蟾毒它灵诱导急性早幼粒细胞白血病HL⁃60细胞铁死亡的机制研究

目的探究蟾毒它灵(Bufotalin)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞HL‐60铁死亡的作用及机制。方法用不同浓度(0.1、0.5、1.0、2.0、4.0μg·mL^(-1))蟾毒它灵分别作用于APL细胞HL‐60,使用光学显微镜观察细胞的形态学变化;采用CCK‐8法检测细胞的存活率情况;采用Western blot法检测细胞中铁死亡相关蛋白CD71、xCT、FTH1、GPX4的表达水平;采用谷胱甘肽(GSH/GSSG)检测试剂盒检测细胞内GSH和GSSG的含量变化;采用脂质氧化(MDA)检测试剂盒测定细胞内MDA的含量变化。将0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵、0.1μmol·L^(-1)Fer‐1和0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵+0.1μmol·L^(-1)Fer‐1分别作用于HL‐60细胞,使用光学显微镜观察细胞形态学变化,并用Western blot法检测铁死亡相关蛋白的表达水平。结果不同浓度蟾毒它灵处理HL‐60细胞后,细胞形态呈现出哑铃型、梭形等不规则形状,细胞的存活率降低,且呈时间‐剂量依赖关系。与对照组相比,蟾毒它灵可降低铁死亡相关蛋白GPX4、xCT、FTH1的表达水平和总谷胱甘肽的含量(均P<0.01),升高CD71蛋白的表达水平和MDA含量(均P<0.05)。蟾毒它灵与铁死亡抑制剂Fer‐1联合处理HL‐60细胞后,与对照组比较,HL‐60细胞的生长数量和形态学无明显变化,CD71、xCT、FTH1、GPX4蛋白表达水平的差异也无统计学意义(均P>0.05)。结论蟾毒它灵可抑制APL细胞HL‐60的增殖并诱导铁死亡,其可能通过GPX4介导的抗氧化途径和铁代谢途径实现。

柔红霉素对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞及干扰素调节因子1、8、9表达的影响

目的研究柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60细胞中干扰素调节因子1(IRF1)-mRNA、干扰素调节因子8(IRF8)-mRNA、干扰素调节因子9(IRF9)-mRNA表达的影响。方法将HL-60细胞株设为HL-60组、HL-60+DNR组,同时取3例正常人外周血白细胞为NC组。HL-60组为未加药处理组,HL-60+DNR组为小剂量DNR持续作用HL-60细胞10 d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IRF1-mRNA、IRF8-mRNA、IRF9-mRNA转录水平,每组实验重复3次。结果与NC组相比,IRF1-mRNA、IRF8-mRNA转录水平在HL-60组显著下调(P<0.05),而HL-60+DNR组显著上调(P<0.05);与NC组相比,IRF9-mRNA转录水平在HL-60+DNR显著上调(P<0.05),在HL-60组则表现为下调,但无统计学差异(P>0.05)。结论 DNR可上调HL-60细胞中的IRF1、IRF8、IRF9表达水平。APL经DNR治疗后,可能通过上调IRF1、IRF8、IRF9的表达诱导白血病细胞的凋亡,促进其成熟,促进病情的缓解。

梁金菇多糖促人急性早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)细胞凋亡研究

目的 :观察梁金菇多糖对人类早幼粒细胞白血病细胞系 (HL 6 0 )是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究半胱天冬酶 3(Caspase 3)基因在此过程中的作用。方法 :四氮唑蓝比色法 (MTT法 )观察梁金菇多糖对HL 6 0细胞的抑制率 ,应用形态学、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测凋亡相关基因Caspase 3mRNA表达的变化。结果 :梁金菇多糖对HL 6 0细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡 ;在HL 6 0细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Caspase 3转录水平比用药前增强。结论 :梁金菇多糖促HL 6 0细胞凋亡 ,且与Caspase

乌索酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化的机制

研究在乌索酸诱导的人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化过程中PI3K/Akt信号通路的调控作用。乌索酸作用HL-60细胞96 h后,通过形态学观察,四唑氮兰(NBT)还原实验等研究发现乌索酸能诱导HL-60细胞发生单核分化;Western blotting结果表明乌索酸能激活PI3K/Akt信号通路,上调通路关键蛋白———Thr308和Ser473两个位点磷酸化的Akt,且通过免疫荧光实验检测到通路激活过程中发生Akt的核迁移;另外,为进一步证明分化与PI3K/Akt通路的相关性,采用PI3K特异性抑制剂LY294002,结果发现抑制剂作用后乌索酸的诱导分化作用消失。因此,乌索酸能够诱导HL-60细胞向单核方向分化,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt通路,从而达到分化诱导作用。

