一种改进的快速Southern杂交方法

本文提出一种使用琼指糖凝胶直接杂交的方法,结果明确、简单可行,是微量核酸、低拷贝基因鉴定以及疾病核酸诊断的一种较好方法。

荧光原位杂交法快速鉴定血培养中白念珠菌的方法学评价

目的 :评价荧光原位杂交法 (FISH)快速鉴定血培养中阳性的白念珠菌的应用价值。方法 :当BacT/ALERT报警后 ,涂片革兰染色 ,若发现念珠菌 ,与针对白念珠菌的特异性探针杂交 ,同时将分离菌转种沙保罗培养基 ,比较 2种方法的鉴定结果。结果 :探针的特异性经 15株标准菌株证实 ,分离到的 36株念珠菌中 ,杂交法在 3h内可全部得到鉴定结果 ,与培养法比较 ,杂交法的特异性和敏感性均为 10 0 % .结论 :使用FISH可直接快速鉴定报警阳性血培养中的白念珠菌 ,结果可靠。

一种高效快速鉴定蔬菜品种和检测杂交种纯度的新方法

品种鉴定实际上是一个连续过程，从品种繁育到品种推广、品种繁殖、采收和品种贸易等，鉴定贯穿了每一个环节。随着《植物新品种保护条例》等有关育种者权利保护法规的颁布实施，涉及作物品种权争议和育种者权益保护的事例逐年增加，植物新品种保护问题更加突出。如何保护品种繁育者、生产者的知识产权利益？如何使种子使用者减小使用假劣种子所造成的损失？寻求品种真实性鉴定的有效分子标记技术体系成为备受关注的方法。

SSR分子标记两种电泳方法快速区分玉米种子杂交种

采用SSR分子标记方法,从40对SSR引物中筛选出3对特异性高的引物,区分10个玉米杂交种,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光毛细管电泳两种方法分离PCR产物,分析其位点多态性信息,快速区分品种,并比较两种电泳方法。结果表明,SSR分子标记法区分玉米品种方法简单、重复性好、结果可靠。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳适合检测少量样本,荧光毛细管电泳适合高通量检测,结果更精确,两种电泳方法都可以有效地区分不同玉米品种,实践中可根据不同要求和试验条件选择不同的电泳方法。

乌鳢水泡病毒(SHVV)巢式PCR检测方法的建立与应用

巢式PCR是建立在普通PCR方法基础之上的一种改进型方案,广泛用于病毒基因的检测。但是,目前还没有建立巢式PCR检测乌鳢水泡病毒的报道。本研究通过获取感染乌鳢水泡病毒的杂交鳢组织,获得病毒的相关基因,利用巢式PCR相关技术,通过体系的建立和反应程序的优化,建立一种检测乌鳢水泡病毒的方法,为及时发现并快速诊断乌鳢水泡病毒提供一项重要的技术手段。

棉花抗虫杂交种发芽率和纯度快速鉴定方法

近年来，棉花杂交种推广面积增加，经营单位制种面积也随之扩大，其杂交种来源于各繁殖基点，来源于千百个农户的制种。在制种过程中由于杂交种的母本是常规种，往往不抗虫，有一些棉铃由于疏漏没有进行杂交，而是自交，这样在最后收的杂交种子中往往掺杂一些不抗虫的假杂种，因此就必须进行发芽率和纯度鉴定，保证种子的质量。发芽率需要在恒温箱中进行，而纯度鉴定就更费工费时，有的带到海南岛长期观察，种植面积大、时间长，成本高，耽误经营。

食品中病原微生物快速检测方法研究进展

食品中病原微生物是影响食品安全性的最主要生物因素。本文综述了食品中病原微生物的快速检测方法研究进展,并对微生物培养法、免疫学方法和核酸分子杂交等现优检测方法进行了比较和评述。

