肾综合征出血热病毒快速荧光灶抑制试验

报道一种新的HFRS病毒中和抗体检测方法──快速荧光灶抑制试验的建立。方法：病毒和细胞同时加入塑料微孔板上，37℃培养24小时后，经固定和荧光染色，即可在荧光显微镜下判定结果。结果：检验的4株病毒能在Vero－E6细胞上形成荧光灶；接种病毒的浓度与荧光灶里直线关系。用此法检测Z10单价和双价灭活疫苗免疫的20份兔及人血清的中和抗体，与空斑减少中和试验的结果相一致。结果：此法具有快速、简便、敏感、稳定的特点。

采用快速荧光灶抑制试验对一种狂犬病病毒抗体竞争性ELISA检测法的评价

目的以快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测结果为标准,确定竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血清样品中狂犬病病毒抗体的能效。方法对100份人血清样品采用RFFIT检测狂犬病病毒中和抗体,采用竞争性ELISA检测狂犬病病毒抗体,分析两种方法检测结果的相关性和一致性。结果经回归分析,两方法检测结果之间有线性关系,回归方程Y=2.320+0.333X,相关系数r=0.504;经χ2检验,两种方法阳性检出率差异无统计学意义(χ2=3.70,P>0.05),两种方法有相关性(χ2=16.50,P<0.05);经Scheff啨可信区间法分析,RFFIT不同检测值范围内ELISA阳性检出率之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论本组评价的竞争性ELISA与RFFIT检测结果之间有相关性,但一致性较差,还需要进一步改进。

基于ICCD的快速荧光显微成像技术及在活细胞研究中的初步应用

利用像增强型CCD、氩离子激光器和氙灯等建立了一套快速荧光显微成像系统,并初步应用于活细胞研究。实时观测和拍摄了大鼠脑微血管内皮细胞增殖分裂过程中细胞内钙敏感荧光探针Fluo-3标记的钙离子浓度分布快速变化的图像,并选取动态图像中四个典型的点给出荧光强度灰度值的变化曲线。该系统可用于高灵敏实时记录活细胞内基于荧光显微成像的快速变化过程,为活细胞的研究提供了一种很好的观察和分析手段。

分枝杆菌药物敏感试验快速荧光检测法的研究

目的 建立一种Mycobacterium(分枝杆菌 )药敏试验的快速荧光检测法。方法 用自己研制的荧光检测管检测异烟肼(INH)、利福平 (RFP)、乙胺丁醇 (EB)、丁胺卡那霉素 (AMK)、左旋氧氟沙星 (LVFX)对分枝杆菌的体外抑菌活性 ,并用 4 1例临床菌株与改良罗氏法进行了配对比较 ,确定各药物在药敏试验中的应用浓度。结果 5种药物的应用浓度分别确定为INH :0 .1μg/ml、RFP :1μg/ml、EB :2 μg/ml、AMK :2 μg/ml、LVFX :2 μg/ml;本法进行分枝杆菌的药敏试验仅需 7～ 10d ,较改良罗氏法的 2 8d缩短了 18～ 2 1d。 2种方法的药敏试验结果无显著性差异。

血清稀释条件对快速荧光灶抑制试验结果的影响

目的：对比不同倍比稀释条件稀释血清对快速荧光灶抑制试验（RFFIT）结果的影响,以指导RFFIT在狂犬病防控中的应用。方法：采集65个健康个体和40个狂犬病暴露后预防处置（PEP）个体的血清标本,分别进行3倍和5倍倍比稀释,采用RFFIT检测抗狂犬病病毒中和抗体（RVNA）水平。结果：3倍倍比稀释时,RVNA检测结果显示：65个健康个体中,63人〈0.50 IU/m L,2人≥0.50 IU/m L;40个PEP个体均≥0.50 IU/m L。5倍倍比稀释时,RVNA检测结果显示：65个健康个体均〈0.50 IU/m L;40个PEP个体中,34例≥0.50 IU/m L,6例〈0.50 IU/m L,这6例PEP个体在3倍倍比稀释时RVNA呈弱阳性,效价在0.50-1.00 IU/m L。结论：以5倍倍比稀释条件稀释血清进行RFFIT检测时灵敏度降低,但是检测结果更能反映个体实际免疫状态,可能更有利于指导狂犬病PEP措施。

