快速蛋白液相色谱系统纯化肺癌组织热休克蛋白70及其鉴定

目的:从肺癌组织中纯化并鉴定热休克蛋白70(HSP70),为研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗奠定基础。方法:用组织蛋白裂解液从肺癌组织中提取总蛋白,应用ConA-sepharose亲和层析和快速蛋白液相色谱系统(FR-LC)连续分离、梯度洗脱获得蛋白,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western-blot进行蛋白相对分子质量及免疫原性鉴定。结果与结论:所获蛋白的相对分子质量为70000,经Western-blot鉴定为HSP70。

快速蛋白液相色谱系统纯化和分析小鼠肝癌细胞热休克蛋白70的研究

目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳及Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定。结果 :纯化蛋白经鉴定为分子量70 0 0 0的HSP70。结论 :用此层析法经FRLP可分离纯度较高的HSP70。

酸化沉淀蛋白-超快速液相色谱-串联质谱法测定肝损伤大鼠血浆中的头孢呋辛

为了研究二代头孢类新药头孢呋辛赖氨酸在肝损伤大鼠体内的药代动力学过程,建立了采用超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)快速测定肝损伤模型大鼠血浆中头孢呋辛含量的方法。血浆样品在酸性条件下用乙腈沉淀蛋白,采用Shim-pack XR-ODS色谱柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm)为分析柱、乙腈-0.1%甲酸水溶液(40∶60,v/v)为流动相、流速为400μL/min进行色谱分离,采用电喷雾负离子(ESI-)模式电离、多反应监测(MRM)模式进行质谱检测,用于定量分析的离子对分别为m/z 423.2→206.8(头孢呋辛)和m/z 454.1→238.4(内标头孢噻肟)。结果表明,大鼠血浆中头孢呋辛的质量浓度在0.01～1 mg/L和1～400 mg/L范围内线性关系良好(r>0.99),定量限为0.01 mg/L,日内和日间精密度(以相对标准偏差(RSD)计)均小于11.5%,准确度(RE)为-7.1%～2.2%,平均萃取回收率大于83.5%,样品运行时间仅为3.0 min,能够满足生物样品的测定需求。该法简便、快速,已用于肝损伤大鼠静脉注射头孢呋辛赖氨酸的药代动力学预实验研究。

快速高分离度液相色谱-质谱联用方法筛选Tau蛋白激酶2抑制剂

建立了测定Tau蛋白激酶2(Tau protein kinase 2,TPK2)催化反应产物磷酸化十肽(PKpTPKKAKKL)的快速高分离度液相色谱-质谱方法(RRLC/MS)用于筛选TPK2抑制剂.反应溶液总体积为50μL,将终浓度为20 nmol/L的TPK2与终浓度为5μmol/L的底物十肽(PKTPKKAKKL)于30℃反应30 min,用等体积乙腈终止反应并加入终浓度为1μmol/L的磷酸化十肽(PKpTPKKAKKV)作为内标,采用Agilent SB-C18色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱分离后,用RRLC/MS进行定性及定量分析.该方法可通过精确定量一定时间内的酶促反应产物来反映酶活性被抑制的程度,作为TPK2抑制剂的筛选方法,本方法具有简单、灵敏、快速的优点,能够避免光谱法筛选可能产生的假阳性结果,可用于TPK2的先导化合物的高通量筛选.

快速蛋白液相色谱法纯化威廉环毛蚓纤溶酶及其活性研究

摸索威廉环毛蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶 (earthwormfibrinolyticenzyme ,EFE)体内外的抗栓溶栓活性。通过提取 ,分步盐析 ,再经AKTAbasic蛋白快速液相色谱进一步纯化 ,得一组有纤溶活性的同工酶 ,其中一种比活较大达 2 0 0 0IU/mg。药理试验表明该酶有明显的抗拴溶栓活性。

快速蛋白液相色谱分离小麦高分子量谷蛋白亚基方法的研究

高分子量谷蛋白亚基作为小麦贮藏蛋白的重要组成部分,其组成和含量对小麦面粉的烘烤品质和加工品质有重要影响。本研究以普通小麦品种小偃22号为材料,采用快速蛋白液相色谱(Fast Protein Liq-uid Chromatograth,FPLC)凝胶过滤来分离高分子量谷蛋白亚基,并从样品浓度、洗脱液和流速3个方面进行了研究,发现将原样品稀释8倍、洗脱液为尿素、流速为0.3 ml/min时洗脱效果最好。

反相高效液相色谱法快速测定乳铁蛋白含量

目的建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)快速测定乳铁蛋白在乳原料及乳制品中含量的方法。方法根据酪蛋白在等电点(p H 4.6)凝聚沉淀特点,采用RP-HPLC法,用p H4.6醋酸盐缓冲液溶解分离乳铁蛋白,用C18色谱柱快速分离,用流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为含有0.09%(V:V)三氟乙酸的90%(V:V)乙腈水溶液,进行梯度洗脱,检测波长214 nm,流速0.7 m L/min。结果乳铁蛋白在10~500 mg/L之间呈现良好的线性,相关系数为0.9999,平均回收率为98.0%,RSD=0.8%(n=9)。结论该方法推广性高、快速,简便、准确,可用于乳铁蛋白原料、奶粉、牛奶及保健品等中乳铁蛋白的含量检测。

