MMSA-8、MMSA-1在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的水平及临床意义

目的:分析多发性骨髓瘤相关抗原(MMSA)-8、MMSA-1在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的水平及MMSA-8、MMSA-1在急性髓系白血病中的临床意义。方法:选取2021年1月~2022年12月苏州大学附属第一医院收治的急性髓系白血病30例患者为观察组,再选择同期被诊断为单纯缺铁性贫血的患者25例为对照组,比较两组MMSA-8和MMSA-1 mRNA的水平差异。对观察组患者进行随访1年,分析急性髓系白血病患者1年生存情况,根据随访预后疗效将其分为良好组(n=25)和不良组(n=5)。比较不同预后急性髓系白血病患者MMSA-8和MMSA-1 mRNA的水平差异。运用受试者工作特征(ROC)曲线分析MMSA-8和MMSA-1 mRNA水平预测急性髓系白血病的效能。结果:观察组MMSA-8、MMSA-1 mRNA水平明显高于对照组(P<0.05)。30例急性髓系白血病患者术后均随访1年,预后良好25例,预后不良5例,良好率为83.33%(25/30)。不良组的MMSA-8、MMSA-1 mRNA水平明显高于良好组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,MMSA-8、MMSA-1 mRNA水平与急性髓系白血病患者的曲线下面积为0.880、0.840,95%CI为0.709~0.969、0.661~0.948,预测效能较好。结论:MMSA-8和MMSA-1 mRNA的水平在急性髓系白血病中呈高水平表达,在预测急性髓系白血病的效能较好,临床可借助该两项指标预测急性髓系白血病的病程以及预后。

IL-34对人急性单核细胞白血病细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨过表达IL-34对急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMo L)细胞恶性生物学行为的影响。方法:构建IL-34过表达载体,制备慢病毒载体p CDH-GFP,感染AMo L细胞系THP1和MOLM-13,通过细胞增殖实验、集落形成实验、PI染色检测细胞周期法和Annexin-V/PI法检测IL-34对AMo L细胞的增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响,通过流式细胞术分析过表达IL-34对细胞分化表型的影响,通过裸鼠皮下成瘤模型观察肿瘤大小、质量差异和巨噬细胞募集情况。结果:实验组THP1和MOLM-13细胞IL-34 m RNA表达水平分别比对照组提高近4 000倍和近3 000倍(均P<0.01),表明已成功构建稳定过表达IL-34的AMo L细胞系。体外细胞实验结果显示,过表达IL-34提高THP1和MOLM-13细胞的增殖[72 h:(0.738±0.003)vs(0.646±0.008),(0.290±0.004)vs(0.247±0.004);均P<0.01]和集落形成能力[(127.00±3.37)vs(86.00±4.08)个,(160.70±4.70)vs(116.70±3.93)个;均P<0.01],对细胞的凋亡没有显著影响(均P>0.05);单核-巨噬细胞分化标志物CD11b和CD14表达水平升高,未成熟细胞标志物CD71表达水平减低,表明IL-34促进了AMo L细胞向单核-巨噬细胞方向分化(均P<0.05)。裸鼠体内荷瘤实验可见,过表达IL-34促进瘤组织内巨噬细胞募集(P<0.01)。结论:过表达IL-34提高AMo L细胞的增殖和集落形成能力,促进细胞向单核-巨噬细胞分化,并促进肿瘤内巨噬细胞的募集。

急性白血病细胞CD34的表达与系列相关性抗原表达关系的初步分析

目的探讨CD34在急性白血病细胞的表达,比较CD34与其他系列相关性抗原的关系。方法采用三色流式细胞术对41例急性髓性白血病(acutemyeloidleukemia,AML)和15例急性前体B细胞性淋巴细胞白血病(precursorb-acutelymphoblasticleukemia,PreB-ALL)患者进行表面抗原分析,确定各抗原的表达情况,比较CD34阳性与CD34阴性时,CD34与CD13,MPO,CD10和HLA-DR的共同表达情况。结果CD34在AML和ALL中的抗原表达阳性率分别为70.7%和53.3%。在AML中,51.5%的患者表现为CD34/CD13阳性,61.5%的患者表现为CD34/MPO阳性,50.3%的患者表现为CD34/HLA-DR阳性。仅有10.7%的AML患者表现为CD34/CD10阳性。结论与PreB-ALL相比,CD34在AML中表达阳性率更高,CD34结合CD13,MPO或者HLA-DR可以显示大多数AML细胞特征。对于急性髓性白血病,以CD34设门来选择AML细胞群,有助于诊断预后的评估以及AML微小残留病的检测。

