念珠菌类细菌样变异株基因特征初步研究

目的在对念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状研究的基础上,进一步探讨念珠菌类细菌样变异株基因特征。方法在低温、营养缺乏条件下诱导白色念珠菌标准菌株使其变异;用不同浓度梯度的氟康唑等临床常用抗真菌药物诱导白色念珠菌标准菌株变异。采用煮沸法制备真菌基因模板,采用细菌保守基因16SRNA序列引物和真菌保守基因18SRNA序列引物分别扩增16SRNA和18SRNA序列,琼脂糖凝胶电泳,观察并记录结果。同时将细菌保守基因16S RNA扩增片段进行测序,所得序列进行BLAST比对分析。结果念珠菌类细菌样变异株16SRNA序列均扩增阳性,而白色念珠菌标准株未出现相应的扩增条带。念珠菌类细菌样变异株18SRNA序列扩增除2号菌株有微弱的条带外,其余变异株均未扩增出目的条带,而白色念珠菌标准株则出现相应的扩增条带,表明念珠菌类细菌样变异株基因组中18S RNA序列所占比例不多或是因多次传代遗失。念珠菌类细菌样变异株16SRNA扩增片段经纯化后进行DNA序列测定,BLAST进行比对分析,发现念珠菌类细菌样变异株序列与数据库中细菌序列有较高的相似性。结论念珠菌类细菌样变异株基因组含有细菌保守基因及少量真菌保守基因,具有原核生物学性状的念珠菌类细菌样变异株是源于真核生物的念珠菌。此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。

念珠菌类细菌样变异株生物学性状及遗传学特征研究

目的：了解念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状的改变情况，并通过其遗传学特征研究从分子水平揭示这种变异发生的机理。方法实验室研究中，利用不同的营养条件及生长环境、不同的唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌株进行诱导使其变异；临床研究中，从抗真菌治疗效果不佳患者的阴道分泌物、痰液、胸腔积液、胃液等标本中分离念珠菌变异株，并对以上变异株的形态特点、核结构、生化反应、耐药性、菌体组分、遗传学特征等进行研究。结果菌体形态：念珠菌极易发生类细菌样变异，变异株菌体可呈 G＋球菌状、G＋杆菌状、G＋长丝状、G－球菌状、G－杆菌状等；核结构：电镜透射扫描证实念珠菌变异株失去真核细胞固有的核结构而呈原核生物样改变；生化反应：在所观察的20项生化试验中有5项不同；药敏试验：念珠菌发生变异后对原本敏感的抗真菌药物完全耐药，而对原本耐药的普通抗细菌药物敏感，且耐药谱与普通细菌耐药谱相同；菌体组分改变：经质谱仪鉴定念珠菌变异株和变异菌返祖株菌体组分有明显不同；真菌最保守基因表达：采取 PCR 技术对变异株进行真核生物最保守基因16S sRNA 检测发现，念珠菌发生类细菌样变异后仍表达真核生物保守基因，由此可证明具有原核细胞生物学特性的念珠菌类细菌样变异株是源于具有真核细胞的念珠菌。结论念珠菌极易发生类细菌样变异，变异株各种生物学特性与原核生物酷似。电镜观察具有明确亲缘关系的念珠菌标准菌株、念珠菌类细菌样变异株、变异菌返祖株在核物质存在形式上确有质的改变，此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。

念珠菌类细菌样变异株形态学特征

目的 研究念珠菌发生类细菌样变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 将白色念珠菌标准菌株用抗真菌药物诱导、置于不同环境下一定的时间、传代条件下培养获得的念珠菌类细菌样变异株以及从患者临床标本中分离的念珠菌类细菌样变异株进行培养、革兰染色和观察菌落与菌体形态.结果 念珠菌极易发生类细菌样变异,变异后菌落可产生黏液、红色、橘色、黄色等色素; 即使同一株菌传代可同时得到大小不等、颜色和形态不同的菌落,同一菌落内可见形态不同的菌体.变异株经革兰染色可呈革兰阳性或阴性球菌状、杆菌状、类芽孢菌状及分枝菌状.这些念珠菌类细菌样变异株在适宜的实验室条件下或动物体内可恢复成典型的念珠菌.但这种返祖有不稳定性,在一定条件下又可恢复成类细菌样变异体.结论 临床常用唑类抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体形态可发生类细菌样改变,失去念珠菌固有的菌落、菌体特征,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.

念珠菌类细菌样变异株生物化学形状分析

目的:分析念珠菌类细菌样变异株生物的化学形状。方法:利用实验室研究开展分析,利用抗真菌药物完成白色念珠菌标准菌株诱导,将其放置在不同环境下一段时间,并对传代条件下培养获得的念珠菌类细菌样本及患者临床标本中分离的念珠菌类细菌样变异体进行培养,观察菌体形态、分析药敏试验结果与基因表达。结果:在类细菌样便宜产生以后,念珠菌菌落产生黏液及红色、橘色、黄色等不同颜色的色素。变异菌株经格兰染色处理以后,可呈现出格兰阳性状、阴性球菌状、杆菌状等多种不同性状。在适宜的实验室条件下或动物体内,念珠菌类细菌样变异株可以重新恢复成典型念珠菌,此种变化形式存在不稳定性;念珠菌在类细菌样变异出现以后,仍表达真核生物保守基因。结论:念珠菌类细菌样变异可以让念珠菌的菌落和菌体形态出现一定的改变,具有原核细胞生物学特征的念珠菌类细菌样变异源于具有真核细胞的念珠菌。念珠菌类细菌样变异产生后,变异菌株的各种生物学特征与原核生物之间具有相似性。念珠菌类细菌样变异株生物的化学形状易导致念珠菌感染诊断过程中的误诊事故。

