甲基转移酶样蛋白14对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的 探讨过表达和敲低甲基转移酶样蛋白14(METTL14)对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用。方法 取人急性早幼粒白血病细胞NB4进行培养,分为过表达对照组、过表达组、干扰对照组、干扰组,过表达对照组及过表达组分别转染空白质粒和METTL14质粒,干扰对照组和干扰组分别转染si-NC和si-METTL14质粒。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Dot Blotting法检测细胞N-6甲基腺苷(m6A)修饰水平。结果 与过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,NB4细胞m6A修饰水平提高(P均<0.05);与干扰对照组相比,干扰组细胞增殖率降低、细胞凋亡率增加、细胞迁移数、细胞侵袭数降低,NB4细胞m6A修饰水平降低(P均<0.05)。结论 METTL14可促进NB4细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与提高m6A修饰水平有关。

淫羊藿甙对急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的影响

目的 :探讨淫羊藿甙 (ICA)对急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的影响。方法 :采用ICA与全反式维甲酸 (ATRA)对比试验 ,观察ICA对白血病细胞端粒酶活性及增殖分化的影响。结果 :ICA可明显抑制端粒酶活性 ,对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用 ,且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论 :ICA具有抑制急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的作用。

硫化砷对急性早幼粒白血病细胞PNAS-2基因表达的影响

目的探讨硫化砷诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞凋亡的分子机制。方法应用基因表达谱芯片、RTPCR技术,检测硫化砷作用前后NB4细胞、APL原代细胞PNAS-2基因表达的变化。结果基因表达谱芯片杂交显示,硫化砷作用于NB4细胞后,PNAS-2基因表达下调;RTPCR结果发现,NB4细胞在硫化砷作用后PNAS-2表达有明显下调,并呈时间依赖性;APL原代细胞经硫化砷作用后,PNAS-2表达也呈下降趋势。结论硫化砷能够下调PNAS2基因在NB4细胞株和APL原代细胞中的表达,推测PNAS-2基因可能是硫化砷治疗APL的靶基因之一。

硒化壳聚糖诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的研究硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞增殖和凋亡的影响,探讨这种作用与端粒酶活性和survivin蛋白的关系。方法MTT法检测细胞增殖;细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;western blot法检测survivin蛋白含量。结果50～200 mg/L硒化壳聚糖可时间剂量依赖性地抑制NB4细胞增殖,诱导其凋亡,降低端粒酶活性和下调survivin蛋白含量。结论硒化壳聚糖可通过抑制端粒酶活性,下调survivin蛋白含量,诱导细胞凋亡从而抑制体外培养的NB4细胞增殖。

淫羊藿苷对急性早幼粒白血病细胞体内外效应的研究

目的 :探讨淫羊藿苷 (ICA)对急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用。方法 :采用ICA与全反式维甲酸 (ATRA)对比试验 ,观察ICA在体外及小鼠体内对白血病细胞增殖分化的影响。结果 :ICA在体内外对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用 ,且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论

姜黄素对急性早幼粒白血病细胞增殖分化及cofilin表达的影响

目的探讨姜黄素对急性早幼粒白血病HL-60细胞(以下简称"HL-60细胞")增殖、分化及丝切蛋白(cofilin)表达的影响。方法以不同浓度(6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L)姜黄素作用于HL-60细胞,同时设立空白对照组。作用24 h后,采用MTT法检测姜黄素对细胞增殖能力的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期变化,双向电泳与质谱分析检测cofilin蛋白表达。结果不同浓度姜黄素作用24 h后,空白对照组细胞生长抑制率为0,6.25μmol/L组、12.5μmol/L组和25μmol/L组分别为(6.46±0.73)%、(9.79±1.36)%和(79.48±7.99)%,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),且随药物浓度递增,抑制作用逐渐增强,呈浓度依赖性(P<0.05);倒置相差显微镜观察可见典型细胞生长阻滞的形态改变;流式细胞仪检测发现当姜黄素浓度为12.5μmol/L时,细胞阻滞在G2/M期;双向电泳与质谱分析发现姜黄素可下调HL-60细胞cofilin的表达。结论姜黄素可在体外抑制急性早幼粒白血病HL-60细胞增殖,具有浓度依赖性,且在一定血药浓度时可使细胞周期发生阻滞,从而阻滞细胞分化,其作用机制可能与姜黄素下调细胞内cofilin的表达有关。