急性早幼粒白血病细胞ATRA耐药株HL-60R、NB4R的构建及鉴定

目的:构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60R、NB4R,并对其生物学性状进行鉴定。方法:以全反式维甲酸(ATRA)为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果:成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60R、NB4R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论:成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。

全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞分化的机制(英文)

目的 研究全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病HL 6 0细胞分化机制。方法 用流式细胞仪分析维甲酸对HL 6 0细胞周期变化的影响 ,用自制的含 9984个已知基因和EST的高密度基因芯片检测HL 6 0细胞在维甲酸诱导作用下不同时期的基因表达变化。结果 HL 6 0细胞在 1μmol·L- 1 维甲酸持续作用 2 ,4和 6d时 ,流式细胞仪结果显示 4 8%～ 73%细胞阻断在G0 G1 期 ;基因表达谱分析发现 ,黏附分子、组织重建蛋白、转运蛋白、核蛋白体蛋白和涉及氧化酶激活途径的基因表达明显升高。结论 基因表达谱的研究结果表明 ,维甲酸作用HL 6 0细胞与氧化酶激活途径及组织重建蛋白的表达相关联 ,并揭示了一些已知和未知功能的基因在HL 6 0细胞分化与细胞凋亡过程中的作用。

靶向γ-catenin基因的RNAi对人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞增殖的影响

目的探讨靶向γ-连接素(γ-catenin)基因的RNA干扰(RNAi)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞增殖的影响,为白血病的治疗寻找新的靶点。方法针对γ-catenin基因设计dsRNA,转染HL-60细胞,运用RT-PCR检测细胞γ-catenin mRNA表达,Westernblot检测γ-catenin蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性。结果经dsRNA转染后,γ-catenin基因表达及蛋白表达水平下降,HL-60细胞增殖受抑制。结论靶向γ-catenin基因的RNAi可以有效地降低HL-60细胞中γ-catenin基因表达,抑制HL-60细胞增殖,故γ-catenin基因可能作为潜在的白血病治疗靶点。

水杨酸钠对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的影响

目的 研究水杨酸钠对 HL - 6 0细胞的影响 .方法 用 MTT法检测水杨酸钠对 HL- 6 0细胞存活率的影响 ;光镜、电镜观察细胞形态学变化 ;流式细胞术分析 DNA含量 ;An-nexin- V结合分析检测靶细胞磷脂酰丝氨酸外化 .结果 水杨酸钠明显抑制 HL- 6 0细胞生长 ,并呈时间、剂量依赖性 ;5mmol· L- 1 (IC50 )的水杨酸钠作用后 ,HL - 6 0细胞出现典型的凋亡形态特征 ,并检测到亚二倍体峰 ;同时 ,靶细胞磷脂酰丝氨酸外化率显著高于阴性对照组 (0 .2 4 vs 0 .0 3) .结论 水杨酸钠能抑制 HL- 6 0细胞生长并促进其凋亡 .

裸鼠人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)异种移植模型的建立

将HGPRT~-的人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)接种于裸鼠皮下,能形成实体性白血病肉瘤。肿瘤组织经光镜形态学、细胞超微结构、细胞化学、LDH同工酶谱、染色体分析、细胞遗传标记、以及分化性状的检测等多项指标鉴定,均类似于原来体外长期培养的细胞株。移植瘤细胞能在裸鼠体内连续传代,迄今已传至第12代。这个裸鼠人白血病细胞异种移植模型的建立,将为研究人类白血病细胞在体内的增殖、分化以及对抗白血病药物治疗的反应,提供一个有价值的实验系统。

超氧阴离子参与白藜芦醇诱导的人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡

目的:研究超氧阴离子(O2ˉ.)、H2O2、线粒体膜电位(MMP)在白藜芦醇(RSV)诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡中的作用。方法:以RSV(10.0、50.0、100.0μmol/L)分别作用HL-60 6、12、24h后,用流式细胞术检测细胞内O2ˉ.、H2O2及MMP水平;四氮唑蓝凝胶法检测RSV作用HL-6024h后超氧化物歧化酶(SOD)的活性;MTT法检测SOD和RSV共同作用HL-60后的细胞生存率;锥虫蓝细胞计数法检测N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)和RSV共同作用HL-60后的细胞生存率。结果:RSV可使HL-60内O2ˉ.水平升高,H2O2水平、MMP降低,SOD活性无明显变化;SOD和NAC对RSV诱导的HL-60凋亡作用无明显影响。结论:RSV诱导HL-60凋亡机制是RSV引起细胞内O2ˉ.水平升高,MMP降低,从而启动caspases凋亡途径诱发细胞凋亡。

