中药怀牛膝醇提物有效单体成分的定性定量研究

目的:基于现代检测技术对怀牛膝有效制剂——牛膝醇提物的单体成分进行定性定量分析。方法:将怀牛膝醇提物液体制剂按照检测进样要求分别制备成烘干物和液体物,再应用核磁共振波谱(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)、气相色谱质谱联用(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)、顶空-气相色谱质谱联用(Headspace-Gas Chromatography-Mass Spectrometry,HS-GCMS)、液相色谱质谱联用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)、三重串联四极杆液相质谱联用(Triple Series Quadrupole Liquid Mass Spectrometry,LC-MSMS)等技术对牛膝醇提物的化学成分进行鉴定分析。结果:共检测出23个单体成分,包括糖类1个,类黄酮类1个,黄酮类1个,甾酮类1个,三萜类1个,氨基酸类16个,果酸类2个,其中槲皮素含量为0.0021%,β-蜕皮甾酮含量为0.0210%,齐墩果酸含量为0.00017%,并根据分子片段信息预测出了4’,5,6,7-四甲氧基黄酮成分。结论:本实验为怀牛膝醇提物制剂的临床应用提供了有效单体成分参考,为进一步对其单体物质的“药物-疾病-靶点”进行验证研究和开发应用提供依据。

多指标综合评价优选怀牛膝酒炙法炮制工艺

目的:建立HPLC法同时测定怀牛膝饮片中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮3种牛膝甾酮类成分的含量测定方法,优选怀牛膝酒炙法炮制工艺。方法:采用Kromasil(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水-甲酸(16∶84∶0.1)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm;检测时间40 min。取生牛膝加10%黄酒闷润至黄酒吸尽(约3~4 h),以牛膝中3种牛膝甾酮为指标,单因素考察不同炒制温度(140、160、180℃)及不同炒制时间对牛膝中,优选牛膝酒炙法炮制工艺参数。结果:3种牛膝甾酮均在定量范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收103.5%~104.9%。牛膝酒炙过程中,β-蜕皮甾酮、25S-牛膝甾酮的含量均未见明显变化;25R-牛膝甾酮含量在160℃和180℃炒制后略有下降,3种成分的总含量未见明显变化。综合牛膝中牛膝甾酮类成分含量及生产效率、炮制程度控制,确定优选怀牛膝酒炙工艺为:牛膝加10%黄酒闷润至黄酒吸尽(3~4 h),160℃炒制20~25 min。结论:本研究所建立的含量测定方法稳定,重复性好,准确度高。怀牛膝酒炙过程中在文火条件下(140、180℃)炒制,炒制温度变化对怀牛膝中牛膝甾酮含量影响较小。

怀牛膝多糖的抗氧化性研究

研究怀牛膝多糖的抗氧化活性。采用传统热水浸提法和微波辅助提取法从怀牛膝中提取怀牛膝多糖,经分离纯化获得怀牛膝多糖提取物。分别测定各种多糖提取物和叔丁基对苯二酚对DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基的清除作用,比较和评价怀牛膝多糖的体外抗氧化活性。研究表明,怀牛膝多糖具有一定的抗氧化活性,有望作为天然抗氧剂,为怀牛膝多糖的进一步研究提供一定的理论基础。

基于网络药理学及分子对接探讨怀牛膝治疗高血压的物质基础和作用机制

目的基于网络药理学方法探讨怀牛膝治疗高血压的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选怀牛膝的有效成分及相应的靶蛋白,通过Genecards、OMIM数据库获取高血压的靶点,利用Venn在线软件获取怀牛膝-高血压交集靶点,运用Cytoscape 3.7.2软件构建“化合物-靶点-疾病”网络图。使用String数据库绘制蛋白互作(PPI)网络,利用David数据库和R语言3.6.3中clusterProfiler包对关键靶点进行GO功能富集及KEGG通路分析,通过分子对接技术将怀牛膝主要活性成分与关键靶点进行对接验证。结果共筛选出怀牛膝潜在活性成分16个,有效作用靶点183个。通过Venn图获得76个药物疾病共同靶点,PPI网络发现IL6、AKT1、VEGFA、CCL2、MMP9、NOS3、PTGS2等可能是怀牛膝治疗高血压的关键靶点。GO分析共包含396条富集结果,其中生物过程307条,分子功能54条,细胞组成35条。KEGG通路分析发现60个条目。分子对接筛选得到与靶点有结合潜力的化合物。结论怀牛膝通过“多成分-多靶点-多途径”发挥降压作用,为深入研究其物质基础及作用机制奠定了基础,也为后期实验验证和临床应用提供了相关依据。