Taqman实时荧光定量PCR快速检测白斑综合症病毒的方法研究

目的:建立一种快速、特异、灵敏的实时荧光定量PCR方法用于检测白斑综合病毒DNA,为控制对虾白斑综合症提供科学依据。方法:根据GenBank登录的白斑综合病毒株序列,使用生物学软件进行序列对比,在白斑综合症病毒保守区序列设计引物和Tagman探针并进行筛选。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化,提高了该方法的特异性、灵敏度和重现性等,并与标准方法(核酸探针点杂交)进行比对,对现场32份虾样进行了检测。结果:Tagman实时荧光定量PCR与标准方法的特异性符合率为100%,灵敏度超过标准方法的10000～100000倍,检测时间为标准方法的1/24,重现性良好(s=0.1～0.49,CV=0.78%～3.72%),并能准确定量。结论:本研究建立的Taqman实时荧光定量PCR方法用于白斑综合症病毒检测具有特异、灵敏、快速、定量、重现性好等优点。

反相斑点杂交快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的建立以聚合酶链反应(PCR)为基础的寡核甘酸探针反相斑点杂交方法快速检测对利福平耐药的结核菌相关的rpoB基因突变，并评价其临床应用价值。方法应用PCR-反相斑点杂交方法对利福平耐药的62株结核菌和对其敏感的40株结核菌进行检测，所得结果与传统药敏试验结果以及102株结核菌的直接测序结果进行比较。结果62株对利福平耐药的菌株中，54株碱基突变被准确鉴定，灵敏度为87．1％(54／62)，阳性预测值为100％；40株对利福平敏感的菌株均被准确鉴定，特异性为100％，阴性预测值为83．3％(40／48)；准确度为92．2％(94／102)。与测序法结果符合率为99％。结论以PCR为基础的反相斑点杂交方法其敏感度和特异性均高，无假阳性结果，因此适用于大批量结核菌对利福平耐药性的初筛。

用于转基因植株检测的DNA快速微量提取方法

建立了一个用于转基因小苗检测的ＤＮＡ快速微量方法．每２０ｍｇ新鲜叶片可提出约１０ μｇ ＤＮＡ，且 ＤＮＡ有较好的完整性，Ａ２６０／２８０值在１．７～１．９范围内，并适合于点杂文和ＰＣＲ分析．

地高辛标记对旱稻进行southern杂交分析主要影响因素的优化和验证

以转基因旱稻和野生型旱稻为材料,对通过地高辛随机引物标记法进行的旱稻基因组Southern杂交条件进行了优化分析,包括探针制备效率、DNA样品量、酶切体系及转膜时间等。结果表明:影响探针制备效率的首要因素是温度而不是时间;DNA上样量在10~30μg均可以获得高质量的杂交图;60μL体系15 h即可酶切彻底并获得良好的杂交效果;转膜时间6 h即可。本研究所优化的地高辛标记的旱稻杂交分析结果稳定重复性好,具有较高的灵敏度和信噪比。

彩叶树美人梅、紫叶矮樱快速繁殖方法

美人梅、紫叶矮樱系紫叶李和宫粉梅、矮樱人工远缘杂交育成的园林树木品种，按传统常规方法繁育美人梅和紫叶矮樱，是在定植后的杏砧、桃砧上用枝接或芽接培育，从砧木定植、嫁接到苗木出圃，占地多、田间管理劳动强度大且生产周期至少需要2年，难以满足园林绿化应用快速大量繁殖的要求。

断奶杂交猪三段快速育肥法

体重15公斤左右的断奶仔猪．采用以下的三段饲养方法．一般4个月即可达到体重100公斤的出栏标准。现将这种快速育肥新方法介绍如下，供养殖户参考：

马关节炎病毒的快速检测方法

德国学者Starick用4种不同引物配对的反转录PCR(RT-PCR)来检测精液和组织样本中马关节炎病毒(EAV)RNA,并与细胞培养和病毒分离,限制性分析、斑点杂交反应和嵌套PCR进行比较。试验所用样本为从血清阳性公马采集的24份精液和从4匹流产马驹采集的11份组织样本。结果,与细胞培养分离法相比,分子学方法的敏感性较高。在RT-RCR。

