稀土元素对怀槐悬浮培养细胞异黄酮合成及氧化还原态的影响

在培养基中添加不同浓度的硝酸铈和硝酸镧,并检测怀槐细胞悬浮培养过程中异黄酮含量、苯丙氨酸裂解酶(PAL)酶活、还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽含量的变化,以探讨稀土元素对怀槐细胞合成异黄酮的影响和机制.结果表明,20mmolL-1硝酸铈和10mmolL-1硝酸镧较适合诱导怀槐悬浮培养细胞合成异黄酮;细胞培养过程中,硝酸铈和硝酸镧诱导异黄酮合成的变化趋势与PAL酶的活性变化一致;氧化还原态变化分析发现,硝酸铈和硝酸镧处理的细胞中GSH/GSSG比例分别在d3和d2达到最大值,是同期对照的1.46和1.47倍,而异黄酮含量则在d4和d3达到最大值,分别达到了271.42μgg-1(DW)和279.32μgg-1(DW).研究结果显示,怀槐细胞悬浮培养中添加稀土元素提高次生代谢产物异黄酮的合成可能与稀土元素诱导细胞氧化还原态的改变有关.

怀槐培养细胞中异黄酮分析及其保肝作用

怀槐愈伤组织具有异黄酮合成能力,HPLC分析表明培养3周的愈伤组织中积累芒柄花黄素、染料木素、大豆甙元等三种主要异黄酮含量分别平均为53.4、12.3、17.4μg/g FW。愈伤组织经乙醇提取和乙酸乙酯萃取可有效去除杂质,萃取出的总异黄酮对小鼠四氯化碳急性肝损伤有显著的保护作用,可以有效降低肝损伤引起的血清GOT、GPT升高,增加血清TP、Alb的含量,效果均好于甘草甜素片。

怀槐化学成分的研究(Ⅱ)

目的 :对怀槐心材乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行化学成分的研究。方法 :硅胶柱色谱和SephadexLH 2 0凝胶色谱分离纯化 ;UV ,IR ,MS ,1HNMR ,13 CNMR(DEPT)和 2DNMR鉴定化合物的结构。结果 :分离并鉴定了 4′ ,8 二羟基 7 甲氧基异黄酮 (Ⅰ )、鸢尾种苷元 (Ⅱ )、黄豆黄素 (Ⅲ )和白藜芦醇 (Ⅳ )。结论 :Ⅰ为新的异黄酮类化合物 。

怀槐的化学成分研究Ⅰ

怀槐心材有明显的保肝等作用 ,从其乙醇提取物的乙醚萃取部分分得 6个异黄酮类成分 ,经理化性质和光谱分析鉴定为染料木素 (genistein ,Ⅰ )、芒柄花黄素 (formononetin ,Ⅱ )、alfalone(Ⅲ )、雷杜辛 (re tusin ,Ⅳ )、大豆甙元 (daidzein ,Ⅴ )、阿夫罗摩辛 (afrornosin ,Ⅵ ) ,其中化合物Ⅲ和Ⅵ为首次从该植物中分得。

用神经网络和遗传算法优化怀槐悬浮细胞合成异黄酮

为了获得怀槐悬浮细胞合成异黄酮的最适培养条件 ,采用ANNs(人工神经网络 )结合RAGA(实数编码加速遗传算法 )对培养基组成进行全局寻优。培养基中影响异黄酮染料木素产率的主要组成是KNO3、(NH4 ) 2 SO4 、2 ,4 D和 6 BA。在它们的有效作用浓度范围内 ,用随机 1 0组培养基组合及细胞染料木素产率为输入和输出由ANNs对数据建模 ,由RAGA优化模型参数。建立的优化模型准确性高 ,依赖模型由RAGA全局寻优获得的最佳培养基组合是 1 4 9 6 8mg L (NH4 ) 2 SO4 、2 936 1 0mg LKNO3、0 0 1mg L 2 ,4 D和 0 1 9mg L 6 BA ,染料木素产率达 1 4 1 3mg L ,与模型预测值的误差为 7 38%。结果表明 ,运用神经网络结合遗传算法优化怀槐细胞合成异黄酮的培养条件是可行的 。

RP-HPLC法测定怀槐中染料木素和芒柄花黄素含量

A method for the determination of genistein and formononetin in Maackia amurensis Rupr. et Maxim. by HPLC was reported. The RP-HPLC methods were used as follows: Hypersil ODS C18 column; The mobil phase is MeOH-1% acetic acid solution（gradient）, genistein and formononetin were determined by UV detector at 261nm and 249nm respectively. The results showed that average recovery and precision （RSD） for genistein and formononetinwere 100.4%,\ 101.8%and2.65%, 2.16% respectively. The method is appropriate for determinaton of genistein and formononetin in M. amurensis.

