白色念珠菌菌丝壁蛋白1的N端片段的克隆及表达

目的构建白色念珠菌的菌丝壁蛋白1(Hwp1)N端片段的重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白。方法PCR扩增目的基因,将其连接到pMD18-T载体上,经测序验证成功后,将目的基因连接至表达载体pET28a(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,提取质粒进行PCR、双酶切法鉴定,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达Hwp1的N端片段。结果成功制备了重组质粒pMD18-T-Hwp1及pET28a(+)-Hwp1,PCR及双酶切法鉴定结果。构建了含重组质粒pET28a(+)-Hwp1的大肠杆菌工程菌,经IPTG诱导能高效表达目的蛋白。结论成功构建、表达了Hwp1的N端片段,为进一步研究其在诊断白色念珠菌病中的作用奠定了基础。

弓形虫卵囊壁蛋白OWP1的重组表达和特异性单克隆抗体制备

为研究制备弓形虫卵囊壁蛋白和特异性单克隆抗体,以弓形虫弱毒株ME49株DNA为模板,应用PCR技术扩增卵囊壁蛋白OWP1基因,将其克隆至原核表达载体构建重组表达质粒p ET-28a-OWP1,经过IPTG诱导表达和His纯化树脂纯化重组蛋白His-OWP1。重组蛋白His-OWP1作为免疫原,免疫7周龄雌性BALB/c小鼠,重组蛋白GST-OWP1作为检测筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备弓形虫卵囊壁蛋白OWP1的单克隆抗体。结果表明,获得2株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株(4A2和2C10)。Western blot结果表明研究制备的单克隆抗体能够识别重组表达蛋白。制备获得的2株稳定性好、效价高的单克隆抗体,可为今后研究特异敏感的弓形虫病血清学检测方法提供材料。

口腔白念珠菌耐药性及毒力因子表达水平相关性研究

目的了解口腔白念珠菌分泌型水解酶、生物膜和菌丝相等毒力因子的体外表达水平及其耐药性,并分析两者的相关性。方法分别采用牛血清白蛋白平板、卵黄琼脂平板和三丁酸甘油脂平板检测口腔白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)、磷脂酶(PL)和脂肪酶(Lip)的活性;采用结晶紫法检测其生物膜的形成,采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测菌丝壁蛋白1(HWP1)基因的表达;检测白念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性。结果80%的菌株高产分泌型SAP,98%的菌株高产PL,78%的菌株Lip产量中等,无菌株高产Lip;50株菌株均能形成生物膜,其中30株(60%)生物膜形成能力强;SAP和PL的体外表达水平呈正相关(P<0.05),其他毒力因子之间均无相关性;耐药株与敏感株的毒力因子体外表达及HWP1表达之间没有显著性差异。结论大部分口腔白念珠菌高表达SAP和PL,中等表达Lip,生物膜形成能力强,SAP和PL的体外表达水平呈正相关,口腔白念珠菌的毒力与耐药性之间没有显著相关性。

白色念珠菌菌丝壁蛋白1的研究进展

此文简述了条件致病菌白色念珠菌的菌丝壁蛋白1（Hwp1）的结构特征、表达部位、其作为哺乳动物转谷氨酰胺酶底物的特点、黏附的二阶段模型、在白色念珠菌病发病中的作用、形成生物被膜时所扮演的角色和对白色念珠菌病诊断及治疗的展望。