快速荧光染色法在评估肺癌胸膜侵犯中的临床价值

1988年Hamme首先提出用肿瘤是否突破脏层胸膜弹力纤维层作为侵犯胸膜的依据,随后有多篇文献报道在HE染色不能确定的情况下,弹力纤维染色是一种可以诊断胸膜侵犯的重要技术手段[1]。EVG染色是临床常用的染色方法,但耗时长,当肿瘤细胞靠近弹力纤维分布时,判断肿瘤是否突破弹力纤维层较为困难[2]。近年研究发现弹力纤维可以通过荧光染色法观察,杨通等[3]报道荧光染色剂可以显现动脉内外弹力膜上的弹力纤维以及肺泡和细支气管之间的弹力纤维。本科室在实际工作中探索一种快速显示弹力纤维分布的荧光染色法,可以在同一切片中反映弹力纤维和肿瘤组织的关系。实验进一步在肺癌手术切除标本中评估了该技术和传统EVG染色法的一致性,现报道如下。

狂犬病毒新型快速荧光斑点抑制实验方法的建立

目的建立一种新型的快速荧光斑点抑制实验用于狂犬病毒抗体的检测。方法本研究以携带绿色荧光蛋白基因的嵌合狂犬病毒HEP-GFP株为基础毒株,建立了一种新型快速荧光斑点抑制实验(RFFIT-GFP);并对多份人、犬、猫的血清进行了检测,还将该检测结果与传统的RFFIT,ELISA相比较。结果与结论RFFIT-GFP和RFFIT,ELISA测定的结果基本相一致,特异性都比较高,而且RFFIT-GFP是一种比它们更为简便、经济的检测方法。

快速荧光生长指示管检测法对各种抗酸分支杆菌培养的研究

目的 探讨快速荧光生长指示管培养法对各种抗酸分支杆菌菌株培养的适应性。方法 应用本室研制的快速荧光生长指示管 (以下简称RFGIT) ,定量接种各种抗酸分支杆菌标准菌株 ,并与改良罗氏培养管 (L J管 )和BD公司MGIT快速培养管进行配对比较 ;用结核分支杆菌H37Rv株梯度稀释 ,分别接种RFGIT、MGIT和L J管 ,记录出现阳性结果时间。结果 RFGIT对 19种标准菌株培养阳性检出时间 ,平均为 4 .6 8± 2 .4 8d ;MGIT管培养为 5 .39± 2 .89d。有 8种菌株RFGIT检出时间显著早于MGIT管。接种不同浓度H37Rv ,在 3种培养管配对比较 ,RFGIT阳性检出时间较MGIT管提前 1～ 5d ,平均提前 3.2d ;较改良罗氏法提前 11～ 31d ,平均提前 19.1d。结论 RFGIT对各标准菌株及不同浓度H37Rv培养阳性的检出时间均明显早于改良罗氏培养管 ;部分菌株明显早于MGIT培养管。结果表明RFGIT是一种有效、安全、经济和快速的培养法。

大肠菌群发酵法与快速荧光法对3类食品的检测结果比较

目的:采用快速荧光法与乳糖发酵法对各类食品进行检测比较。方法:通过用两种方法(发酵法和快速荧光法)对21份冷饮、21份卤菜(熟食)、13份其它食品(共计55份)的检测比较并作统计学分析。结果:对熟食,两种检测方法差异有统计学意义P<0.025,而对冷饮(P>0.5)和其他食品(P>0.4)差异无统计学意义。结论:乳糖发酵法检测大肠菌群准确,快速荧光法简便,快速,适宜大批量样品大肠杆菌群检测。