类细菌样念珠菌变异株真菌保守基因检测

目的揭示念珠菌类细菌样变异株的分子基础及其相应的生物学特性的分子基础。方法采用常规PCR方法，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、两株不同来源的白色念珠菌标准菌株及源自于这两株念珠菌标准酋株的类细菌样念珠菌变异株进行真菌最保守18SrRNA基因的检测。结果大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌无真菌基因表迭；两株念珠菌标准菌株真菌基因为强表达；源自于念珠菌标准菌株的类细菌样念珠菌变异株真菌基因呈极弱表达。结论念珠菌发生类细菌样变后，虽然生物学性状呈类细菌样改变，但仍部分表达真菌最保守基因。此结果也进一步证实了具有原核生物特性的类细菌样念珠菌变异株是源自于具有真核细胞特性的念珠菌。

类细菌样念珠菌变异株对普通抗细菌药物敏感性观察

目的了解念珠菌发生类细菌样变异前后对普通抗细菌药物的敏感性是否发生了改变。方法采用常规MH药敏试验方法，观察ATCCl0231白色念珠菌标准菌株和其自发变异后得到的类细菌样念珠菌变异株，9002．9白色念珠菌标准菌株及其经抗真菌药物诱导形成的类细菌样念珠菌变异株，临床分离的类细菌样念珠菌变异株及变异株返祖后得到的念珠菌株，共11株菌对普通抗细菌药物头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁、亚胺培南、环丙沙星、红霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素、四环素的敏感性。结果两株白色念珠菌标准菌株、临床分离类细菌样变异株返祖后的念珠菌株对普通抗细菌药物无抑菌圈；而不同条件下得到的类细菌样念珠菌变异株则对以上普通抗细菌药物有一定的敏感性。结论白色念珠菌发生类细菌样变异后，对普通抗细菌药物的敏感性发生了改变，变异前对普通抗细菌药物不敏感，但发生类细茼样变异后对普通抗菌药物均有一定的敏感性，其抗菌谱与普通细菌基本一致。

临床分离类细菌样变异念珠菌的实验室诊断

目的探索临床分离类细菌样变异念珠菌的实验室诊断方法。方法对类细菌样变异念珠菌感染的可疑病人标本采取合适的培养基分离、传代恢复、动物体内恢复返祖、必要时进行真菌基因鉴定。结果临床分离的类细菌样变异念珠菌绝大多数能在合适条件下恢复成典型的念珠菌。少数难恢复的变异株，可通过真菌基因检测进行鉴定。结论对于慢性念珠菌感染、不合理抗真菌治疗病人临床标本分离出的菌体形态酷似细菌但用传统方法无法进行鉴定的菌株，应考虑为念珠菌变异株，并对其返祖后进行鉴定。从而避免或减少念珠菌因形态变异造成的漏诊或误诊。

变异念珠菌常见菌落和菌体形态

目的 研究白色念珠菌变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 用唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌进行实验室诱导得到不同的变异株;不同培养环境下获得白色念珠菌自发变异株.从抗真菌药物治疗效果不佳的临床念珠菌感染患者标本中分离培养的念珠菌变异株.将以上变异株进行培养,革兰染色,镜下观察菌体形态.结果 氟康唑诱导变异株菌落呈黏液状,革兰染色为阳性长杆状;伊曲康唑诱导的变异株菌落呈水滴状,革兰染色为阴性球杆状;酮康唑诱导的变异株菌落呈灰白色,革兰染色为阳性葡萄状;白色念珠菌自发变异株和临床分离念珠菌变异株菌落多产红色、黄色等色素形态为革兰阳性球菌状、革兰阴性杆状,也可呈白色毛绒状、淡粉色粉末样菌落,革兰染色为阳性念珠菌.结论 常用抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体可发生类细菌样改变,因此,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.

两株抗菌海洋细菌对白色念珠菌的抗菌作用稳定性研究

为了明确海洋细菌GM-1与变异菌株GM-1-2菌株的抗菌特性，以白色念珠菌（Candidaalbicans）为指示菌，采用牛津杯法测定海洋细菌GM-1及其变异菌株GM-1-2菌株的抑菌作用及其稳定性，比较2个菌株发酵液的抑菌作用。结果表明：GM-1和GM-1-2菌株及无菌发酵液对白色念珠菌均具有明显的抑制作用，变异后的GM-1-2菌株抑菌作用下降；两个菌株的抑菌作用在不同条件下稳定性不同。GM-1菌株发酵液100℃处理2h抑菌作用无明显变化，121℃处理20min抑菌作用明显下降；GM-1-2菌株在80℃处理2h抑菌作用无明显变化，100℃处理2h抑菌作用降低，121℃处理2h抑菌作用消失；2个菌株的发酵液的抑菌作用在pH6-8条件与未处理的对照无显著差异，pH高于8或低于6的条件下处理24h抑菌作用显著下降；发酵液经紫外线、光照以及胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K分别处理不同时间，其抑菌作用与对照无显著差异。表明海洋细菌GM-1及其变异菌株GM-1-2无菌发酵液对白色念珠菌的抑制作用较稳定，菌株变异后抑菌作用及其对温度的稳定性有所下降。