Eno1、HWP1抗体检测及真菌评分对恶性肿瘤患者合并ICI的诊断价值

目的分析α-烯醇化酶(Eno1)、念珠菌菌丝壁蛋白1(HWP1)抗体检测及联合真菌评分在恶性肿瘤患者合并侵袭性念珠菌感染(ICI)诊断中的应用价值。方法分析郑州大学第二附属医院2015年3月-2019年1月收治的109例恶性肿瘤合并ICI高危患者的临床资料,其中确诊8例,临床诊断47例,拟诊12例,非感染42例;比较各组血Eno1、HWP1抗体检测及Sevilla评分结果;并以确诊、临床诊断为阳性对照(n=55),非感染组为阴性对照,分别比较单一Eno1、HWP1抗体、Sevilla评分及联合诊断恶性肿瘤合并ICI患者的临床价值;统计各组中Eno1、HWP1抗体及Sevilla评分阳性比例,并进一步分析平行实验、序列实验诊断恶性肿瘤合并ICI患者的临床价值。结果确诊Eno1、HWP1抗体、Sevilla评分均显著高于临床诊断ICI、拟诊ICI、非感染组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。单一诊断时Sevilla评分的AUC最高(0.870),敏感度及特异性分别为61.80%、97.60%,且AUC值显著高于HWP1抗体的AUC值(Z=2.249,P=0.024);联合诊断时AUC值上升至0.942,敏感度及特异度分别为83.60%、95.20%;且AUC值显著高于单一Enp1、HWP1抗体、Sevilla评分诊断(P<0.05)。各组Eno1、HWP1抗体、Sevilla评分阳性比例差异有统计学意义(P<0.05)。Eno1+Sevilla评分平行试验诊断ICI的AUC值最高(0.835),敏感度及特异度分别为83.60%、83.30%。Eno1+Sevilla评分阳性诊断恶性肿瘤合并ICI的AUC值最高(0.731),敏感度及特异度分别为50.90%、95.20%,且其AUC值显著高于Eno1+HWP1抗体阳性(P<0.05)。结论单一Eno1、HWP1抗体检测、Sevilla评分及Eno1+Sevilla评分平行试验应用于恶性肿瘤合并ICI的临床诊断均有一定诊断价值,但联合应用时诊断效能最佳,值得临床推介。

阴道白念珠菌毒力因子表达水平及与耐药的相关性

目的 了解复发性念珠菌性阴道炎(RVVC)患者与阴道白念珠菌定植者的阴道白念珠菌的生物膜、水解酶和菌丝壁蛋白1(HWP1)基因等毒力因子的体外表达水平及其耐药性,初步探究白念珠菌致病性和耐药性与毒力因子之间的关系,为进一步探明白念珠菌引起的RVVC的致病和耐药机制提供资料。方法 前瞻性收集分离来源于成年女性RVVC患者和阴道白念珠菌定植者的100株阴道白念珠菌,采用酵母样真菌药物敏感性试剂盒检测对5种常用抗真菌药物的敏感性,采用结晶紫染色法检测其生物膜形成能力,采用牛血清白蛋白平板、卵黄琼脂平板和三丁酸甘油脂平板检测阴道白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)、磷脂酶(PL)和脂肪酶(Lip)的活性,采用实时荧光PCR检测HWP1基因的表达。结果 5种常用抗真菌药物中至少1种耐药的白念珠菌RVVC患者来源有13株,阴道定植者来源有10株;RVVC患者来源菌株的生物膜、3种分泌型水解酶和HWP1基因体外表达水平均高于阴道定植者来源菌株(均P<0.05),两组在生物膜形成强弱、3种水解酶表达高低等定性角度,差异均有统计学意义(均P<0.05);耐药性菌株生物膜表达水平高于非耐药性菌株外(P<0.05),对3种分泌型水解酶和HWP1基因体外表达水平上两组间没有差异(均P>0.05);Pearson相关性分析结果显示,除HWP1基因和生物膜-OD之间呈弱相关性(r=0.211,P=0.039)外,其他各项指标之间没有相关性(均|r|<0.2,P>0.05)。结论 白念珠菌的毒力因子生物膜、SAP、PL、Lip和HWP1都可能在RVVC的致病过程中发挥了重要作用,HWP1与生物膜的形成呈弱相关性,生物膜的形成与阴道白念珠菌的耐药性产生可能存在关联。