ASON对急性早幼粒白血病细胞株HL60/VCR多药耐药的逆转作用

目的:探讨反义寡核苷酸(ASON)对耐长春新碱的急性早幼粒白血病细胞(HL60/VCR)多药耐药(mdr1)的逆转效果。方法:以HL60/VCR细胞为模型,合成正、反义寡核苷酸作用于HL60/VCR细胞,采用RT-PCR方法、流式细胞术及药敏试验等观察细胞mdr-1mRNA表达、mdr-1基因产物P-糖蛋白(P-gp)的表达和对药物长春新碱(VCR)的敏感性。结果:反义寡核苷酸处理的细胞mdr-1mRNA表达、P-gp表达较正义组及HL60/VCR细胞显著降低,且可明显提高HL60/VCR细胞株对长春新碱的敏感性。结论:反义寡核苷酸具有逆转HL60/VCR细胞多药耐药的作用。其作用机制可能是抑制mdr1mRNA的转录,使P-gp的表达受到明显抑制,提高对长春新碱的敏感性。

毫米波辐射对急性早幼粒白血病细胞增殖及分化的影响

目的：探讨毫米波（millimeter wave）对急性早幼粒白血病细胞增殖及分化的影响。方法：将体外培养的NB4细胞株接种于培养瓶，24小时后应用波长7．1mm、功率密度分别为1mW／cm2和5mW／cm2的毫米波辐射培养细胞30分钟，连续4天，每天观察细胞形态及数量改变，流式细胞术测定细胞增殖分化相关基因p53、p21、c－myc、c－fos及TGF－β1表达的改变。结果：1mW／cm2和5mW／cm2毫米波辐射能明显抑制NB4细胞增殖，辐射4天后的抑制率分别为35．6％和25．8％，1mW／cm2毫米波可诱导NB4细胞向终末细胞分化，诱导分化率为45．0％，主要为中、晚幼粒细胞；流式细胞术分析发现，经1mW／cm2毫米波辐射后，NB4细胞增殖分化相关基因p53、p21、c－fos表达增加，而c－myc和TGF－β1表达降低。结论：毫米波辐射能抑制体外培养的NB4细胞增殖并诱导其分化，作用机制可能与调控细胞增殖、分化相关基因的表达有关。

人参皂甙单体Rb1对人急性早幼粒白血病细胞系增殖及糖皮质激素受体α表达的影响

目的观察人参皂甙(GS)Rb1对人急性早幼粒白血病细胞(HL60)糖皮质激素受体α(GRα)mRNA及受体蛋白表达的调节作用和对细胞生长的影响。方法以四唑盐比色法(MTT法)观察细胞生长,用蛋白印迹法(Westernblot)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析G-Rb1对细胞的GR蛋白和GRαmRNA的改变。结果G-Rb1能够抑制HL60细胞的生长,呈时间和剂量依赖性;经G-Rb1作用后RT-PCR和Westernblot分析,细胞内GRαmRNA以及GR蛋白表达增加。结论G-Rb1可上调HL60细胞GRαmRNA及GR蛋白的表达并抑制细胞生长。

