拉曼光谱用于细菌快速药敏检测的研究进展

致病菌对人类健康构成重大威胁,抗菌药物的滥用导致了细菌耐药性的发展和传播。目前,临床微生物室常用的药敏试验,如纸片扩散法、浓度梯度纸条扩散法、肉汤稀释法和全自动药敏分析等都是基于细菌生长的方法,且操作流程繁琐,需要8~16 h才能出结果。该文从快速药敏检测(RAST)的研究出发,重点叙述了拉曼光谱在RAST领域的研究进展。利用拉曼光谱对细菌进行基于代谢表型的药敏检测,检测时间明显缩短,优于常规基于细菌生长的药敏方法。但该方法缺少大规模的临床分离株验证,而且难以实现临床标本中细菌的免分离检测。该文对RAST技术的临床验证、可重复性评估、临床适用性评估、准确性评估、拉曼光谱与电阻抗及微流控技术的创新结合及其在复杂临床标本中直接药敏检测等方面进行展望。

基于MALDI-TOF MS定量快速药敏试验在肺炎克雷伯菌对亚胺培南和替加环素药敏试验中的适用性分析

目的:探讨基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)的定量快速药敏试验(rAST)在肺炎克雷伯菌(KP)对亚胺培南(IPM)和替加环素(TGC)药敏试验中的实用性分析。方法:选取天津医科大学总医院2018年1月至2021年6月120株临床非重复KP,应用微量肉汤稀释法(BMD)检测其对IPM和TGC的最低抑菌浓度(MIC)值。采用优化甲酸提取法提取KP菌体蛋白,进行基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法的快速药敏试验[(MALDI-TOF MS)-based rAST]检测IPM和TGC的MIC值,并评估最佳的菌液稀释度和孵育时间。采用Cohen′s kappa统计来评估(MALDI-TOF MS)-based rAST法和标准参考BMD的一致性。结果:在不同的孵育时间,上述两种方法处理后的质谱均能成功鉴定KP(P>0.05);但优化后的甲酸提取法简化了操作流程,并且在菌量较低情况下的成功鉴定率高于常规方案。稀释25倍即菌液含量为6×10^(6) CFU/mL、孵育时间分别为2 h和3 h条件下,(MALDI-TOF MS)-based rAST法测得IPM(P<0.01)和TGC(P<0.001)的MIC值效果最佳;此条件下,(MALDI-TOF MS)-based rAST与BMD测得的MIC值相当,分别为IPM 70.83%(85/120)、TGC 66.67%(40/60),基本一致性(EA)分别为98.33%(118/120)、98.33%(59/60)。结论:(MALDI-TOF MS)-based rAST缩短了报告时间,是一种可靠的快速定量药敏试验方法。

血培养阳性标本直接快速药敏试验临床应用价值评估

目的通过比对血培养阳性标本直接快速药敏试验(RAST)与常规药敏试验结果的符合(CA)比例,探讨血培养RAST的临床应用价值。方法收集2021年4月至2022年4月重庆市第九人民医院血培养阳性标本,革兰阴性杆菌参考欧洲药敏试验委员会(EUCAST)发布的纸片法血培养阳性瓶进行RAST,革兰阳性球菌参考CLSI 2021 M100对血培养阳性标本进行RAST,并将结果与常规药敏试验结果进行比对。结果409例血培养阳性标本中分离培养出大肠埃希菌178株、肺炎克雷伯菌62株、铜绿假单胞菌8株、葡萄球菌100株和肺炎链球菌7株。RAST结果与常规药敏结果相比:肠杆菌在4、6、8 h CA比例分别为78.8%、90.5%、91.5%,6 h药敏结果CA比例优于4 h(P<0.05),但与8 h比较差异无统计学意义(P>0.05)。铜绿假单胞菌在6、8 h CA比例分别为80.4%、92.9%。葡萄球菌在16 h CA比例为90.7%。肺炎链球菌在20~24 h CA比例为100.0%。肠杆菌CA比例最高的药物为庆大霉素,错误率为0的药物为美罗培南,严重错误率最高的为环丙沙星;葡萄球菌CA比例最高的药物为青霉素和利奈唑胺,均为100.0%,克林霉素微小错误率较高,为21.0%。结论血培养RAST能够快速、准确地为临床提供初步药敏结果,指导临床目标性抗感染治疗。