霍奇金淋巴瘤伴急性粒-单核细胞白血病1例并文献复习

目的:讨论霍奇金淋巴瘤伴急性粒-单核细胞白血病(AML-M4Eo)患者2种恶性血液系统疾病是否具有一定的相关性。方法:收集患者临床资料,骨髓细胞学,RT-PCR,FISH,查阅网络最新报道及数据库相关文献。结果:CBFβ/MYH11融合基因(+);染色体核型分析示47,XX,inv(16)(p13q22),+22;FISH inv(16)阳性率75%;免疫分型示HLA-DR、CD33、CD34、CD13、CD117、CD14等细胞相关抗原均为阳性,淋系明显受抑;2者尚未发现有交叉抗原及可能相关基因表达。结论:本例为来源于淋系干细胞和髓系干细胞2个不同克隆的细胞,2者之间并未有特定的联系。患者某种基因片段的不稳定性在外界某些因素如化疗和放疗等的诱导下引起突变,导致白血病的发生。

mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。

lncRNA HCG18调控miR-324-5p/GLI1轴在急性髓系白血病细胞增殖和侵袭中的作用机制

目的长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调对急性髓系白血病(AML)的作用机制尚不清楚。探讨lncRNA HCG18控微小RNA-324-5p(miR-324-5p)/胶质瘤相关基因同源蛋白1(GLI1)轴对AML细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法选择2017年1月-2021年3月在本院血液科住院治疗的AML患者35例作为研究对象(AML组),另选取同期在本院治疗并进行骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤性疾病患者30例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有入选人员骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18与miR-324-5p的表达。体外培养AML细胞HL-60,将细胞分为对照组、si-NC组、lncRNA HCG18 siRNA组、miR-NC组、miR-324-5p mimics组、miR-324-5p mimics+GLI1 NC组、miR-324-5p mimics+GLI1组、lncRNA HCG18 siRNA+NC inhibitor组、lncRNA HCG18 siRNA+miR-324-5p inhibitor组,分别检测检测HL-60细胞中lncRNA HCG18、miR-324-5p表达、HL-60细胞增殖、迁移与侵袭及GLI1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告系统分析miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1的靶向关系。结果与对照组比较,AML组患者骨髓单个核细胞中lncRNA HCG18表达水平(2.85±0.32)较对照组(1.03±0.11)显著升高(P<0.01),而miR-324-5p表达水平(0.47±0.05)较对照组(1.05±0.09)显著降低(P<0.01);沉默lncRNA HCG18表达或过表达miR-324-5p后HL-60细胞增殖、细胞迁移与侵袭数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,miR-324-5p与lncRNA HCG18、GLI1均有靶向关系;抑制miR-324-5p表达可逆转沉默lncRNA HCG18表达对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用;GLI1过表达可逆转过表达miR-324-5p对HL-60细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论lncRNA HCG18在AML细胞中高表达,抑制lncRNA HCG18表达可通过调控miR-324-5p/GLI1轴抑制AML细胞增殖、迁移与侵袭。

MDS—RAEBT与急性单核细胞白血病临床疗效区别及其与端粒酶活性的关系

目的：探讨难治性贫血伴原始细胞增多转变型（MDS-RAEBT）与急性单核细胞白血病（AML-M5）临床疗效的区别及其与端粒酶活性的关系。方法：用常规方法提取MDS-RAEBT和AML-M5初诊病人的单个核细胞（mononuclear cell,MNC)并用TRAP（telomeric repeat amplification protocol,TRAP)法检测两组病人的端粒酶的活性。同时观察以DAE或HAE为基本方案化疗的上述两组病人的临床疗效。结果：MDS-RAEBT组端粒酶的活性表达高于AML-M5组，而完全缓解率（completeremession,CR)却低于AML-M5组。两组之间端粒酶的活性、CR比较均有显著差异。结论：MDS-RAEBT与AML-M5两者之间明显的临床疗效差别可能与端粒酶活性存在一定关系。