怀牛膝多糖的提取及应用

怀牛膝多糖是从怀牛膝中提取、分离、纯化得到的一种小分子水溶性多糖化合物,具有抗肿瘤、增强免疫功能、抗凝血、抗病毒、改善骨质疏松、促进骨骼发育、抗氧化、抗衰老等效用,已成为重要的多糖药物之一,在临床应用和保健品中具有很大的开发潜力。对怀牛膝多糖的提取工艺及应用现状进行了系统深入的研究,并对其未来的进一步研究提出了可行性建议。

怀牛膝中外源性有害物质研究

目的:研究豫产道地药材怀牛膝中二氧化硫、黄曲霉毒素、重金属及有害元素、农药残留等外源性有害物质污染的情况。方法:采用滴定法、高效液相色谱法-光化学衍生、电感耦合等离子体质谱、气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用分析方法分别对怀牛膝中二氧化硫、4种黄曲霉毒素、5种重金属及有害元素、33种禁用农药残留进行定性及定量测定。结果:测定的30批怀牛膝样品中二氧化硫残留量测定值均低于《中国药典》2020版四部通则0212中规定药材及饮片(矿物类除外)的二氧化硫残留量限值;黄曲霉毒素均未检出;重金属及有害元素残留量测定结果为铅0.3~1.0μg/g、镉0.03~0.09μg/g、砷0.1~0.4μg/g、汞含量均小于检出限、铜3~6μg/g,回收率范围为86.8%~107.8%;33种禁用农药残留量结果均低于《中国药典》2020版四部通则0212中规定的定量限,回收率为73.3%~90.9%。结论:本研究所收集怀牛膝样品中外源性有害物质测定结果均低于法定或指导性限值,总体安全性良好。

砂烫怀牛膝与炒制怀牛膝中齐墩果酸的含量比较

[目的 ]比较砂烫法与炒制法两种不同炮制方法对怀牛膝中有效成分齐墩果酸含量的影响 ;为探讨怀牛膝的最佳炮制方法及临床安全合理用药提供依据。 [方法 ]采用高效液相色谱法对怀牛膝 5种不同炮制品中的齐墩果酸进行含量测定。[结果 ]齐墩果酸的含量 :酒烫品 >盐烫品 >酒炙品 >盐炙品 >生品 ,砂烫品比炒制品有明显提高。 [结论

怀牛膝中化合物的分离鉴定

从怀牛膝乙醇提取物中分离出８个化合物，通过理化常数测定和光谱解析并与文献对照，分别鉴定为α－菠甾醇（１），β－谷甾醇（２），大黄酚（３），邻苯二甲酸二正丁酯（４），软脂酸（５），α－菠甾醇葡萄糖甙（６），胡萝卜甙（７）和脱皮甾酮（８），１～７为首次自该植物中分离得到。

不同连作年限怀牛膝根际土壤理化性质及微生物多样性

以不同连作年限怀牛膝根际土壤为材料,采用土壤农化分析技术和磷脂脂肪酸生物标记法,对土壤理化性质以及根际微生物群落结构进行分析。结果表明:怀牛膝连作会使大部分大量元素(全磷、碱解氮、速效磷和速效钾)含量上升,而全氮、全钾的变化并无明显趋势。全量钙、全量镁、全量锰和有效锌的含量也会随着连作年限的增加而增加。研究发现,怀牛膝连作1a的土壤与对照相比,根际土壤微生物群落结构差别不大,但是与连作10a和30a的土壤相比微生物多样性却发生了明显变化。土壤中总PLFAs、细菌、革兰氏阴性菌Gram(-)及真菌含量都随连作年限增加而明显上升,微生物多样性增加,且革兰氏阳性菌Gram(+)/革兰氏阴性菌Gram(-)的比值随着连作年限的增加而下降。此外,土壤中一些嗜热解氢杆菌和真菌等参与土壤物质循环和木质素降解的微生物类群数量明显增加,假单胞菌等有益微生物类群也显著增多,这是牛膝连作促进作用的生物学基础。研究用药用植物怀牛膝证明了植物根际微生物结构和功能多样性对植物连作促进或连作抑制作用的产生与控制的生态学意义。