ERIC-PCR分子杂交技术分析大熊猫肠道菌群结构

目的 了解大熊猫肠道微生物区系结构的相似性和稳定性,并找出大熊猫肠道微生物群落结构的变化与健康状况的关系。方法 对上海动物园及上海野生动物园所饲养的3只大熊猫2次采集的粪便样品进行微生物群落总DNA的抽提,并以此为模板获得反映肠道微生物群落结构特征的ERIC- PCR和Southern杂交指纹图谱,比较各DNA样品指纹图谱的相似性指数。结果 除国庆(大熊猫)的第1次采集的样品(当时处于腹泻状态) ,其他各DNA样品的ERIC- PCR及Southern杂交指纹图谱的相似性都达到85 %～10 0 % ;佳斯及川川(大熊猫) 2个个体2次采集的样品之间ERIC指纹图谱的相似性分别为93%和87% ,而国庆腹泻时的样品与健康时的样品之间则为71%。结论 大熊猫不同个体之间肠道微生物群落结构比较相似,而且同一个体在不同时期表现出比较高的稳定性,但当个体的健康出现问题时肠道优势菌菌群结构有一定波动。所采用的DNA提取方法、ERIC- PCR和Southern杂交指纹图谱的高度重复性证明了之一分子生态学技术在大熊猫肠道微生物区系动态监测中的可行性。

快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒增龄性变化

[目的]研究快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒的增龄性变化。[方法]以快速老化模型小白鼠SAMP10为脑老化动物模型 ,采用Southern杂交方法 ,测定了不同月龄SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化情况。[结果]SAM的细胞端粒长度在17～25kb之间 ,SAMP10小鼠脑细胞端粒具有随增龄而减少的趋势。[结论]从SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化来看 。

杂交食葵田间管理技术

1．补苗 采用浸种催芽方法，移栽可采取带土座水移栽，并追施少量化肥，促进小苗快速生长，移栽时要在两对真叶展开前进行，移栽时最好保持原方位不变，以傍晚和阴天时移栽为宜，保证成活率。

转基因产品检测方法建立的基础及应用

随着转基因技术的发展 ,转基因生物及其产品日益增多。但其安全性问题引起人们的争论 ,各检验检疫口岸相继开展了转基因产品的检测工作。目前采用和待开发的转基因成分检测方法是建立在已商品化生产的转基因植物外源基因的构建及表达情况的基础上的 ,包括蛋白质检测和 DNA检测。蛋白质检测方法有 EL ISA、试纸条检测和 Western杂交 ,DNA检测方法有 PCR、Southern杂交、基因芯片等 。

大果榛子快速繁殖技术

日前，我国推广种植的榛子为欧榛与平榛的杂交品种，具有坚果大、抗寒性强的特点，在北方地区已开始大力发展。目前，榛了苗木繁殖方法主要为直立压条法，但繁殖系数低，扦插生根率高，芽体保存率低，成活困难，且嫁接繁殖多发小脚病。

应用双酶切/Southern杂交方法诊断面肩肱型肌营养不良

目的 探讨面肩肱型肌营养不良 (FSHD)的基因诊断方法。方法 抽取我院 1 997～2 0 0 0年收治的 37例FSHD患者的静脉血 ,常规抽提gDNA ,以EcoRI/HindⅢ、EcoRI/BlnⅠ分别酶切gDNA ,0 6 %琼脂糖凝胶电泳分离 ,p1 3E 1 1探针Southern杂交 ,应用ImageMasterTotalLabv1 1 1分析软件判断杂交片段大小。结果 正常对照只检测到 1个 4q35来源的、大于 33kb的EcoRI +HindⅢ /p1 3E 1 1片段 ,而所有FSHD患者中有 33例检测到 2个 4q35来源的EcoRI +HindⅢ /p1 3E 1 1片段 ,其中包含 1个小于 33kb的小片段 ;3例患者中可检测到 2个小于 33kb的片段 ,但其中 1个来自 1 0q2 6 ;另1例散发性患者中检测到 3个 4q35 型片段 ,且其中 2个小于 33kb。在 1名无症状 9岁男孩中检测到1个与其患病父亲一致的小片段 ,提示为症状前患者。结论 双酶切 /Southern杂交的方法可用于中国人面肩肱型肌营养不良患者的基因诊断及症状前诊断。本文结果首次提示我国FSHD患者中也存在 4q 1