3M Attest290 Auto-reader快速荧光生物阅读器工作原理与常见故障

美国3M公司于1995年推出目前最快速的生物阅读指示剂及美国3M系列快速生物阅读器（图1）[1]。3M Attest290Auto-reader快速荧光生物阅读器如配合3M系列快速生物指示剂标准测试包（内含活性嗜热脂肪杆菌芽孢）,其中3M Attest1291（蓝帽）用于监测132℃下排气锅,

测定狂犬病疫苗效价的快速荧光技术

取０．５ｍｌＢＨＫ－２１新鲜健康细胞液和０．１ｍｌ狂犬病病毒细胞液在含小飞片青瓶中混合，培养２４ｈ制片，加抗狂犬病病毒兔抗体感作，用驴抗兔荧光抗体染色，通过荧光显微镜观察细胞浆内黄绿色结构判定病毒是否在细胞内增殖，从而建立了检测狂犬病病毒快速荧光技术法（ＲＦＡＴ）。并用ＲＦＡＴ检测了１５批Ｆｌｕｒｙ－ＬＥＰ株培养液，１５批ＥＲＡ株培养液，和１５批鹿毒８２０２株培养液，ＴＣＩＤ平均滴度分别为５．６８、６．０５、４．８６，并同时进行了小白鼠脑内接种平行试验，ＭＬＤ５０平均滴度分别为５．５０、５．６５、４．２５。从试验结果看。

快速荧光法检测沙门氏菌的初步研究

沙门氏菌能引起人类和动物的沙门氏菌病，是细菌腹泻和食物中毒最常见的病原菌，常规培养方法分离和鉴别沙门氏菌操作复杂、费时，经研究发现，４－甲基伞形酮辛脂（４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｉｆｅｒｙｌ－ｃａｐｒｙｌａｔｅ，ＭＵＣ）即ＭＵＣ快速荧光法可快速检测食...

任意数量离散不规则感兴趣区域的快速荧光寿命显微成像

荧光寿命显微成像(fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)技术在细胞微环境传感中具有特异性强、灵敏度高、可定量的优点,被广泛应用于生物医学研究.其中,基于时间相关单光子计数(time-correlated single photon counting,TCSPC)进行荧光寿命探测的方法是目前最常用的技术之一,但受成像原理和条件限制,该技术存在数据采集时间较长、成像速度不够快的不足.本文开发一种能对生物样品中任意数量离散的、形状不规则的感兴趣区域(region of interest,ROI)进行快速FLIM成像的技术.该技术利用声光偏转器(acousto-optic deflector,AOD)实现快速灵活的寻址扫描,并通过对ROI形状特征的简单在线分析,实现AOD与TCSPC同步策略的优化及寿命图像的准确重构,对于生物样品中常见的存在多个离散不规则ROI情形,可大幅节省数据采集时间,从而实现对这些ROI的快速FLIM成像.采用该技术,对氯化铵刺激下活细胞中溶酶体探针LysoSensor Green DND-189的荧光寿命变化进行了动态FLIM成像,以监测溶酶体管腔内pH值的实时变化情况.结果表明,该快速FLIM技术可用于动态监测生物样品中微环境的变化,将在活细胞微环境传感中发挥重要作用.