连作怀牛膝根际土壤微生物区系及酶活性的变化研究

本文从适宜连作的作物研究角度,以连作两年和多年的怀牛膝根际土壤为研究对象,对其微生物区系及酶活性的变化作了对比研究。结果表明,连作两年和多年的怀牛膝根际土壤中细菌总数占绝对优势,其平均占有率分别为62.27%和89.46%;放线菌次之,平均占有率分别为37.59%和10.45%;真菌最少,分别占总菌数的0.15%和0.09%。随着连作年限的增加,细菌数量和比例明显增加;其中亚硝化细菌、反硝化细菌、好气性纤维素分解菌、硫化细菌的数量均明显增加。同时,种植牛膝能够显著增加脲酶、蛋白酶、蔗糖酶的活性,但长期种植会使这3种酶活性呈不同程度减弱,多酚氧化酶活性却明显增强。最后对牛膝耐连作的可能机理作了进一步探讨。

怀牛膝多糖对雏鸡疫苗免疫效果的影响

150羽14日龄蛋公鸡随机均分成3组,用新支二联弱毒苗点眼滴鼻免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的怀牛膝多糖溶液,对照组注射生理盐水,每天注射1次,连续注射3次。分别于免疫后第7、14、21、28、35和42天各组随机抽取8只鸡翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制(HI)抗体效价,于免疫后第10、20、30、40和50天每组随机抽取5只鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞增殖的动态变化,流式细胞仪双染色法检测CD4+、CD8+T淋巴细胞含量,并放血致死称取体重和胸腺、脾脏、法氏囊的质量,计算器官指数。结果表明,怀牛膝多糖高剂量组的HI抗体效价、CD4+/CD8+比值和免疫器官指数都明显高于对照组,并且高剂量怀牛膝多糖可以显著促进T淋巴细胞增殖。提示怀牛膝多糖对鸡新支二联疫苗的免疫效果有明显的增强作用。

怀牛膝水溶性化学成分研究

目的 :研究河南省武陟县怀牛膝水溶性部分的化学成分。方法 :色谱等方法分离纯化 ,理化性质和光谱方法鉴定化学成分。结果 :分离并鉴定了 7个化合物 ,分别为正丁基吡喃果糖苷 (Ⅰ ) ,尿囊素 (Ⅱ ) ,齐墩果酸(Ⅲ ) ,3 O (β D 吡喃葡萄糖醛酸 ) 齐墩果酸 2 8 O (β D 吡喃葡萄糖 ) (Ⅳ ) ,蜕皮甾酮 (Ⅴ ) ,谷氨酸 (Ⅵ ) ,3 O (β D 吡喃葡萄糖 ) 齐墩果酸 2 8 O (β D 吡喃葡萄糖 ) (Ⅶ )。 结论 :Ⅲ～Ⅶ化合物为首次自该植物中分离得到。

怀牛膝的三萜皂苷成分研究

目的对怀牛膝(AchyranthesebidentataBl.)根中三萜皂苷类成分进行研究,阐明其药效物质基础。方法利用硅胶柱、ODS柱、制备液相等进行分离,利用光谱技术和化学常数鉴定化合物的结构。结果分离并鉴定了7个化合物:即齐墩果酸(Ⅰ),竹节参皂苷-1(Ⅱ),齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅲ),齐墩果酸-3-O-β-D-(6′-丁酯)-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅳ),齐墩果酸-3-O-β-D-(6′-甲酯)-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅴ),3-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-齐墩果酸-28-O-(β-D-吡喃葡萄糖)(Ⅵ),chikusetsusaponinⅣaethylester(Ⅶ)。结论化合物Ⅳ,Ⅴ,Ⅶ为首次从该植物中分离得到。