意大利科研人员研究反向高效液相色谱法定量乳清蛋白及中红外光谱法快速预测甜乳清中的蛋白成分

在乳品工业中膜过滤技术被用于乳清废弃物减量处理并同时回收乳清蛋白。乳清蛋白成分对乳清过滤处理有较哟影响，乳清蛋白组分快速测定以检测乳清蛋白回收率引导起了乳品制造者的兴趣。

高效液相色谱法快速检测酸奶及蛋白饮料中三聚氰胺

三聚氰胺是非常亲水的小分子,在常规的反相色谱中不保留,因此不能与其他物质进行分离。本方法的原理是试样中三聚氰胺经水和乙腈提取后,用高效液相色谱测定,外标峰面积法定量。标准工作曲线相关系数为R=0.99998。精密度试验RSD为0.3%,样品的加标回收率在98.37～99.75%之间。酸奶及蛋白饮料中三聚氰胺快速检测方法灵敏度及准确度符合要求。

荧光蛋白标记/高效液相色谱分析枯草芽孢杆菌-烯酰吗啉菌药合剂

生物和化学组分构建的菌药合剂是新农药制剂发展的热点,其中生物活体和化学组分的准确、快速检测方法备受关注。本实验应用绿色荧光蛋白标记和高效液相色谱技术研究了枯草芽孢杆菌-烯酰吗啉菌药合剂在54±2℃贮存14d前后生防菌株和化学组分含量的变化。结果表明:绿色荧光蛋白标记和高效液相色谱技术联用,可以用于该菌药合剂质量检测和热贮实验中混剂的贮存稳定性监控;菌药合剂在热贮实验过程中的组分含量变化在允许变化范围之内。

液相色谱(HPLC)快速测定苏云金素的方法

苏云金素(thuringiensin)是苏云金杆菌(Bdcillus thuringiensis)分泌到菌体外的核苷类细菌杀虫素,亦有B—外毒素,热稳定外毒素,蝇固素(或蝇毒素)之称。它是仅次于苏云金杆菌产生的伴孢晶体蛋白毒素的另一类有应用价值的毒素。

利用FPLC技术建立重组碱性蛋白酶的快速纯化方案

在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后较好地得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76.2倍。SDS PAGE显示重组碱性蛋白酶分子质量为 2 8ku。

基于UPLC-Q/Orbitrap HRMS多目标快速筛查鱼肉中30种蛋白同化激素及糖皮质激素

建立基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用技术快速筛查和确证鱼肉中30种蛋白同化激素及糖皮质激素的分析方法。鱼肉样品用80%乙腈溶液(含0.2%甲酸)提取,离心,Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化,氮吹后复溶。采用Waters Acquity BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm)分离,以含0.1%甲酸的乙酸铵(20 mmol/L)溶液-乙腈体系作为流动相进行梯度洗脱,加热电喷雾离子源正负离子模式,一级全扫描/数据依赖二级扫描监测模式检测,基质匹配标准曲线外标法定量。结果表明,30种激素在0.5~100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9950;检出限介于0.2~1.0μg/kg之间,定量限介于0.5~2.0μg/kg之间;4种不同鱼肉(多宝鱼、鳜鱼、乌鱼、草鱼)在3个添加水平下,回收率为69.7%~103.2%,相对标准偏差为2.3%~9.4%,该方法高效快捷、准确可靠,适用于鱼肉中蛋白同化激素及糖皮质激素的多目标筛查和定量分析。

乳制品中A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白检测方法研究进展

随着消费者对A2β-酪蛋白的关注度提升,A2β-酪蛋白相关产品不断更新换代。A2β-酪蛋白常用检测方法有反相高效液相色谱法(RP-HPLC)、液相色谱-高分辨串联质谱法、毛细管区带电泳法、试剂盒检测法等。本文对β-酪蛋白遗传变体A1β-酪蛋白和原始形态A2β-酪蛋白的功能特点、检测方法、定量分析进行综述,说明检测方法的原理和试剂药品的作用机理,加强对A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白检测方法的改进与优化,为A2β-酪蛋白应用于功能性食品、婴幼儿配方食品提供理论依据。

用于蛋白快速分离的1-mm内径的高效聚合物整体材料

多年来,整体技术已经成功地从概念阶段发展到表征良好且可重复的商用阶段。不同的整体柱化学材料,包括阴离子交换剂、阳离子交换剂和在ProSwift线性整体柱的反相功能基团,均可用于多种蛋白质的分离。与更大尺寸的色谱柱相比,1-mm内径的色谱柱在灵敏度提高和使用方便二者间达到了很好的协调。由于背压较小,这些整体柱可以在高动力学流速下运行,从而可以在标准的分析型色谱仪器上使用,而不需要微柱或者毛细管柱高效液相色谱系统。

