EMA-LAMP方法快速鉴别检测单增李斯特菌

作者建立一种将叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)结合环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的新分析方法(EMA-LAMP),快速鉴别检测单增李斯特菌。通过对单增李斯特菌hly基因的六个区域设计4条LAMP特异性引物,EMA-LAMP在63℃下反应1 h,检测单增李斯特菌的死活细胞。结果表明,在浓度为2.0×108CFU/mL的单增李斯特死菌悬液中,使EMA激活光解进入死细胞中且与DNA结合的最佳曝光时间至少为20 min,不抑制活菌细胞DNA的LAMP扩增的最大EMA质量浓度为10μg/mL,而抑制死菌细胞DNA的LAMP扩增的最小EMA质量浓度为4.0μg/mL;活菌细胞的检出限为20 CFU/mL。

结核分枝杆菌与牛分枝杆菌PCR快速鉴别检测方法的建立

根据结核分枝杆菌与牛分枝杆菌基因组的比对分析结果,针对结核分枝杆菌与牛分枝杆菌153bp、RD10和TbD1的3处差异缺失区域设计引物,分别建立了结核分枝杆菌与牛分枝杆菌PCR快速鉴别检测方法。应用建立的3种方法分别对84株结核分枝杆菌、3株牛分枝杆菌、51株非结核分枝杆菌及9种其他常见菌株进行了检测。结果显示,用针对153 bp缺失片段建立的PCR方法分别在结核分枝杆菌及牛分枝杆菌中扩增出645 bp及492 bp的目的条带;用针对RD10、TbD1建立的PCR方法分别在结核分枝杆菌及牛分枝杆菌中扩增出478 bp及361 bp的目的条带、358 bp及524 bp的目的条带。这3种PCR检测方法的准确率和特异性均为100%。敏感性试验结果显示,这些检测方法对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌基因组DNA的检测极限均为10 pg。表明,此方法可用于牛源或人源结核分枝杆菌及牛分枝杆菌的快速鉴别检测。

牛布鲁菌与牛分枝杆菌双重PCR方法的建立及应用

根据GenBank中已发表的流产布鲁菌种特异的omp25基因序列及牛分枝杆菌特异保守的16S rRNA加工蛋白rimM基因序列设计了2对特异性引物,通过对PCR条件的优化,建立了快速鉴别检测牛布鲁菌Brucella abortus和牛分枝杆菌Mycobacterium bovis的双重PCR方法.对建立的方法进行特异性和敏感性试验,结果显示,在牛布鲁菌和牛分枝杆菌中分别扩增出448、269 bp的特异性目的条带,作为对照的大肠杆菌Escherichia coli、沙门菌Salmo-nella typhimurium、八叠球菌Sarcina lutea、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、巴氏杆菌Pasteurella multocida、军团菌Legionella pneumophila、枯草杆菌Bacillus subtilis及溶血性链球菌Streptococcus pneumonia均未扩增出任何条带.牛布鲁菌和牛分枝杆菌的DNA最低检出量均为10 pg;牛奶样品中人工污染的牛布鲁菌和牛分枝杆菌的检测敏感性分别为7.9×103CFU/mL、3 ng/mL.

2008年广州市城区餐饮业餐饮用油质量调查

[目的]对广州市城区餐饮业餐饮用油质量进行调查,为今后卫生监督工作提供科学依据。[方法]2008年6月对广州市城区不同量化分级餐饮业进行卫生学调查和抽检,运用实验室研究并确立的潲水油鉴别检测方法进行检测,将结果进行统计分析并加以比较。[结论]C级餐饮企业油样酸价(0.87±0.88)mg/g、羰基价(3.17±0.96)meq/kg、熔点(12.42±13.71)℃,较A、B级企业高,脂肪酸分析C级餐饮企业7.6%为常用的植物油、43.0%为棕榈油、49.4%为动物油或混合油,提示可能会存在有掺兑潲水油现象。[结论]C级餐饮企业用油卫生状况不容乐观,必须加大对C级餐饮企业用油的监督和整治力度。

盐酸金霉素眼膏粒度及显微拉曼光谱分析研究

目的:研究盐酸金霉素眼膏粒度检验方法,应用显微拉曼光谱法快速鉴定粒子,分析粒度超标原因。方法:应用显微镜法检查盐酸金霉素眼膏粒度;采用显微拉曼光谱法对盐酸金霉素粒子进行快速检测和鉴别,测定条件:532 nm激光器,2.5 m W激光功率,0.002 s曝光时间,1 000次累加。结果:部分企业粒度检查结果不符合标准规定,粒度批间差异较大;由显微拉曼光谱表明样品中超过50μm的微粒均为盐酸金霉素粒子。结论:部分企业生产工艺未对粒度进行有效控制,是导致产品粒度超标的根本原因;建议《中华人民共和国药典》2015年版四部粒度检查法对粒径测定标准等方面做出更详细的规定;显微拉曼光谱法在药品显微鉴别结果准确,具有较好的的应用前景。