三氧化二砷诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的机制

目的探讨线粒体在三氧化二砷(As2O3)诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡中的作用并观察线粒体基因组在该过程中的表达变化。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪、细胞生长抑制实验、线粒体膜电位检测、RT-PCR等方法,观察As2O3对NB4细胞的诱导凋亡、生长抑制作用及线粒体基因差异表达变化。结果荧光显微镜观察显示,NB4细胞经As2O3处理48h后呈现出明显的凋亡形态学改变。As2O3在一定的浓度范围内对NB4细胞具有显著的生长抑制效应。流式细胞仪分析发现,NB4细胞经0.5、1、2、3μmol/LAs2O3处理后,其细胞凋亡率分别为5.02%、6.40%、28.40%、33.34%。以0.5、1、2、4、8μmol/LAs2O3分别处理NB4细胞48h后,流式细胞仪检测NB4细胞线粒体膜电位分别下降12.8%、21.6%、66.9%、83.7%、83.8%。对As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中的13个线粒体基因组基因进行RT-PCR分析发现,COX2基因表达下调,其余12个基因表达无明显改变。结论As2O3在体外对NB4细胞具有显著的诱导凋亡及生长抑制效应,其诱导凋亡作用与线粒体膜电位下降密切相关;线粒体相关基因COX2的表达变化参与了As2O3诱导的NB4细胞凋亡过程。

转录因子NF-κB对急性早幼粒白血病细胞程序性死亡的调节

目的 :探讨转录因子NF κB对砷制剂诱导下NB4细胞程序性死亡的调控作用。 方法 :将NB4细胞与不同浓度的三氧化二砷共同孵育 ,在不同时间用流式细胞仪检测胞质内转录因子NF κB的表达 ,同时作细胞周期分析、PI和HO双染以及DNA梯度 ,以鉴定As2 O3的致程序性死亡的作用。 结果 :NB4细胞在 1μmol/L、2 μmol/LAs2 O3的诱导下 ,在 16～ 2 4h的期间内均有明显的程序性死亡现象。NF κB在 6～ 16h期间的对照组和加药组 ( 1μmol/L的As2 O3)均有表达 ,对照组中 12h后表达明显下降 (P <0 .0 5 ) ,加药组较对照组也明显减低 (P <0 .0 5 ) ,但不存在时间依从性。 结论 :As2 O3可诱导早幼粒细胞程序性死亡 ,在这一过程中 ,NF

鲍氏威酸诱导急性早幼粒白血病细胞分化与PML/RARα关系的研究

目的:研究鲍氏威酸(BC4)诱导不同融合基因PML/RARα基因型的急性早幼粒白血病(APL)细胞分化的能力及对APL细胞分化相关基因c-myc的表达影响,探讨鲍氏威酸诱导分化作用的机制。方法:采用RT-PCR检测APL细胞PML/RARα的基因型;运用骨髓干、祖细胞集落培养技术分析各基因型APL细胞分别在生理盐水(NS)对照组,鲍氏威酸(BC4)组,全反式维甲酸(ATRA)组培养体系中增殖与分化能力,测定各组集落与丛的形成率,形态分化率,NBT还原率以及粒细胞吞噬率,培养前后各组APL细胞c-myc表达阳性率。结果:与NS对照比较,BC4和ATRA均使PML-RARα+组APL细胞丛形成率明显增高(P<0.01),而集落形成率无明显变化(P>0.05),3项细胞分化指标增高(0.01<P<0.05),c-myc表达阳性率降低(P<0.05);BC4对PML/RARα+(L型)诱导分化作用强于PML-RARα+(S型)APL,BC4对部分ATRA治疗后复发耐药病例有诱导分化能力。BC4及ATRA对PML/RARα-APL细胞的各项诱导分化指标无明显改变。结论:BC4对APL具有诱导分化作用,下调c-myc基因表达,其诱导分化能力与PML/RARα-基因型有关,并能诱导部分ATRA耐药细胞分化。

APN/CD13对乌苯美司增强全反式维甲酸诱导急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞分化的影响