荧光素酶生物发光法在快速药敏试验中的研究与应用

目的通过荧光素酶生物发光法与微量肉汤稀释法对质控菌株和临床收集菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)进行测定,探讨荧光素酶生物发光法在病原微生物快速药物敏感性试验中的应用价值。方法以D-荧光素钠、Mg^(2+)、O_(2)和待测菌株为荧光素酶催化反应底物,连续检测待测菌与抗生素孵育过程中相对光强度(relative light unit,RLU)变化,计算发光率并确定MIC,分析与微量肉汤稀释法的基本一致性(essential agreement,EA)和分类一致性(categorical agreement,CA)。结果荧光素酶生物发光法快速检测大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等质控菌株MIC与微量肉汤稀释法检测MIC结果CA和EA值均为100%;并应用该检测体系对91株临床革兰阴性菌样本、93株革兰阳性菌样本进行MIC测定,革兰阴性菌检测结果中的6种药物EA和CA分别大于90%和84%,革兰阳性菌检测结果中的6种药物EA和CA分别大于90%和80%,并使检测周期由常规药敏实验的16~24 h缩短至5~6 h。结论荧光素酶生物发光法快速检测药敏结果与微量肉汤稀释法结果具有较高一致性,且更快速、敏感,可为今后的临床检验工作提供全新的快速药敏检测方法。

鸡大肠杆菌TTC显色快速药敏试验方法的研究

利用细菌增殖过程中产生的琥珀酸脱氢酶能使2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)显色的原理,在M-H培养基中加入0.003%TTC作指示剂,改进传统药敏试验方法——纸片扩散法(K-B法),设计出一种试验成本低、报告时间不及K-B法1/4的鸡大肠杆菌快速药敏试验方法。对临床分离的69株鸡致病性大肠杆菌同时用TTC显色快速药敏法和传统K-B法进行药敏试验,结果显示TTC显色法在4 h内所有的菌株均可得出药敏结果(K-B法用时为18 h),与传统K-B法的符合率为95.4%,而且选用标准菌株时2种方法的抑菌圈没有显著差异。

TTC快速药敏试验在虾细菌病诊断中的应用

针对罗氏沼虾细菌性病原菌进行TTC快速药敏试验,包括平板药物筛选试验和微孔板定量试验。结果表明,在30种抗菌药物中,痢特灵和庆大霉素的药效最好,其最小抑菌浓度(MIC)分别为12 5μg/mL和25μg/mL,试验所需时间是常规药敏试验时间的25%。

结核分枝杆菌快速药敏实验研究进展

结核分枝杆菌引起的结核病是全球范围内最普遍的慢性传染病之一，据估计全球有三分之一的人感染过结核分枝杆菌，亚洲地区占全世界受感染人群的三分之二。我国是全球22个结核病高发病国家之一，发病人数位居世界第二位，仅次于印度。

一种创伤弧菌快速药敏试剂盒的研发

研究建立一种弧菌类致病菌的快速药敏试剂盒,设计与筛选了增菌培养基、药物包埋试剂、细菌生长指示剂、10种药物的定量药敏试剂盒。试剂盒包括试剂盒1和试剂盒2,试剂盒分为检测区、生长区和空白对照区,每种药物双样对照,通过生物指示剂颜色变化来判断药物的最小抑菌浓度。实验结果表明,创伤弧菌在培养基S2里具有较好的生长优势,指示剂对细菌生长具有较好的生长指示作用,准确判断每种药物最小抑菌浓度。结果表明,药敏试剂盒具有准确、简单和快速的特点。

X．Y．L．B细菌群相同步培养系统和快速药敏试验的临床应用分析

应用“X．Y．L．B同步培养系统”对188例临床拟诊为“败血症”的患儿进行血液细菌培养．总体检出事为54．26%；“快速药敏试验”72小时累计报告率为95．10%．按足剂量、足疗程由静脉投敏感(或中敏)药物的27例确诊为“败血症”的患儿．其中20例一疗程（3-7天)临床症状消失．因此．我们认为“同步培养系统及快速药敏试验”设计合理，结果较为实用可信．若在增菌液质量，细菌L型鉴定及显微镜下药敏结果判读方面进一步完善规范．它必有更大适用性和意义．