怀槐心材提取物的防腐性能及其急性毒性试验研究

以怀槐的心材和树皮为原料,用乙醚、氯仿、丙酮、甲醇和水5种溶剂对其进行浸提,得到10种提取物。这10种提取物对白腐菌和褐腐菌的抑菌性能研究表明,怀槐心材的甲醇和丙酮提取物的抑菌性能良好。将心材的甲醇提取物和无机木材防腐剂酸性铬酸铜(ACC)用于对木材的室内防腐实验,根据腐朽后试样的失重率和扫描电子显微镜(SEM)的照片观测,得出甲醇提取物对白腐菌的防腐作用较好,对褐腐菌的防腐作用很弱,而ACC对两种菌的防腐作用较强。将心材甲醇提取物和ACC用于对斑马鱼的急性毒性试验,测得两者在24、48和72 h的半致死浓度,甲醇提取物分别为16.5、12.7、12.0 mg/L,ACC分别为3.2、2.5、2.0 mg/L;两者的安全质量浓度分别为2.26和0.46 mg/L。

怀槐细胞悬浮培养的结构化动力学模型

为探明怀槐细胞生长、异黄酮染料木素合成与底物消耗间的关系,建立了怀槐细胞悬浮培养的结构化动力学模型。模型预测分析了胞内外的蔗糖代谢、胞内结构组分变化、胞内中间组分的变化、细胞呼吸损失以及胞内外异黄酮染料木素的合成情况。模型各参数灵敏度的分析表明kb1、kb2和kp是最为灵敏的参数,其调节10%时,目标函数变化的最大比例分别达12.8%、4.61%和2.54%,其它参数对目标函数变化的影响均小于0.5%。该模型预测值与实验值具有较好的吻合性。

怀槐愈伤组织形成与异黄酮积累

目的 :考察怀槐愈伤组织形成与总异黄酮积累的关系。方法 :不同培养基诱导怀槐子叶和下胚轴产生愈伤组织 ,紫外分光光度术测定愈伤组织中总异黄酮并含量。结果 :NAA /BA及含 2 ,4 D组合有利子叶愈伤组织的诱导 ;MS ,N6 ,B5培养基适宜子叶形成愈伤组织 ,而SH较适宜下胚轴产生愈伤组织。愈伤组织具有异黄酮合成能力 ,含有NAA激素组合诱导的子叶愈伤组织总异黄酮含量较高 ,而 2 ,4 D /BA组合诱导的下胚轴愈伤组织总异黄酮含量较高 ,高浓度 2 ,4 D /KT组合抑制子叶和下胚轴愈伤组织积累异黄酮。愈伤组织根据发育的形态特征可分为 4种类型 ,以黄色、疏松、颗粒状的Ⅱ型愈伤组织中总异黄酮含量最高。结论 :培养基与激素组合影响愈伤组织的形成及发育形态特征 ,并反映在愈伤组织异黄酮合成差异上 ,获得的黄色、疏松颗粒状愈伤组织为后续的细胞液体悬浮培养及异黄酮合成代谢的调控研究奠定了基础。

怀槐培养细胞生产保肝异黄酮的条件优化

为实现怀槐培养细胞高水平积累保肝成分异黄酮,本文对怀槐细胞培养基组成进行了优化。单因素试验表明,氮源和植物生长调节剂对细胞积累异黄酮具有显著影响,主要的4种因子分别是KNO3、(NH4)2SO4、2,4-D和BA。在4种因子的有效作用浓度范围进行正交试验表明,培养基中不宜含有2,4-D,适合异黄酮积累的最佳浓度组合为1500mg/LKNO3、200mg/L(NH4)2SO4和0.1mg/LBA,细胞中异黄酮积累平均达到了19.3mg/L,比优化前提高了9.3倍。

一种新的药用植物资源——怀槐

本文介绍了怀槐（ＭａａｃｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉｓＲｕｐｒ．ｅｔＭａｘｉｍ．）的形态特征，生态环境，生物学特性，化学成分，木材特性及应用，经济用途，栽培技术；并介绍了怀槐的药用价值。