本研究探讨细胞表面APN/CD13在乌苯美司(bestatin)增强全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞分化过程中的作用。采用四氮唑蓝还原实验检测细胞分化;Western blot检测细胞P38MAPK及p-P38MAPK蛋白表达。结果显示:APN/CD13中和抗体WM-15能够完全阻断乌苯美司对ATRA诱导分化作用的增强效应。WM-15能够部分阻断乌苯美司抑制NB4细胞P38 MAPK磷酸化的作用。100μg/ml乌苯美司呈时间依赖性抑制APL细胞株NB4细胞及MR2细胞的P38MAPK磷酸化水平,100μg/ml乌苯美司对CD13表达低下的K562细胞的P38 MAPK磷酸化水平无明显影响。100μg/ml乌苯美司不能恢复MR2细胞及难治复发患者原代APL细胞对ATRA的敏感性。结论:氨肽酶N/CD13抑制剂乌苯美司可能通过细胞表面APN/CD13分子的介导抑制NB4细胞P38 MAPK的磷酸化,从而增强ATRA诱导NB4细胞分化的作用。

毫米波辐射对人急性早幼粒白血病细胞诱导凋亡的作用

目的 探讨毫米波对人急性早幼粒白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法 以波长7.1mm ,频率 42 .2GHz的毫米波辐射体外培养的NB4 细胞 ,光镜及电镜观察细胞形态改变 ,生长曲线测定细胞生长及增殖情况 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期分布、细胞凋亡指数及凋亡相关基因表达的改变。结果 1mW /cm2 的毫米波辐射 ,每日 1次 ,30min ,可明显抑制NB4 细胞的生长 ,辐射第 3天细胞生长抑制率为 44 .1% ;光镜及电镜下可见凋亡细胞形态 ,FCM示G0 /G1期细胞及凋亡百分比增加 ;p2 1、p5 3、Bax和Fas表达增加 ,c-Myc、Bcl- 2表达下降。 5mW /cm2 的毫米波对细胞增殖及凋亡的影响却不明显 ,虽然 p5 3、Bax和Fas表达增加 ,Bcl- 2表达下降 ,但c-Myc和p2 1的表达却无改变。结论 1mW /cm2 毫米波辐射适当时间后能显著抑制NB4 细胞增殖、诱导细胞凋亡 ;其凋亡诱导机制可能与调控细胞凋亡相关基因的表达有关 ,其中对c -Myc蛋白表达的下调可能具有关键作用。

腺花素通过靶向Prx Ⅲ诱导急性早幼粒白血病细胞分化的研究

目的:探讨腺花素(Adenanthin)靶向PrxⅢ诱导急性早幼粒白血病(acute promyelocyticleukemia,APL)细胞分化。方法:以HL-60细胞株作为研究对象,取对数生长期细胞,分为对照、全反式维甲酸(ATRA)、Adenanthin和ATRA+Adenanthin,共4组。观察各组细胞形态的变化;用NBT还原实验分析细胞分化能力的变化;流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达变化;采用Western blot检测PrxⅢ表达的变化。结果:Adenanthin可诱导HL-60细胞分化;ATRA+Adenanthin组NBT还原阳性率明显高于ATRA组和Adenanthin组(P<0.05);ATRA+Adenanthin组CD11b阳性细胞百分率(43.62%±1.38%)均明显高于Adenanthin组(28.15%±1.78%)、ATRA组(36.72%±1.33%)及空白对照组(7.99%±1.78%)(P<0.05);Adenanthin组PrxⅢ蛋白水平明显高于空白对照组及ATRA组(P<0.05)。结论:腺花素能协同ATRA使HL-60细胞分化成熟,其作用机制可能与调控PrxⅢ的表达有关。

二氯化钴浓度对急性早幼粒白血病细胞系NB4增殖的影响

目的观察体外低氧环境对人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4的细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)基因表达水平的影响。方法体外培养NB4细胞,分别用0、50、100、200、400、800μmol/L二氯化钴(Co Cl2)处理24、48、72 h,收集细胞观察Co Cl2对NB4细胞增殖的影响,CCK-8法检测细胞增殖率;RT-PCR检测HIF-1α基因的表达水平。结果 CCK-8法结果表明,Co Cl2终浓度为0、50、100、200μmol/L时的吸光度(A)值依次升高,400、800μmol/L的A值依次降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);RT-PCR结果显示,Co Cl2终浓度在50、100、200、400、800μmol/L时的HIF-1α表达水平差异均有统计学意义(P均<0.05);显微镜下可观察到低浓度Co Cl2促进细胞增殖,高浓度Co Cl2致使细胞增殖受抑制。结论低浓度的Co Cl2可以促进NB4细胞增殖,HIF-1α基因可能参与该过程。

