大鼠心肌细胞急性分离方法

目的 探讨酶法分离大鼠心肌细胞过程中的各种影响因素 ,提高细胞成活率和膜片钳实验成功率。方法 采用Lan gendorff灌流 ,先用无钙液灌流 7～ 8min ,再用含胶原酶P 0 1～ 0 3g/L的酶液灌流 8～ 10min ,剪下心室肌组织 ,KB液中用吸管吹打分散 ,过 15 0 μm筛网 ,放置 6～ 7h后进行膜片钳实验。 结果 在分离细胞过程中 ,注意控制水、酶、温度、pH、O2 等各种影响因素 ,可得到横纹清晰、膜良好、长杆状的心肌细胞。结论 仔细调整和控制细胞分离过程中的影响因素可以保证心肌细胞成活的数量和质量 ,有利于膜片钳实验的顺利进行。

小直径DRG神经元上表达的电压门控离子通道特性

目的建立一种简单易行,满足多种药理学实验需要的大鼠DRG神经元急性分离方法,探讨大鼠DRG神经元的电生理特性。方法对160-220 g SD大鼠DRG神经元进行急性分离,并采用全细胞膜片钳技术记录电压门控离子通道钠电流、钙电流和钾电流。结果急性分离的大鼠DRG神经元呈圆形或椭圆形,胞质均一,折光性好,所表达的钠通道电流、钙电流和钾电流符合其电生理特性。结论运用该方法急性分离细胞操作简单易行,容易获得和辨认,电生理特征明确,适用于疼痛等疾病的电生理研究和相关药物的作用机制考察。