猪胆汁酸钠对人早幼粒白血病细胞系HL-60的增殖抑制及分化诱导作用(英文)

猪胆汁酸钠不仅是人工牛黄的主要成分,而且有广泛的临床用途.近年来,文献报道已经在实验大鼠证实口服少量牛磺胆酸可以克服长期摄入维生素A酸(retinoic acid,RA)或其衍生物所引起的副作用.鉴于RA是髓系白血病细胞分化的生理性诱导剂,临床试用表明口服RA对急性早幼粒白血病有较满意疗效,我们设想胆汁酸与RA联合用药可能对早幼粒白血病的治疗是有意义的.本文报道体外试验结果表明,药用猪汁酸钠明显抑制HL-60细胞增殖(IC_(50) 400μg/ml)并诱导HL-60细胞向终末方向分化.诱导后的HL-60细胞具有嗜中性粒细胞和单核/巨噬细胞的某些形态及细胞化学特征,表现出明显的细胞呼吸爆发功能.细胞周期分析表明猪胆汁酸钠阻断细胞从G_0+G_1期进入S期.小鼠急性中毒试验测定其LD_(50)为:腹腔注射LD_(50)462±SD 35 mg/kg,灌胃LD_(50)>1 g/kg。药用猪胆酸钠体外试验对粒系白血病原代细胞的增殖抑制及分化诱导作用以及体内试验对某些小鼠白血病的作用正在进一步观察.我们认为进一步研究猪胆汁酸钠和RA的联合应用是有意义的.

人早幼粒白血病HL-60细胞蛋白激酶CK2的研究

目的：研究人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞蛋白激酶ＣＫ２的性质。方法：经二次ＤＥ－５２离子交换纤维素柱，一次肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４８亲和层析柱纯化后的ＣＫ２（纯化了１３９倍，回收率为１１．８％），以［γ－３２Ｐ］ＡＴＰ和［γ－３２Ｐ］ＧＴＰ为磷酸供体，以去磷酸化酪蛋白为底物，对其性质进行研究。结果：Ｃａ２＋、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ等第二信使对ＨＬ－６０细胞的ＣＫ２活性无显著影响。肝素抑制ＣＫ２活性，而精胺激活ＣＫ２，肝素与精胺对ＣＫ２的作用在一定浓度范围内呈剂量依赖性。对ＣＫ２的动力学研究测得其米氏常数Ｋｍ（ＧＴＰ）为３４．０μｍｏｌ／Ｌ。结论：ＣＫ２是一种不依赖于Ｃａ２＋、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ等第二信使的蛋白激酶，肝素是其抑制剂，精胺是其激活剂。

全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究

全反式维甲酸(ATRA)诱导APL细胞分化为成熟树突状细胞(dendritic cell,DC),目前国内外鲜见报道。本研究探讨全反式维甲酸与经典细胞因子共同作用诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化为DC的可能性,为研制APL-DC疫苗提供新的方法。对初治APL患者骨髓单个核细胞及HL-60细胞株分别在完全培养液中培养,用经典细胞因子组合(GM-CSF、IL-4、TNF-α)共处理,ATRA只在实验组加用。观测细胞形态,检测DC免疫表型,测定上清液IL-12水平,观察MLR反应及CTL效应。结果表明:实验组所得细胞有较明显树突状突起,有APL遗传学特征,其CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR和CD1d表达及IL-12分泌水平明显增高,并具有明显的MLR反应及CTL效应,但在HL60-DC中,CD1a增加无统计学差异。结论:利用ATRA可以成功诱导APL细胞为成熟功能性DC,其介导的MLR及CTL效应明显。经ATRA组合诱导的树突状细胞CD1d表达明显增高,推测可能参与NKT细胞激活,具体机制需进一步研究。

五种中药注射液对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖的影响

目的:体外研究5种中药注射液(榄香烯注射液、鸦胆子油乳注射液、康莱特注射液、生脉注射液和参附注射液)对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖的影响。方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定药物对细胞增殖的影响。结果:5种中药注射液对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖的抑制强度依次为:榄香烯注射液>鸦胆子油乳注射液>康莱特注射液>生脉注射液>参附注射液。结论:榄香烯注射液和鸦胆子油乳注射液对HL-60细胞系具有显著的抑制作用,具有一定的研究价值。本实验只是从体外的角度观察了5种中药注射液对HL-60细胞增殖的影响,至于其临床应用的具体实际效果,尚有待于进一步的临床观察和验证。

