采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞活性及瞬时外向钾电流观察

目的通过观察采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞形态、活性及瞬时外向钾电流,以验证胶原酶Ⅱ循环灌流消化法对心肌细胞急性分离的效果。方法利用自制Langerdorff灌流装置进行主动脉逆行灌流,胶原酶Ⅱ循环灌流消化,分离成年大鼠单个心肌细胞;利用逐步梯度复钙法选出耐钙心肌细胞;在共聚焦显微镜下观察单个心肌细胞的形态、舒缩能力,并用全细胞膜片钳记录心肌细胞瞬时外向钾电流。结果胶原酶Ⅱ循环灌流消化法分离大鼠心肌细胞可获取90%质量良好的细胞,分离出来的心肌细胞边缘锐利、横纹清晰,折光性强,舒缩规律;复钙后仍有60%质量良好的活细胞;用全细胞膜片钳可记录到标准的瞬时外向钾电流。结论采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞活性较好且耐钙,可记录到标准的瞬时外向钾电流。

小鼠海马神经元急性振动分离及电生理活性鉴定

目的:建立一种适用于膜片钳实验的小鼠特定脑区神经元的分离方法。方法:采用机械振动的方法分离小鼠海马CA1区锥体细胞,利用穿孔膜片钳记录细胞自发和诱发的动作电位,观察电压和受体依赖性离子通道电流,评估分离方法效果。结果:分离得到的海马CA1区锥体细胞保留了基本形态特征,具有正常的电生理学特性。结论:急性振动分离法是一种适用于分离小鼠脑区神经元的方法,分离的神经元适用于膜片钳实验。

次声作用对大鼠海马细胞凋亡的影响及其作用规律

目的:探讨8Hz,130dB次声作用对海马细胞凋亡的影响。方法:将雄性SD大鼠48只随机分为6个组,即对照组、次声作用1,7,14,21,28d组,每组8只。采用急性细胞分离技术、荧光染色和流式细胞仪观察大鼠脑海马细胞凋亡率。结果:频率8Hz,声压级130dB次声分别作用2h/d后,次声暴露组与对照组比较,1d组和7d组未见海马细胞凋亡率增高(P>0.05),14d组海马细胞凋亡率显著升高(F=423.05,P<0.01),21d组凋亡细胞稍有回落,但仍显著高于对照组(F=423.05,P<0.01),至28d组与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。结论:8Hz,130dB次声作用一定时间后可导致海马细胞凋亡数量显著增高;8Hz,130dB次声作用对大鼠海马细胞具有损伤效应。随作用时间延长,海马细胞对次声作用产生一定适应性。

癫痫的细胞水平研究及进展

癫痫是一种难治性神经系统疾病,目前医疗水平还不能将该病完全治愈,大多以控制为主。癫痫的成因仍然未能阐明,很多学者针对其不同的成因,采用不同的方法来研究癫痫的发作机制,研究层面也各不相同。技术手段上,膜片钳技术可以更加直接的从功能方面来阐述癫痫电生理方面的特征与性质。此文主要探讨用于膜片钳技术的细胞材料的特点,以及其应用。