超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术在结核病诊断中的应用进展

1结核病现状结核病是严重危害人类健康的传染性疾病之一,是仅次于新型冠状病毒感染的第二大传染病杀手,是全球第13大死因[1]。2022年10月27日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布《2022全球结核病报告》[2](以下简称报告)指出,2021年全球新发结核病患者约1060万人,其中儿童约120万人。受新型冠状病毒的影响,全球结核病发病率与2020年相比上升了3.6%,打破了过去20年间每年约2%的下降趋势。2019年至2021年,全球因结核病死亡人数有所增加,2021年全球共有160万人死于结核病,相当于倒退到2017年的水平。2020年至2021年全球耐药结核病负担增加了3%,2021年报告了45万例利福平耐药结核病例,需要治疗的耐药结核患者中仅有36%的人接受了治疗,并且全球耐药结核的成功治疗率只有60%。2021年全球结核病基本医疗服务支出也从2019年的60亿美元下降至54亿美元,而2022年所需的费用为130亿美元[2],资金缺口巨大。

纤支镜灌洗液的结核分支杆菌快速培养对不典型肺结核的诊断价值

目的 评价纤维支气管镜 (以下简称纤支镜 )支气管肺泡灌洗液 (BALF)的结核分支杆菌快速培养对不典型肺结核的诊断价值。方法 选无痰或痰菌阴性的不典型肺结核患者 4 9例行纤支镜检查 ,进行活检、刷检、BALF经BBLMGIT分支杆菌快速培养查结核杆菌。结果 4 9例经纤支镜刷检、BALF快速培养结核分支杆菌检出率分别是 6 7.4 %、83.7% ,其中 15例经纤支镜肺活检 ,10例病理证实为结核肉芽肿 ,检出率为 6 6 .7%。结论 纤支镜对无痰或痰菌阴性下BALF行结核分支杆菌快培对不典型肺结核具有较高的诊断价值 ,快速 ,阳性率较高。根据镜下所见采用不同的取材方法可望提高诊断率。

结核分支杆菌的实验室快速诊断技术

近年来结核病患者日益增多,但是传统的诊断方法耗时,并且敏感性与特异性均不理想。目前迫切需要更快速、准确的实验室诊断技术来分离和鉴定结核分支杆菌,及时明确诊断。现综述近年来结核分支杆菌的实验诊断新技术。

重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的 探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法 以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为 66.3%、63.0 %和 72 .3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测 ,rTPA38特异性分别为 97.6%、96.8%、86.0 %。rTPA16特异性分别为 94 .7%、93.1%、75 .0 %。PPD特异性为93.4 %、85 .7%、67.9%。统计分析显示 ,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组 ,其阳性率有显著性差异 (P <0 .0 5 )。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P <0 .0 5 )。rTPA38和rTPA16同时检测 10 8例肺结核病组血清可提高 11.1%的阳性率。结论 rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性 ,是ELISA的可靠抗原 ,与rTPA16联用可提高灵敏度 ,对结核病血清学诊断有较高参考价值。

结核分支杆菌MPT63抗原的表达及其血清学诊断价值的研究

获得结核分支杆菌重组MPT6 3蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值 ,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法 :应用基因工程技术表达、纯化MPT6 3蛋白 ,通过Westernblotting和免疫双扩散试验分析其抗原性 ,通过斑点免疫试验、结明试验和结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果 :重组质粒 pET2 4b -MPT6 3测序表明具有正确的编码序列 ,MPT6 3蛋白在大肠杆菌细胞内以可溶性蛋白的形式高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 40 %左右 ,分子量约 16kDa ,Westernblotting和免疫双扩散试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 46 .7%和 5 0 % ,结核病一步法检测的阳性率为 70 % ,结明试验的阳性率为 80 %。在34例正常血清中 ,MPT6 3和PPD斑点免疫试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 38.2 %和 35 .3 % ,结核病一步法检测的阳性率为 2 3 .5 %。结论 :pET2 4b -MPT6 3大肠杆菌工程菌能以可溶性蛋白的形式高效表达 ,重组的MPT6 3也许可作为结核病血清学诊断的一组抗原之一。

结核分支杆菌MPT64基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达、纯化和诊断运用

目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组MPT64蛋白,分析其生物学、免疫学特性,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Rv中获得了MPT64基因,并构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳重组蛋白;Western印迹及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析重组蛋白免疫原性,并检测血清的抗结核抗体。结果构建了能表达重组MPT64的大肠杆菌工程菌,表达的重组蛋白蛋白为可溶性形式,表达量占细胞总蛋白的30%,分子量约23kD。经离子交换柱纯化后,重组蛋白纯度达90%以上。Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ELISA分析表明该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清。结论该实验获得了能高效表达MPT64蛋白抗原的大肠杆菌工程菌。纯化的该重组蛋白具有特异的免疫原性,有一定的诊断运用价值。

