海马中凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2、P53的表达。结果与结论:①与对照组相比,其他3组小鼠的筑巢实验得分、Morris水迷宫跨平台次数、海马CA1区NeuN免疫反应性、尼氏染色阳性细胞数量、海马中Bcl-2蛋白表达显著增加(P<0.05),联合处理组上述指标值显著多于丰富环境组、褪黑素组(P<0.05);②苏木精-伊红染色显示,与对照组相比,其他3组小鼠海马CA1区神经细胞形态和排列较佳;③与对照组相比,其他3组小鼠的Morris水迷宫逃避潜伏期、海马CA1区免疫荧光/TUNEL双阳性细胞数量及Caspase-3、Bax、P53蛋白表达水平显著降低(P<0.05),联合处理组上述指标值显著低于丰富环境组、褪黑素组(P<0.05);④结果表明,丰富环境和褪黑素对SAMP8小鼠的学习记忆功能、脑神经细胞凋亡具有改善作用,其机制可能与调控小鼠海马神经细胞P53/P21通路来减少细胞凋亡有关;且将丰富环境和褪黑素联合应用的疗效很可能高于单方案治疗。

"益气调血、挟本培元"针法对SAMP10鼠痴呆状况和大脑总胆固醇的影响

目的观察快速老化痴呆鼠SAMP10痴呆状况与大脑总胆固醇异常的相关性,并探讨"益气调血、挟本培元"针法改善痴呆的机制。方法设立正常老化鼠SAMR1对照组,SAMP10对照组、针刺组及非穴组,通过Morris水迷宫测试各组小鼠学习记忆功能,Folch法和比色法测量大脑总胆固醇的含量。结果与SAMR1对照组相比,SAMP10对照组小鼠出现明显的学习记忆障碍,其大脑总胆固醇含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);而针刺组可降低大脑总胆固醇含量,改善其学习记忆能力与SAMP10对照组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论调节大脑胆固醇的稳态可能是"益气调血、扶本培元"针法改善SAMP10鼠痴呆状况的机制之一。

双向电泳分析快速老化痴呆鼠脑蛋白质的异常表达及针刺的影响

目的:从整体上观察快速老化及伴随的痴呆对脑蛋白质组的影响以及针刺对其的调节作用。方法:以8月龄快速老化痴呆鼠SAMP10和同源正常老化鼠SAMR1为材料,分为P10针刺组、P10非穴组、P10对照组和R1对照组。针刺组施以“益气调血,扶本培元”针法,针刺“膻中”“中脘”“气海”“血海”“足三里”;非穴组针刺双胁下非穴固定点。双向电泳展示各组小鼠大脑蛋白图谱。结果:双向电泳显示,伴随着快速老化和痴呆,3个蛋白发生了质的变化,其中一个蛋白为P10所特有,两个为R1所特有;9个蛋白发生了量的变化,其中7个蛋白伴快速老化和痴呆高表达,2个低表达。针刺穴位具有良性调节作用,可明显改善上述某些蛋白的表达异常,减缓衰老;而非穴无特异性。结论:伴快速老化,SAMP10痴呆鼠大脑某些蛋白的表达发生了异常,针刺可改善其中某些蛋白的异常,并具有穴位特异性。

调补气血针法对SAMP10脑中枢神经递质含量影响的研究

目的 :旨在揭示调补气血针法治疗痴呆的中枢作用机制。方法 :采用HPLC -ECD法对SAMP10及SAMR1脑组织单胺类神经递质和乙酰胆碱 (Ach)含量进行测定。结果 :①SAMP10脑组织DA、5 -HT、Ach的含量显著低于SAMR1的含量 ;②调补气血针法可使脑组织降低的DA、5 -HT、Ach的含量显著提高。结论 :①SAMP10小鼠的学习、记忆障碍发病机制之一可能是脑组织Ach和单胺类神经递质的代谢异常出现了神经损害 ;②调补气血针法改善了SAMP10的学习。

开心散改善SAMP8小鼠mtDNA表达及对凋亡相关基因的影响

目的 :探讨开心散改善快速老化模型(SAMP8)小鼠线粒体DNA(mt DNA)表达及对凋亡相关基因的影响。方法 :40只SAMP8小鼠随机分为4组,分别为模型组、开心散高剂量组、开心散低剂量组、艾地苯醌组,每组10只。10只抗快速老化(SAMR1)小鼠为正常组。Morris水迷宫及跳台实验测试小鼠行为学,荧光定量PCR检测小鼠海马mt DNA表达,ELISA法检测检小鼠脑组织中Bcl-2、Bax含量。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠学习记忆成绩显著下降(P<0.05),mt DNA表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2/Bax表达比率降低(P<0.05);与模型组比较,开心散组和艾地苯醌组对学习记忆能力有明显改善作用(P<0.05),海马mt DNA表达水平显著升高(P<0.05),脑组织Bcl-2/Bax表达比率显著升高(P<0.05)。结论:开心散能明显改善SAMP8小鼠的学习记忆能力,修复神经元损伤,提高小鼠海马mt DNA表达水平,提高脑组织Bcl-2/Bax表达比率,这可能是开心散提高学习记忆能力的重要机制之一。

淫羊藿苷对快速老化小鼠SAMP10学习记忆能力以及胆碱能系统活性的影响

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对快速老化小鼠SAMP10的学习记忆能力以及胆碱能系统的影响。方法:采取8月龄快速老化小鼠SAMP10为实验对象,随机分为模型SAMP10组,阳性药多奈哌齐组(1 mg.kg-1),ICA低、中、高剂量(50,100,200 mg.kg-1)组,每组12只,以12只同月龄抗快速老化小鼠SAMR1为正常对照。灌胃给药30 d,通过Morris水迷宫、SMG-2迷宫、小鼠跳台仪检测ICA对SAMP10学习记忆能力的影响,通过比色法测定皮层中乙酰胆碱酯酶(AChE)的活力,采用酶联免疫吸附测定法检测乙酰胆碱(ACh)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)以及M-胆碱能受体结合力(MCBC)来探讨ICA对SAMP10小鼠胆碱能系统的作用。结果:ICA可以改善SAMP10小鼠的空间探索能力以及定位航行能力,缩短SAMP10小鼠在SMG-2迷宫的潜伏期,提高其在跳台实验中的被动反应能力,增加SAMP10小鼠大脑皮层ACh的含量,提高SAMP10小鼠皮层中MCBC以及ChAT的活性,但对SAMP10小鼠皮层中的AChE活性作用不明显。结论:不同剂量的淫羊藿苷可不同程度的改善SAMP10小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与对胆碱能系统的影响有关。