感染（败血）症原因菌群相同步培养法和快速药敏试验技术

普遍耐药，种群变迁，菌株变异、协同感染就构成了现代感染(败血)症致病原因菌突出的标志。同步检测它们并作快速药敏，是有效诊治现代感染(败血)症的关键所在。检测现代感染(败血)症致病原因菌方法并获得有关数据的基本立论和技术，应遵循需氧菌类、厌氧菌类、缺壁细菌类需要不同生长条件的要求，既设置无氧、有氧、CO2环境，又设置等渗、高渗条件，才能培养成功。常规培养方法仅是需氧等渗一种条件和方法的，因而，阳性率低，培养同期长，不能广泛为临床诊治病人提供得力的指导帮助。

质谱鉴定联合直接快速药敏试验在细菌血流感染中的应用

目的评估质谱快速鉴定联合直接药敏试验在革兰阴性细菌血流感染诊断中的临床应用价值。方法对2021年8月-2022年3月我院133瓶血培养阳性标本经SDS沉淀离心富集细菌后,使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)直接鉴定,对阳性血培养液进行直接快速药敏试验(RAST),同时对培养后的菌落进行质谱鉴定和VITEK 2 Compact药敏分析,比较两种方法的一致性。结果133例血培养阳性标本经鉴定后革兰阴性细菌共122株,直接细菌鉴定的准确率为91.73%,包括大肠埃希菌56株、肺炎克雷伯菌26株、鲍曼不动杆菌12株和铜绿假单胞菌12株,其中鲍曼不动杆菌检出率最高为100.00%,阴沟肠杆菌最低为66.67%;所有药物结果符合(CA)比例在4、6、8 h呈现逐渐升高现象;在8 h时除了哌拉西林/他唑巴坦(TZP)和美罗培南(MEN),其他药物的CA均高于可接受值(CA>90%),仅有1例铜绿假单胞菌对TZP的药敏结果在6、8 h时为非常重大错误(VME),1例大肠埃希菌对TZP、阿米卡星(AK)在4、6、8 h时均为重大错误(ME),2例肺炎克雷伯菌对TZP、头孢他啶(CAZ)在4、6、8 h时为ME,1例铜绿假单胞菌对妥布霉素(TOB)和庆大霉素(CN)在6、8 h时为微小错误(mE)。结论5%SDS沉淀法联合MALDI-TOF MS直接鉴定细菌菌种准确性高,RAST的CA比例高,8 h可作为革兰阴性细菌RAST药敏判读的最佳时间点,对于及时指导临床用药及改善患者预后具有重要意义。

致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌快速鉴别及药敏试验选择培养液的培养特性

本研究在Baird-parker培养基基础上,研制出致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌(SA)快速鉴别培养及药敏试验用选择mBP培养液。在此培养液中,除SA生长良好外,链球菌等4种革兰氏阳性菌和大肠杆菌等6种革兰氏阴性菌均不生长;将10μL奶样接种入mBP培养液,37℃培养24h后即可根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中有无SA,检测灵敏度为60个细菌:经与标准纸片法药敏试验对比证明,mBP培养液对常用于奶牛乳腺炎治疗的7类8种抗生素的抑菌活性无明显影响:将10μL奶样或选择培养物接种入含标准抑菌浓度抗生素的mBP培养液中,35℃培养24h后即能根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中SA对所试抗生素的敏感性。以mBP培养液为基础建立的致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌快速鉴别及药敏试验方法具有简单、快速、价廉和不需专门设备等优点,特别适合我国中、小型奶牛场和基层兽医站使用。