聚合酶链反应与分离培养技术检测结核分支杆菌诊断关节结核的对照研究

目的:研究聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在关节结核标本结核分支杆菌检测方面的作用,探讨PCR技术对关节结核诊断的临床价值。方法:自1993年6月至2001年8月,对95例(男55例,女40例;年龄2～75岁)关节结核标本分别应用PCR技术和分离培养法盲法检测结核分支杆菌,计算两者检测阳性率,通过统计学处理进行比较。结果:95例关节结核标本结核分支杆菌检测中,PCR技术检测阳性78例,阴性17例,阳性率82%;分离培养法检测阳性15例,阴性80例,阳性率16%。PCR技术与分离培养法比较,χ2=67,P<0.001,两种方法对于关节结核标本结核分支杆菌的检出率比较差异有统计学意义。PCR扩增整个过程自动化控制,可在数小时内完成。结论:PCR技术检测关节结核标本具有快速、简便、敏感与特异等优点,明显优于分离培养,对关节结核的早期快速诊断与鉴别诊断具有较重要的临床价值。

BacT/ALERT 3D检测系统在快速检测结核分支杆菌中的应用

目的评价BacT/ALERT 3D检测系统在快速检测结核分枝杆菌中的应用价值。方法对336例结核患者的痰液,胸腔积液,病灶组织,脑脊液等标本同时采用BacT/ALERT 3D检测系统和涂片法进行检测。结果 BacT/ALERT 3D检测系统快速培养分支杆菌的阳性率为39.9%,阳性检测时间为14.1天,涂片法阳性率为14.7%,阳性检测时间为1天。结论 BacT/ALERT 3D检测系统能快速,准确的检测分支杆菌,是一种值得推广的分支杆菌快速检测方法。

结核分支杆菌rpsL基因突变的快速检测

目的 建立快速检测结核分支杆菌rpsL基因突变的方法。方法 用聚合酶链反应(PCR)直接从结核分支杆菌基因组扩增rpsL基因,并直接进行测序鉴定。结果 用引物P1,P2 扩增H3 7RvDNA获得约4 6 0bp片段,经序列测定后,显示与GeneBank中公布的序列一致(同源性99% )。2 8株结核分支杆菌耐SM分离株中,2 0株rpsL基因突变位于4 3位密码子,另8株分离株未出现rpsL基因突变。结论 rpsL基因突变是SM耐药性的重要分子机制,本研究为进一步研究链霉素作用方式和耐药机制提供了有力手段。

电子支气管镜及刷检对支气管结核诊断价值

目的探讨电子支气管镜及刷对支气管结核诊断价值。方法分析48例支气管结核患者检查前痰结核杆菌涂片结果与电子支气管镜检查及刷检的结核分枝杆菌均快速培养及结核均培养的阳性率。结果镜下炎性浸润型28例占58.33%、溃疡坏死型4例占8.33%、瘢痕狭窄型9例占18.75%、肉芽增生型3例占6.25%、淋巴瘘型3例占6.25%、管壁软化型1例占2.08%,痰结核杆菌涂片阳性率35.4%,刷检的结核分枝杆菌快速培养阳性率50%,刷检的结核菌培养的阳性率60.4%。结论电子支气管镜及刷检的结核分枝杆菌快培养及结核菌培养对支气管结核有重要的诊断价值,刷检的结核菌培养明显优于痰结核杆菌涂片阳性率,支气管结核以炎性浸润性为主。

耐药肺结核分枝杆菌快速诊断和治疗研究进展

目的综述近年对耐药肺结核快速诊断及治疗的研究进展。方法查阅国内外大量文献,对耐药结核病的诊断及其中西医药治疗情况进行分析归纳。结果耐药肺结核快速诊断主要依靠分子生物学检测;耐药结核病化疗配合免疫、外科手术及中西医药结合治疗。结论分子生物学检测提高快速诊断耐药肺结核效率,但由于设备、技术、费用等因素难以普及需进一步探索;快速有效治疗方法仍在探索阶段。

PCR-SSCP快速检测结核分支杆菌rPOB基因突变

结核分支杆菌的耐药性问题仍是人们长期关注的焦点问题。利福平是当今最主要的抗结核药物之一,如感染菌为利福平耐药,则治疗效果将受到严重影响。因此,利福平耐药性测定尤为重要。然而,由于结核分支杆菌生长缓慢,常规药敏试验需4～6周,不能满足临床之急需。分子生物学技术的不断发展给结核分支杆菌耐药性的快速检测带来了希望。近年的研究表明结核分支杆菌利福平耐药与rPOB基因突变有关。

结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片在结核病快速诊断中的应用

目的利用结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片检测临床标本中结核分枝杆菌抗体,评价该蛋白芯片在结核病快速诊断中的应用价值。方法应用涂片镜检法、培养法和结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片检测121例结核病患者的血清标本,103例肺部其它疾病患者和健康人的血清标本。