基于偏最小二乘回归分析法怀牛膝药材抗炎镇痛谱效关系

目的基于偏最小二乘回归分析法探讨怀牛膝药材抗炎镇痛的谱效关系。方法该药材的分析采用ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4. 6 mm,5μm);流动相乙腈-水(含0. 3%甲酸)梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1. 0 mL/min;检测波长320 nm。采用偏最小二乘回归分析法分析谱效关系。结果 10批样品指纹图谱中有12个共有峰,相似度均大于0. 973。以二甲苯所致小鼠耳肿胀为药效学指标时,1、7、11号峰为药效峰;以降低醋酸所致毛细血管通透性为药效学指标时,2、7、9、10号峰为药效峰;以降低醋酸诱导小鼠扭体时间为指标时,2、7、9号峰为药效峰;以各给药组给药0. 5 h后热板痛阈延长为指标时,2、7、9号为主要药效峰;以各给药组给药1 h后热板痛阈延长为指标时,2、7号为主要药效峰;以各给药组给药2 h后热板痛阈延长为指标时,7号为主要药效峰。结论苄基葡萄糖苷异构体、β-蜕皮甾酮,三七皂苷R1可能为怀牛膝药材抗炎、镇痛作用可能的物质基础。

川牛膝和怀牛膝的现代药理研究概况

对川牛膝和怀牛膝功效的现代药理研究进行综述。

反相高效液相色谱法测定怀牛膝中羟基促蜕皮甾酮的含量

AIM: To set up an assay method for the determination of ecdysterone (EDS) in the root of Achyranthes bidentata Bl. by RP HPLC. METHODS: The EDS was separated on a Hypersil ODS column (200 mm×4 6 mm ID, 5 μm), using acetonitrile — water (1 0∶5 4) as the mobile phase and detected at 243 nm. The flow rate was 1 0 mL·min -1 . Phenol was used as an internal standard. RESULTS: The calibration curve was in good linearity over the range of 28 04～280 40 μg (γ=0 9997). The average recovery was 95 2%. CONCLUSION: The method is simple, fast, sensitive and is suitable for quantitative analysis of EDS in the root of Achyranthes bidentata Bl.

怀牛膝细胞悬浮培养及多糖含量变化的研究

采用正交实验设计研究基本培养基、碳源、2,4-D、6-BA、CH及接种量对怀牛膝悬浮培养细胞生长和细胞中多糖含量的影响。结果表明,(1)6-BA是影响怀牛膝细胞生长的关键因子,其影响效应依次为6-BA>CH>接种量>基本培养基>2,4-D>碳源,细胞生长的适宜培养基为MS+30 g/L葡萄糖+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L 6-BA+0.5 g/L CH,适宜接种量为30 g/L。(2)碳源是影响细胞中多糖含量的关键因子,其影响效应依次为:碳源>2,4-D>6-BA>CH>接种量>基本培养基,利于细胞中多糖含量提高的适宜培养基为:LS+30 g/L蔗糖+0.5 mg/L 6-BA+0.5 g/L CH,适宜接种量为30 g/L。

高效液相色谱法测定怀牛膝不同炮制品中齐墩果酸的含量

采用高效液相色谱法对怀牛膝不同炮制品中的齐墩果酸进行了含量测定，结果表明：其含量大小依序为盐炙品＞酒蒸品＞酒炙品＞生品。平均回收率１００．２％，ＲＳＤ１．５４％，达到定量分析标准。

怀牛膝多糖抗凝血作用实验研究

为探索怀牛膝的活血机制 ,实验初步研究了怀牛膝多糖的抗凝血作用。发现怀牛膝多糖 ABP能延长小鼠凝血时间(CT)、大鼠血浆凝血酶原时间 (PT)、白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)。提示怀牛膝活血的功效可能与怀牛膝多糖 ABP的抗凝血作用有关。

微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定怀牛膝中重金属元素含量

[目的]建立微波消解-电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）的方法，测定怀牛膝中铅、镉、汞、砷含量。[方法]优化ICP-MS的操作条件，将样品进行微波消解，以^114In作为内标，补偿基体效应，采用ICP-MS法同时测定上述4种元素。[结果]对于所测元素，标准曲线的相关系数r〉0．9995，回收率为96．7％～106．4％，RSD〈11．2％；样品测定结果表明，供试怀牛膝药材重金属超标现象较为严重、[结论]该研究建立的微波消解-ICP-MS法简便、快速、准确、灵敏度高，可为不同产地不同种类的中药材提供重金属含量的测定方法，用于中药材的质量控制、