急性淋巴细胞白血病病儿血清sCTLA-4测定及意义

目的探讨血清可溶性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(sCTLA-4)在急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童表达水平及其作用。方法应用ELISA法,检测30例急性B淋巴细胞白血病病儿治疗前及完全缓解6个月后血清sCTLA-4水平,以32例健康体检儿童作为对照。结果 ALL病儿治疗前血清sCTLA-4水平低于对照组,差异有显著性(t=5.236,P<0.01);获得完全缓解后sCTLA-4水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。不同临床危险度及性别ALL病儿sCTLA-4水平差异无显著性(P>0.05)。结论 ALL病儿治疗前血清sCTLA-4水平降低,可能参与了儿童白血病的发病。

急性髓系白血病免疫治疗的研究进展与展望

大多数急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者化疗诱导缓解后不可避免地面临复发。异基因造血干细胞移植作为AML最有效的治疗,通过免疫介导的移植物抗白血病效应根除白血病细胞,能有效预防AML复发。移植技术和单倍体移植模式进展使得"人人都能进行造血干细胞移植"。靶向治疗,如基因工程T细胞(嵌合抗原受体T细胞)、单克隆抗体、新型双特异性单抗,能特异性杀伤表达特殊抗原的白血病细胞,而不伤害正常细胞,将成为AML免疫治疗的新策略。研究发现高表达于急性单核细胞白血病细胞的新抗原急性单核细胞白血病相关抗原-34(monocytic leukemia associated antigen-34,MLAA-34)具有抗白血病细胞凋亡作用,且MLAA-34多肽可诱导特异性CTL杀伤活性,具有较强的免疫原性,MLAA-34可作为急性单核细胞白血病免疫治疗新的理想靶抗原。总之,新近进展有价值的免疫治疗白血病相关抗原的鉴定有可能根除化疗后白血病微小残留病变,有望降低AML复发,延长AML患者生存。

急性白血病患者WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因表达的检测及其与疾病分型、疗效的关系

目的:研究急性白血病患者肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、ETS相关基因(ERG)、硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达及其与疾病分型、疗效的关系。方法:将本院收治的90例白血病患者纳入研究的白血病组,将同期体检健康者纳入健康组;进一步根据分型将白血病患者分为ALL组和AML组,根据化疗后疗效将白血病患者分为完全缓解组和复发组。采集患者的外周血,检测WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量。结果:白血病组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AML组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于ALL组,差异有统计学意义(P<0.05);复发组的血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于完全缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因异常高表达与白细胞的发生有关,也与疾病的分型、化疗的效果密切相关。

Wnt/β-catenin信号通路在1,25-二羟基维生素D3诱导人急性早幼粒细胞HL-60单核系分化中的作用

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2-hydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2 D3]诱导人急性早幼粒细胞HL-60向单核系分化中的作用。方法分别采用不同浓度的1,25-(OH)2 D3在不同时间诱导HL-60细胞向单核系分化,确定最佳药物浓度和诱导时间;使用最佳药物浓度0.1μmol/L 1,25-(OH)2 D3诱导HL-60细胞72 h,采用流式细胞技术、细胞化学染色技术检测并观察HL-60细胞的分化方向、分化程度及细胞增殖受抑情况;western blot检测ICAT、TCF1、c-Myc、cyclin D1、β-catenin蛋白的表达水平及pRB蛋白的磷酸化水平;采用免疫荧光法检测β-catenin在细胞内的分布情况。结果0.1μmol/L 1,25-(OH)2 D3于72 h时可有效诱导HL-60细胞向单核系分化;G 0/G 1期细胞增殖明显受抑(t=4.769,P<0.001),且细胞增殖抑制率升高(t=4.84,P<0.001);瑞氏染色结果发现,与对照组比较,成熟单核细胞比例显著升高[(61.2±13.6)%vs(0.8±0.2)%,t=7.49,P=0.001];western blot结果表明,ICAT蛋白表达上调(t=9.917,P<0.01),TCF1、c-Myc和cyclin D1蛋白表达下调(t分别为54.54,54.64和29.24,P均<0.001);此外,pRB蛋白的磷酸化水平亦下调(t=150.6,P<0.001);细胞β-catenin蛋白表达水平无显著性变化(P>0.99),但其在核内的表达水平下降(t=9.77,P=0.01);免疫荧光检测结果显示,β-catenin蛋白呈胞浆聚集状态。结论1,25-(OH)2 D3通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,抑制HL-60细胞增殖并促进其单核系分化。