HL-60细胞及其耐药细胞株HL-60/ADM超弱发光的检测

目的:探讨人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60)和其耐药株抗阿霉素人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60/ADM)的超弱发光与耐药性的关系。方法:应用MTT比色法、流式细胞术、细胞生长曲线和免疫组化染色法,检测HL-60细胞、HL-60/ADM细胞对阿霉素(ADM)的敏感性、细胞周期变化及P-糖蛋白(P-gp170)的表达。用IFFM-D型流动式化学发光仪检测HL-60细胞及HL-60/ADM细胞的超弱发光强度。结果:HL-60/ADM细胞对ADM的敏感性明显低于亲本HL-60细胞;HL-60/ADM细胞中G0/G1期的细胞为44·80%±1·97%,G2/M期的细胞为9·90%±0·27%,较其亲本细胞增多,S期的细胞为45·30%±1·93%,较其亲本细胞减少(P<0·05);HL-60/ADM细胞倍增时间是HL-60细胞的1·8倍,P-gp170的表达呈阳性,HL-60细胞呈阴性。在1×10-4mol/L鲁米诺及3mL/L双氧水条件下,密度分别为8×107/L、1×108/L、1·26×108/L及2·73×108/L的HL-60/ADM细胞超弱发光强度低于HL-60细胞(P<0·05)。结论:HL-60/ADM细胞对ADM的敏感性降低,细胞生长延缓,P-gp170表达呈阳性等均提示HL-60/ADM细胞出现了耐药性;且随着HL-60/ADM细胞耐药性的产生其超弱发光强度较其亲本细胞HL-60降低,提示细胞超弱发光强度明显降低可作为细胞耐药性产生的一项指标。

c-myc、bcl-2基因表达和蝌蚪提取液抗早幼粒细胞白血病作用的研究

目的 研究蝌蚪提取液 (T871)抗早幼粒细胞白血病 (APL)的作用及其过程中c myc、bcl 2癌基因表达的变化。方法 利用细胞生长曲线、形态学观察、流式细胞仪、TUNEL法及原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术 ,观察T871抗人APL细胞系 (HL 6 0 )细胞的作用及其过程中c myc、bcl 2癌基因表达的变化。结果 T871能抑制HL 6 0细胞增殖 ,并出现细胞凋亡的形态学特征 ,流式细胞仪及TUNEL法检测结果显示凋亡细胞百分数比对照组显著增加 ,并伴有癌基因c myc、bcl 2mRNA表达的下调。 结论 T871可抑制HL 6 0细胞的增殖同时诱导其凋亡 ,且c myc、bcl

雄黄对NB4和HL-60细胞的形态,PML mRNA及蛋白的表达影响

本研究以NB4 ,HL 60细胞为研究对象 ,采用Wright′s染色法及荧光染色法、免疫荧光技术及RT PCR法 ,探讨雄黄对NB4 ,HL 60细胞的形态、PMLmRNA及蛋白的表达影响。结果发现 :①经雄黄处理后 ,各组均出现细胞凋亡的形态学上改变。②雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解 ,PML蛋白聚积于POD结构 ,随后降解 ;在HL 60细胞中PML蛋白发生相似改变。③雄黄处理后各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。结论指出 ,在雄黄诱导下PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制 ,雄黄能诱导NB4 ,HL 60细胞凋亡 。

全蝎对人白血病HL-60细胞作用的研究

[目的]观察全蝎提取液对急性早幼粒细胞株(HL-60)细胞及相关基因的影响。[方法]全蝎诱导HL-60细胞凋亡的形态学观察及流式细胞仪分析;全蝎对HL-60细胞周期分布的影响;免疫组化法观察全蝎对HL-60细胞凋亡调控基因表达的影响。[结果]全蝎可以明显促进HL-60细胞的程序化死亡,并在一定范围内呈正比关系,最高浓度(10mg/mL)时,凋亡细胞比例明显增加,达21.44%。中、小剂量药物浓度时,细胞凋亡比例略有增加,分别为12.56%和9.47%,对照组仅7.36%。同时可显著提高P53基因的表达水平(与对照组相比,P<0.01)和降低bcl-2基因的表达。[结论]全蝎提取液对HL-60细胞凋亡及相关基因的表达具有益影响。