毛细管电泳法检测结核杆菌蛋白多肽类抗原活性成分研究

采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)×50μm i.d.;缓冲液:0.15mol·L-1硼酸盐(含5g·L-1PEG-4000,pH=10.92);分离电压:+12 kV;进样压力:0.5 psi(3.45 kPa),进样时间3.0s;分离温度:25℃;UV-Vis检测器检测波长:200nm。本方法能分离溶菌酶标准蛋白和牛血清白蛋白标准品,根据分子量大小能有效分离结核杆菌耐热抗原样品活性成分,线性回归方程相关系数r2在0.99673以上,定量限在19.47μg·mL-1左右。样品加标回收率在96.09%左右,相对标准偏差小于8.13%,本方法与快速蛋白液相色谱法结果一致。该方法简便、灵敏、快速、可靠、重现性好,能用于结核杆菌耐热抗原样品中活性成分测定。

酪蛋白抗诱变水解物生化特性的研究

采用Ams鼠伤寒沙门氏菌实验研究酪蛋白及酪蛋白的胃蛋白酶的水解物的抗诱变性,采用超滤和等电点法分离水解物,证明水解产物比酪蛋白具有更强的抗诱变性,经快速液相色谱FPLC和质谱法分析表明具有抗诱变性短肽是由9到11个氨基酸构成的,分子量在1000到2000道尔顿范围内。

不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因子表达的影响

目的观察不同治则方药对痴呆动物模型脑组织细胞因子表达的影响。方法7月龄快速老化亚系SAMP8小鼠分为痴呆模型组、阳性对照药脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组、当归芍药散组等6个组;抗快速老化亚系SAMR1作为正常对照组。给药4周后,用液相蛋白芯片(Luminex)技术同时测定脑组织中的10种细胞因子(GM-CSF,IFN-γ,TNF-α,IL-1β,IL-2,L-4,IL-5,IL-6,IL-10,IL-12)含量。结果8月龄SAMP8小鼠脑组织中某些细胞因子表达发生异常改变;当归芍药散、四君子汤能分别提高模型小鼠海马中的IL-4和IFN-γ的水平(P<0.05),而六味地黄汤组则能使模型小鼠海马中的10种细胞因子指标恢复到正常水平(P<0.05,P<0.01)。结论六味地黄汤、当归芍药散、四君子汤则能在一定程度上调节SAMP8小鼠的异常免疫反应,其中六味地黄汤的作用效果较好。

高效液相色谱法测定人血浆中霉酚酸酯及其活性代谢物霉酚酸的浓度

目的:建立快速测定人血浆中霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)及其活性代谢物霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)浓度的高效液相色谱方法。方法:色谱柱:μBondapak C_(18)(10μm,3.9mm×300mm),流动相:40mmol·L^(-1)TBA-乙腈(65:35),流速:1.0mL·min^(-1),紫外检测波长:254nm,柱温:45℃,血浆样品用2.5倍体积的乙腈沉淀蛋白后直接进样,按内标法定量,内标物选用酰胺咪嗪。结果:MMF 和 MPA 的线性范围分别在:0.2-37.5μg·mL^(-1)和0.56-35.0μg·mL^(-1),最低检测浓度分别为0.10和0.50μg·mL^(-1)。MMF 测定的平均回收率为98.00%-101.0%,日内、日间精密度 RSD 为2.9%-6.7%,MPA 测定的平均回收率为97.88%-101.8%,日内、日间精密度 RSD 分别小于6%和8%。结论:本方法简便快速、定量准确,可用于 MMF 临床药动学研究,也可用于 MPA 血药浓度的常规监测。

天麻糖蛋白GGE2b的分离纯化及对急性血瘀大鼠血液流变的影响

目的:从天麻中分离纯化得到糖蛋白组分GGE2b,研究其对急性血瘀大鼠血液流变学指标的影响。方法:采用离子交换和快速蛋白液相层析色谱(FPLC)技术分离天麻水溶性提取物,得到组分GGE2b。采用皮下注射盐酸肾上腺素结合冷刺激的方法制造急性血瘀大鼠模型。观察GGE2b各剂量组对急性血瘀大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数和红细胞变形指数的影响。结果:离子交换结合FPLC技术分离纯化得到天麻糖蛋白组分GGE2b。GGE2b60、120mg/kg能够显著降低急性血瘀模型大鼠高切、中切的全血黏度(P<0.05或0.01)和血浆黏度(P<0.01),降低红细胞聚集指数(P<0.05或0.01),增大红细胞变形指数(P<0.05)。结论:层析技术用于天麻糖复和物的分离纯化是可行的,且得到的糖蛋白组分GGE2b对急性血瘀大鼠异常的血液流变有良好的治疗效果。