水氮耦合对葡萄叶片快速荧光诱导动力学特性的影响

以葡萄品种"红提"为试材进行土壤水分和氮素水平双因素控制实验,土壤水分设置为田间持水量的70%~80%(W1)、60%~70%(W2)、50%~60%(W3)和30%~40%(W4)共4个水平,氮素设计1.5N(25.5g·m^-2,N1)、1N(17g·m^-2,N2)、0.5N(8.5g·m^-2,N3)和0N(0g·m^-2,N4)4个水平。其中以W1、N2为对照(CK),分别在葡萄苗期的前、中、后期测定叶片快速荧光诱导动力学特性,以了解设施葡萄水肥需求规律。结果表明:(1)葡萄叶片苗期不同观测阶段快速荧光诱导动力学变化曲线在不同水分、氮素、水氮耦合处理下基本相似,但是随着土壤水分和氮素水平的降低,不同特征点位置(OJIP)存在明显差异,水分和氮素水平越高,葡萄叶片最大荧光值越大。(2)随着土壤含水量的降低,葡萄苗期叶片在不同时期PSⅡ反应中心能量配比存在明显的不同,与对照组CK相比,吸收的光能被反应中心捕获的量子产额(ΦPo)、激子被反应中心捕获后,用于推动电子传递链中超过QA的其它电子受体的激子占用于推动QA还原激子的比率(ψo)、反应中心吸收的光能用于电子传递的量子产额(ΦEo)均受到抑制,用于热耗散的量子比率(ΦDo)得到促进;随着施氮量的降低,ΦPo、ψo、ΦEo出现不同程度的升高,ΦDo则呈下降趋势;在各水氮耦合处理中,W1N3处理下ΦPo最大,W2N4处理下ψo和ΦEo得到显著提升,CK处理下ΦDo值最高。(3)单位活性反应中心吸收的光能(ABS/RC)、捕获的用于还原QA的能量(TRo/RC)、耗散的能量(DIo/RC)随着土壤含水量的减少而升高,而土壤含水量越低,单位反应中心捕获的用于电子传递的能量(ETo/RC)值越小;与CK相比,N1、N3、N4处理的PSⅡ反应中心活性参数均得到促进;W1N3处理下ABS/RC和DIo/RC最高,W3N2处理下TRo/RC最大,ETo/RC在W2N4处理下得到显著促进。(4)PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)随着土壤水分的减少而逐渐降低。土壤含水量越少,PSⅡ潜在光化学活性(Fv/Fo)越低;W2N3处理下可变荧光值最高,W1N3处理下Fv/Fm和Fv/Fo最大。

非标准方法检测狂犬病病毒抗体阴性血清快速荧光灶抑制试验复核结果分析

目的揭示非标准方法检测狂犬病病毒抗体阴性血清真实的狂犬病病毒中和抗体状态,指导基层狂犬病门诊正确认识非标准方法检测结果的意义。方法收集狂犬病疫苗免疫个体经酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和胶体金(colloidal gold, CG)法检测狂犬病病毒抗体阴性血清,采用快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT)进行复核,Excel表统计数据。结果ELISA,CG法检测 1 053、1321 份血清,其中 102(9.69%, 102/1053)、183( 13.86%,183/1321)份血清为阴性,经RFFIT复核确证6(5.88%,6/102)、14(7.65%,14/183)份血清阴性。ELISA、CG法阴性结果的多数样品(88.55%、96.45%)经RFFIT检测狂犬病病毒中和抗体效价0.5-2.0 IU/mL。结论狂犬病病毒抗体非标准检测方法灵敏性有待提高,对其阴性检测结果应谨慎解读。

3种蚊媒病毒快速荧光PCR检测方法与性能评价

建立寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)和黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)3种蚊媒传染病核酸快速实时荧光定量检测方法。以寨卡病毒polyprotein gene基因,登革病毒NS5基因,黄热病毒3’UTR基因作为靶区域设计相应的引物探针,探针的5’端分别标记不同的荧光基团,3’端标记相应的淬灭基团,对扩增体系中引物探针浓度、热启动Taq酶浓度、逆转录酶浓度、RNA酶抑制剂浓度分别进行优化。构建了一种可同时用于寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒三重快速荧光PCR检测体系,25μL扩增体系中ZIKV、DENV和YFV的引物浓度分别为200 nmol/L、240 nmol/L和240 nmol/L;探针浓度分别为200 nmol/L、240 nmol/L和80 nmol/L;热启动Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的终浓度为分别为2.5U/反应、60U/反应和80U/反应。该检测体系对3种病原体的最低检测限均为1.0×10^(3)拷贝/mL,在MIC IAT C2-48和ABI7500两种不同型号的实时荧光定量PCR仪上检测结果一致,对登革热、寨卡和黄热病毒血清样本检测均为阳性扩增,与丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、副流感病毒、腺病毒等无交叉反应。因此,本研究建立的寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒的三重快速荧光PCR检测体系可用于对上述3种病毒的定性或定量检测。