急性白血病CD11a、CD54的表达及其临床意义

目的:观察与探讨CD11a、CD54在急性白血病中的表达变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测了20例急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia,ALL),27例急性髓性白血病(autemyeloidleukemia,AML)及16例正常对照骨髓单个核细胞CD11a和CD54的表达率。结果:ALL组及AML组CD11a、CD54表达率均显著低于对照组(P<0.01);化疗后ALL及AML完全缓解者(CR)CD11a、CD54表达与对照组无差异(P>0.05),非CR者仍显著低于对照组(P<0.01);ALL及AML髓外浸润组CD11a表达率显著高于无浸润组(P<0.01)。结论:CD11a、CD54在急性白血病中表达异常,可能作为观察疗效、提示预后的指标之一。

人急性单核细胞白血病相关抗原22RNA干扰序列的筛选及鉴定

目的筛选获得急性单核细胞白血病相关抗原22（MLAA-22）最佳RNA干扰序列，为后期MLAA-22功能研究奠定基础。方法采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）克隆MLAA-22蛋白质编码区序列（CDS），将测序正确的MLAA-22CDS插入pEGFP-N1-3FLAG载体，构建真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体，同时构建4个MLAA-22靶向RNA干扰载体，共转染293T细胞后通过细胞荧光强度分析及蛋白印迹法筛选最佳MLAA-22RNA干扰序列。结果成功构建了MIJAA-22真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体，同时构建了4个RNA干扰载体，共转染293T细胞后筛选获得KD2为最佳干扰序列。结论KD2是靶向MLAA-22抗原基因的最佳RNA干扰序列。

急性淋巴细胞白血病血浆miR-34a表达水平与预后的相关性

目的:分析急性淋巴细胞白血病(ALL)血浆微小核糖核酸-34a(miR-34a)表达水平与预后的相关性。方法:回顾性分析2016年12月—2018年12月收治的112例ALL患者资料,作为观察组,同时根据疗效标准分为完全缓解(CR)组40例、部分缓解(PR)组55例和未缓解(NR)组17例,并选取同期进行体检的健康者100例作为对照组,检测血浆miR-34a表达水平,比较不同临床特征及疗效患者的血浆miR-34a水平,并采用Kaplan-Meier法及多因素Cox回归模型分析血浆miR-34a水平与ALL患者预后的相关性。结果:观察组血浆miR-34a水平低于对照组(P<0.05);miR-34a低表达的ALL患者白细胞、乳酸脱氢酶、骨髓母细胞比例及危险度分型高于miR-34a高表达的ALL患者(P<0.05);CR组血浆miR-34a水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),PR组血浆miR-34a水平低于CR组及对照组(P<0.05),NR组血浆miR-34a水平低于其余各组(P<0.05);miR-34a低表达的ALL患者总生存率低于高表达患者(P<0.05);多因素Cox回归分析显示,白细胞、骨髓原始细胞、危险度分型及miR-34a是总生存率的主要危险因素(P<0.05)。结论:ALL患者血浆miR-34a水平呈低表达,且与预后密切相关。