漆姑草醇提物对人急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用

目的:探讨漆姑草醇提物(HSJ)对人急性早幼粒白血病细胞(NB4)的诱导分化作用。方法:以NB4细胞为研究对象,设HSJ低(30μg/mL)、中(60μg/mL)、高(120μg/mL)剂量组和阴性对照组,共4组;HSJ作用NB4细胞48 h后,采用透射电镜法观察NB4细胞形态;硝基四唑氮(NBT)还原实验检测NB4细胞分化能力;流式细胞术检测NB4细胞周期分布;流式细胞术检测NB4细胞表面分化抗原CD14和CD11b细胞的表达率;实时荧光定量PCR(qPCR)检测c-fos mRNA表达;Western blot检测c-fos蛋白表达。结果:与对照组比较,3个不同剂量HSJ处理组NB4细胞胞核均缩小,胞浆呈空泡状,核形呈肾形或蚕豆形;各HSJ处理组NB4细胞的NBT还原率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HSJ处理组NB4细胞中G2期细胞比例均高于对照组,而S期细胞比例均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HSJ处理组CD14和CD11b阳性细胞表达率均高于对照组(P<0.05);HSJ低剂量组cfos mRNA和蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),HSJ中、高剂量组c-fos mRNA和蛋白表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HSJ可能诱导NB4细胞向成熟粒细胞方向分化。

视黄酸在急性早幼粒白血病细胞内的信号转导通路

视黄酸(RA)、胞浆结合蛋白、核受体、核体辅阻遏物、视黄酸反应元件等构成RA细胞内的信号通路,而融合核受体是RA在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞内信号转导的显著特征。这是我们认识APL发病的分子机制以及RA治疗机制的基础。

乌索酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化的机制

研究在乌索酸诱导的人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化过程中PI3K/Akt信号通路的调控作用。乌索酸作用HL-60细胞96 h后,通过形态学观察,四唑氮兰(NBT)还原实验等研究发现乌索酸能诱导HL-60细胞发生单核分化;Western blotting结果表明乌索酸能激活PI3K/Akt信号通路,上调通路关键蛋白———Thr308和Ser473两个位点磷酸化的Akt,且通过免疫荧光实验检测到通路激活过程中发生Akt的核迁移;另外,为进一步证明分化与PI3K/Akt通路的相关性,采用PI3K特异性抑制剂LY294002,结果发现抑制剂作用后乌索酸的诱导分化作用消失。因此,乌索酸能够诱导HL-60细胞向单核方向分化,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt通路,从而达到分化诱导作用。

4′,5′,7-三羟基异黄酮对NB4人急性早幼粒白血病细胞生长和分化的影响

目的 :研究 4′ ,5′ ,7 三羟基异黄酮 (genistein)对NB4白血病细胞生长和分化的影响 ,揭示其诱导细胞凋亡作用。方法 :分别用NBT还原力分析、DNA电泳分析观察药物诱导分化和凋亡作用 ;Northern杂交分析和质粒DNA断裂分析检测bcl 2基因表达和DNA拓扑异构酶II活性。结果 :Genistein可明显抑制NB4细胞生长 ,并致细胞大量死亡。在浓度高于 40 μmol·L-1时 ,可诱导典型的凋亡形态 ,同时 ,细胞bcl 2基因表达受到抑制。Genistein可促进DNA拓扑异构酶II介导的DNA断裂 ,但诱导NB4细胞分化作用较弱。结论 :Genistein通过诱导细胞凋亡来杀伤和抑制NB4细胞的生长 。