结核分枝杆菌培养和药敏试验及菌群鉴定快速荧光法的研究

目的建立一种经济、快速的结核分枝杆菌培养、药敏和菌群鉴定的方法。方法用我们研制的快速荧光检测法(本法)与传统的改良罗氏法(LJ法),对分枝杆菌标准菌株及临床分离菌株,同期进行培养、药敏试验和菌群鉴定的对照研究,验证本法培养结核分枝杆菌的特性,确定药敏和菌群鉴定的药物最适应用浓度。结果本法培养比LJ法检出时间平均提前19.13d,且阳性率高。药敏试验和菌群鉴定中各药物浓度确定为INH0.1μg/ml、RFP1μg/ml、EB2μg/ml、AMK2μg/ml、LVFX2μg/ml、PNB200μg/ml和TCH2.5μg/ml;7～10d可获结果,比LJ法缩短18～21d。结论本法明显缩短了结核分枝杆菌培养、药敏和菌群鉴定的时间,提高培养阳性率;经济、实用,适合在基层单位推广。

抗狂犬病病毒中和抗体效价快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的建立及应用

目的建立抗狂犬病病毒中和抗体效价的快速荧光灶抑制试验(RFFIT),验证其与小鼠脑内中和法(MNT)的相关性,并用于马抗狂犬病病毒血清(ERIG)和人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)及狂犬病疫苗免疫后血清中和抗体效价的测定。方法待测血清或免疫球蛋白在96孔板中作3倍系列稀释,与能感染80%～95%细胞量的攻击病毒混合后,37℃体外中和1h,接种BSR细胞,培养24h后荧光染色,荧光显微镜下读取结果。用建立的RFFIT法与MNT法同时标定狂犬病免疫球蛋白国家标准品,并检测ERIG和HRIG以及疫苗免疫后血清样品的抗狂犬病病毒中和抗体效价,以比较两种方法的精密度和相关性。结果采用MNT法和RFFIT法检测我国抗狂犬病免疫球蛋白国家标准品的GMT分别为21.4和23.8IU/ml,两种方法的变异系数分别为62.3%和13.3%;两个实验室用RFFIT法测定我国国家标准品的结果分别为21.71和23.81IU/ml。两种方法测定ERIG和HRIG及疫苗免疫后血清中和抗体效价的结果差异无统计学意义,相关系数为0.976,两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论RFFIT法可替代MNT法检测抗狂犬病病毒中和抗体效价。

利用快速荧光、延迟荧光和820nm光反射同步测量技术探讨干旱对平邑甜茶叶片光合机构的伤害机制

本文以苹果砧木平邑甜茶为实验材料,利用快速叶绿素荧光、延迟荧光及820nm光反射同步测量技术,研究了干旱胁迫对平邑甜茶叶片光合机构的光系统Ⅰ(PSⅠ)、光系统Ⅱ(PSⅡ)以及整个光合电子传递链的伤害机制。实验结果表明:干旱胁迫下平邑甜茶叶片的整个光合电子传递链都受到不同程度的影响。干旱2d,PSⅡ反应中心捕获的光能用于还原QA的能力低于电子从QA-向下游传递的能力,电子从QA-向下游传递给QB和PQ库等中间电子传递体的能力小于电子从QB和PQ库向PSⅠ受体侧传递的能力,但干旱5d上述变化则相反,且更加显著。由此可以得出,严重干旱胁迫下,沿着从PSⅡ到PSⅠ受体侧的光合电子传递链,电子传递的能力越来越低。此外,随着干旱胁迫,PSⅡ和PSⅠ反应中心色素的降解速率快于天线色素,且PSⅡ的捕光效率和PSⅠ反应中心的含量逐渐降低。快速荧光、延迟荧光及820nm光反射同步测量结果互相印证了上述结论。我们推测,这可能是平邑甜茶叶片对干旱的一种适应机制。