民间药怀槐的化学成分和药理作用研究进展

目的:对民间药怀槐的化学成分及药理作用作一综述。方法:按照化合物的结构类型对怀槐的化学成分进行分类综述,并且对其主要的生物活性进行总结。结果:怀槐中含有的化学成分主要有黄酮类、生物碱类、茋类等化合物,它们具有抗氧化、抗辐射、抗肿瘤等药理作用。结论:为民间药怀槐的进一步的研究提供了依据。

怀槐种实性状的观测与初步研究

以不同年份、不同植株（产地）的怀槐果实与种子为材料研究种实性状差异,结果表明：同一年份各样品间果实长度、宽度分别变动于4.95.9 cm和0.91.1 cm之间;株间（产地、年份）种子长度、宽度分别变动于6.88.2 mm和3.44.2 mm之间;千粒重平均值为62.92 g,变动于54.1268.95 g之间,差异极显著（F0.01=454.167＊＊）。发芽率和发芽势分别变动于80.7%93.1%和41.7%59.5%之间。怀槐种实性状普遍存在着多样性。

怀槐化学成分研究Ⅰ——醚溶性成分的分离鉴定

从怀槐心材乙醇提取物的乙醚萃取部分分得两个异黄酮类化合物，经理化常数和光谱分析鉴定为芒柄花黄素和染料木素。

怀槐多酚类化合物的积累动态分析

以怀槐茎皮、茎材（茎皮+心材）、心材为材料，无水乙醇浸提4－5d，薄层层析分离后，经紫外分光光度法及显色反应定性分析，结果表明：怀槐各部位中均含有多酚类化合物。用氧化还原滴定法对不同龄级的怀槐茎中多酚类化合物的含量进行动态分析、结果表明：在8月份采集的材料中，多酚类化合物的含量普遍低于6月份的含量（P＜0．05）。

RP-HPLC法同时测定怀槐树皮中4种异黄酮苷的含量

目的建立HPLC同时测定怀槐树皮药材中染料木苷、鸢尾苷、saikoisoflavonoside A和怀槐异黄酮苷含量的方法。方法色谱柱为Diamonsil^(TM)ODS(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-质量分数为0.05%磷酸溶液(体积比为16:84);流速为1.0 mL·min^(-1);检测波长为260 nm;柱温为35℃。结果染料木苷、鸢尾苷、saikoisoflavonoside A和怀槐异黄酮苷的质量浓度分别在0.42～2.09、1.00～5.00、5.12～25.60和1.81～9.04 mg·L^(-1)内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为99.4%、99.9%、100.2%和99.9%,RSD分别为2.1%、3.0%、2.5%和2.7%。结论该方法可用于怀槐树皮中染料木苷、鸢尾苷、saikoisoflavonoside A和怀槐异黄酮苷的含量测定。

怀槐异黄酮水解后苷元的含量测定

目的用HPLC法测定怀槐异黄酮水解后苷元芒柄花黄素、阿夫罗摩辛、黄豆黄素的含量。方法经正交试验确定的最佳提取与水解工艺制备供试品溶液，采用高效液相法同时测定水解后3种异黄酮苷元含量。色谱柱：Diamonsil^TM C18（250mm×4．6rnm，5μm），流动相：乙腈-质量分数为0．05％的磷酸水溶液（体积比为35：65），流速：1．0mL·min^-1，检测波长：260nm，柱温：35℃。结果芒柄花黄索在5．0～25．2mg·L^-1、阿夫罗摩辛在4．2～21．0mg·L^-1、黄豆黄素在4．8～24．0mg·L^-1时峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，相关系数分别为1．0000、0．9996、0．9996。芒柄花黄素、阿夫罗摩辛、黄豆黄素的平均回收率分别为98．43％、97．62％、98．38％，RSD分别为1．04％、0．52％、0．23％。结论HPLC测定方法可用于芒柄花黄素、阿夫罗摩辛、黄豆黄素的含量测定。

怀槐种子性状的测定

从桓仁县八里甸子镇国营林场采种基地的林分内采集怀槐种子,按国家标准进行种子有关性状的测定。结果表明,桓仁产地的怀槐种子的净度为95.0%、发芽率为86.3%、优良度为97%、千粒重为55.6g;与哈尔滨市栽培怀槐的种子相比,发芽率相近,千粒重和净度均高于哈尔滨市的次生种源。

珍贵用材树种怀槐的研究进展

本文就珍贵用材树种怀槐的资源调查、生理特性、种苗繁育、造林技术等方面研究现状进行综述。