初诊t(8;21)急性髓系白血病中白血病干细胞相关抗原的表达特征及预后意义

目的研究白血病干细胞(LSC)相关抗原CD34、CD38、CD123、CD96和TIM-3在t(8;21)急性髓系白血病(AML)中的表达及预后意义.方法采集2015年10月至2018年4月北京大学人民医院收治的47例初诊t(8;21)AML患者的骨髓标本,采用流式细胞术检测LSC相关膜表面抗原CD34、CD38、CD123、CD96和TIM-3的表达,分析其与复发的关系.结果47例t(8;21)AML患者中,CD34^+CD38^-、CD34^+CD38^-CD123^+、CD34^+CD38^-CD96^+、CD34^+CD38^-TIM-3^+细胞在有核细胞中比例的中位数分别为2.37%、0.24%、0.27%、0.06%;CD34^+CD38^-、CD34^+CD38^-CD123^+、CD34^+CD38^-CD96^+和CD34^+CD38^-TIM-3^+细胞比例与诱导治疗1个疗程缓解率无明显相关性(P值均>0.05);CD34^+CD38^-、CD34^+CD38^-CD123^+和CD34^+CD38^-CD96^+细胞比例高的患者较比例低的患者具有更高的2年累积复发(CIR)率(P值分别为0.049、0.030、0.045),而CD34^+CD38^-TIM-3^+细胞的比例对CIR无明显影响(P>0.05);CD34^+CD38^-细胞比例及微小残留病(MRD)水平是影响患者CIR的独立预后因素(HR=6.9,95%CI 1.3~37.4,P=0.025;HR=11.1,95%CI 1.2~99.2,P=0.031).结论不同的LSC相关抗原在t(8;21)AML中的预后意义不同,初诊骨髓有核细胞中高比例的CD34^+CD38^-以及CD34^+CD38^-CD123^+和CD34^+CD38^-CD96^+细胞可能与t(8;21)AML患者的复发有关.

颈动脉再狭窄犬血管内膜的急性炎症反应

目的研究犬颈动脉再狭窄模型巨噬细胞分子1(macrophagemolecular1,Mac1)、淋巴功能相关抗原1(lymphocytefunctionalantigen1,LFA1)在单核细胞表面的表达及动态变化的意义。方法选10只成年犬在数字减影血管造影(DSA)下,用球囊扩张法建立犬颈动脉再狭窄的动物模型,术后8周取目标颈动脉作病理学检查。使用流式细胞仪检测术前及术后不同时间点单核细胞表面的Mac1和LFA1的表达水平。结果术后8周DSA显示狭窄率为(65±15)%,HE染色显示内膜明显增厚、α肌动蛋白免疫组化染色显示增厚的内膜中,可见大量来源于平滑肌细胞的增殖。单核细胞表面Mac1在术前以及术后各时间点的表达,差异有显著意义(F=9.506,P<0.01);单核细胞表面LFA1在各时间段的表达,经方差分析,差异无显著意义(F=1.553,P>0.05)。结论用犬颈动脉球囊扩张法可以建立可靠有效的颈动脉再狭窄的动物模型,Mac1可能参与了动脉损伤后内膜增生过程中的急性炎症反应。

急性白血病患儿L-4与mL-4的表达

目的探讨急性细胞性白血病患儿血清可溶性细胞毒性细胞相关抗原4（L-4）与外周血细胞表面L-4（mL-4）的表达水平。方法采用ELI法检测30例初发急性细胞白血病患儿治疗前和完全缓解后血清L-4水平，采用流式细胞术测定患儿外周血细胞表面mL-4的表达。比较其治疗前、缓解后与32名健康儿童之间L-4、mL-4水平的差异。结果 （1）初发组血清L-4浓度为（34．27±18．39）ng／L，明显低于正常对照组（193．73±105．37）ng／L，P〈0．01。（2）持续完全缓解6个月后L-4水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）（3）不同临床危险度之间血清L-4水平差异无统计学意义（P〉0．05）；（4）治疗前白血病患儿外周血D4＋、D8＋细胞mL-4表达显著高于正常（P〈0．01）；（5）白血病患儿在达到完全缓解时外周血IM＋、D8＋细胞mL-4的表达显著低于治疗前（P〈0．01），与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论白血病的发病与机体免疫功能的紊乱互为因果，互相影响。