流式细胞计数用于念珠菌的快速药敏试验研究

目 的 探 索 应 用 流 式 细 胞 计 数 (FCM )进 行 念 珠 菌 快 速 药 敏 试 验 。 方 法 参 照 M 27-A 标准 化 方 案 ,应 用 FCM 检 测 氟 康 唑 (FCZ)对 21 株 念 珠 菌 的 抗 菌 活 性 ,药 物 作 用 时 间 3 h,非 渗 透 性 荧 光 染料 碘 化 丙 啶 (PI)染 色 0.5 h。根 据 不 同 药 物 浓 度 作 用 下 各 药 物 浓 度 管 荧 光 强 度 的 梯 度 变 化 趋 势 ,将 平 均荧 光 均 道 值 大 于 生 长 对 照 管 60% 的 最 小 药 物 浓 度 设 定 为 最 小 抑 菌 浓 度 ,即 M IC 值 。并 将 结 果 与 M 27-A标 准 化 方 案 进 行 比 较 。结 果 FCM 所 测 M IC 值 范 围 在 0.125 ￣ 64 μg/m L 之 间 ,M 27-A 标 准 化 方 案 所 测M IC 值 在 0.25 ￣ 64 μg/m L 之 间 ,统 计 学 检 验 两 者 差 异 无 显 著 性 (P > 0.05),结 果 有 很 好 的 一 致 性 。FCM试 验 全 过 程 仅 需 4 h 左 右 。 结 论 FCM 药 敏 试 验 具 有 快 速 、敏 感 、可 靠 的 优 势 。

奶牛乳房炎链球菌的刃天青微量板快速诊断与药敏试验

本研究以刃天青钠取代链球菌选择培养基EN的溴甲酚紫指示剂,建立了奶牛乳房炎链球菌快速诊断与药敏试验用微量板。将不含指示剂EN的培养基分装到96孔板,接种不同细菌或其感染模拟奶样,培养2h加入优化浓度的刃天青指示剂,结果表明能显示无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌生长,不能显示大肠杆菌和葡萄球菌生长;检测三种奶牛乳房炎链球菌总敏感性达105cfu/m L,能在10h内获得诊断结果。60份临床奶样诊断结果显示,刃天青微量板法检测链球菌阴性奶样特异性达100%,检测链球菌单阳性奶样敏感性为100%,检测链球菌混合阳性奶样敏感性达97.1%。用矫正浓度的10种抗生素包被微量板,分别用10株链球菌纯培养、感染模拟奶样和9份链球菌阳性奶样进行刃天青微量板法快速药敏试验,所获结果与标准纸片扩散法完全一致。试验结果表明,本研究建立的刃天青微量板法可取代标准方法用于奶牛乳房炎链球菌的快速诊断及药敏试验。

奶牛大肠杆菌乳房炎快速鉴别及药敏试验用选择培养液的培养特性研究

由于抗生素的长期和盲目使用,奶牛乳房炎病原菌耐药性问题日益严重。我们以麦康凯培养基为基础,研制出奶牛大肠杆菌乳房炎快速鉴别及药敏试验用MQQ选择培养液。本研究结果显示,在此选择培养液中,除大肠杆菌生长良好外,葡萄球菌、粪链球菌、枯草杆菌等革兰氏阳性菌和沙门氏菌、变形杆菌、多杀性巴氏杆菌、绿脓杆菌、痢疾志贺氏菌等革兰氏阴性菌均不生长;只要接种10μL奶样并于37℃培养24h,即可根据培养液是否浑浊和颜色变化判断奶样中有无大肠杆菌,检测灵敏度为50个细菌;经与标准纸片扩散法药敏试验对比证明,MQQ选择培养液对部分用于奶牛乳房炎治疗的5类8种抗生素的抑菌活性有不同程度的影响,通过调整抗生素使用量可获得与标准方法一致的结果,只要向含适当浓度抗生素的选择培养液中接种10μL奶样并于35℃培养24h,即能根据培养液是否浑浊和颜色变化判断奶样中大肠杆菌对所试抗生素的敏感性,具有简单、快速、价廉和不需专门设备等优点,特别适合我国中、小型奶牛场和基层兽医站使用。

BACTEC-MGIT960快速培养药敏对肺结核诊治的应用和评价

目的 BACTEC MGIT960快速培养药敏在肺结核诊治中的应用评价。方法 采用BACTEC MGIT960进行快速培养药敏 ,并与改良罗氏培养基和改良 7H9培养基进行比较。结果 BACTEC MGIT960培养报告时间仅 8.5d ,明显短于改良 7H9培养基 (2 0 .6d)和改良罗氏培养基 (30 .8d)。BACTEC MGIT960药物敏感试验结果与其它检测方法相比 ,符合率在 90 %以上 ,平均报告时间仅 6.5d,明显短于改良 7H9培养基 (1 7d)和改良罗氏培养基(2 6 .5d)。结论 BACTEC MGIT960快速培养药敏有助于肺结核的诊断和治疗 ,是一种快速、有效。