Wistar大鼠急性肾脏缺血再灌注损伤动物模型的建立及意义

目的:建立一种简单、安全、高成功率的大鼠急性肾脏缺血再灌注损伤动物模型。方法:应用微型动脉夹夹闭Wistar大鼠双侧肾动脉50min后松开,于伤后第3、5、7天取肾,经一系列处理后进行HE染色及免疫组化染色,以观察在肾脏近曲小管上皮细胞中是否出现肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,Kim-1)抗原及该细胞形态学改变。结果:该法造模成功率达93.3%,实验组肾脏近曲小管上皮细胞Kim-1抗原表达率上升,同时该细胞有明显细胞形态学改变(P>0.05)。结论:应用微型动脉夹夹闭Wistar大鼠双侧肾动脉可制备急性肾脏缺血再灌注损伤模型,且成功率高、方法简单。

Wistar大鼠肾脏急性缺血再灌注损伤动物模型的建立

目的观察应用大鼠制备急性缺血-再灌注肾损伤模型的效果。方法应用右肾切除并微型动脉夹夹闭大鼠左侧肾动脉制备急性缺血-再灌注肾损伤模型,其中大鼠分别于术后24 h和48 h后处死,观察肾功能及肾脏病理变化,另一部分大鼠观察其病情及存活情况至14 d。结果各次造模成功率均达85%以上;术后24 h及48 h实验组血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组肾脏外观出现典型"大白肾"表现,镜下出现典型急性肾小管坏死表现,并有较多炎性细胞浸润,肾小管组织学评分与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组在观察期间逐渐出现典型急性肾功能衰竭表现,至14 d末,死亡率达91.7%,而对照组全部正常存活。结论应用右肾切除并微型动脉夹夹闭大鼠左侧肾动脉可制备稳定急性缺血-再灌注肾损伤模型,而且成功率较高,方法简单。

铁死亡在缺血-再灌注急性肾损伤中的研究进展

缺血-再灌注(I/R)是急性肾损伤(AKI)的常见原因,常见于肾移植、休克、创伤、泌尿外科和心血管外科手术,对此尚无有效的治疗方法。铁死亡是一种新发现的调节性细胞死亡模式,其特征是铁依赖性脂质过氧化物的致命积累。已有大量研究表明,铁死亡参与I/R AKI的发生发展,其病理生理机制及治疗靶点逐渐成为研究的热点。本文概述了近年来关于I/R AKI中铁死亡的相关研究进展,旨在为I/R AKI的预防及治疗提供新的思路和策略。

缺血后适应对急性ST段抬高型心肌梗死患者PCI介入术后缺血-再灌注损伤的预后影响

目的:观察缺血后适应(IPoC)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后缺血-再灌注损伤(IRI)预后影响。方法:将90例STMEI患者按照不同治疗方式分为对照组(常规方法行PCI)和观察组(再灌注开始1 min内行IPoC),每组各45例。比较两组患者ST段回落情况,心肌再灌注评价,心肌坏死标志物,心功能指标,外周血氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、内皮素1(ET-1)和主要心脏不良事件。结果:观察组患者术后6 h完全回落高于术后2 h(P<0.05);术后心肌再灌注评价指标CTFC和WMSI,心肌坏死标志物c-TnI、CK和CK-MB,外周血NT-proBNP、hs-CRP和ET-1水平均低于对照组(P<0.05);主要心脏不良事件发生率低于对照组(P<0.05)。结论:IPoC能有效改善STMEI患者PCI介入后IRI,能降低心肌酶和NT-proBNP、hs-CRP和ET-1水平,改善预后,值得临床应用推广。

纤维蛋白原Bβ15-42肽在细胞水平对缺血再灌注急性肾损伤线粒体自噬的影响

目的探讨纤维蛋白原Bβ15-42肽(fibrin-derived peptide Bβ15-42,FgBβ15-42)在细胞水平对缺血再灌注急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)线粒体自噬的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞,随机分为5组,即正常对照组(Control组)、缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型组(H/R组)、H/R模型+9μmol/L FgBβ15-42肽组(Fg组)、H/R模型+20μmol/L氯喹组(CQ组)、H/R模型+9μmol/L FgBβ15-42肽+20μmol/L氯喹组(Fg+CQ组)。Control组:将同质化细胞置于完全培养基中,在有氧(5%CO_(2),21%O_(2))条件下培养28h。H/R组:细胞用无糖、无血清DMEM/F12培养基在缺氧(5%CO_(2),1%O_(2)和94%N 2)条件下培养24h,再更换含血清的DMEM/F12培养基置于有氧(5%CO_(2),21%O_(2))环境中4h。Fg组:在复氧时加入FgBβ15-42肽9μmol/L进行干预。CQ组:在进行同质化处理时加入氯喹进行预处理(20μmol/L),后序步骤同H/R组。Fg+CQ组:按照上述CQ组及FgBβ15-42组在不同时间段的加药顺序、剂量,及H/R组的造模时间进行干预。干预结束后采用CCK-8法检测HK2细胞活力;电子显微镜观察线粒体形态、线粒体自噬体结构及数量;Western blot法检测自噬相关蛋白p62、LC3的表达水平。结果与Control组比较,H/R组细胞的存活率下降(P<0.01);线粒体损伤明显,出现了肿胀、棘断裂等,且线粒体自噬体的数目增多;自噬标志性蛋白LC-3Ⅱ/Ⅰ表达上调(P<0.05),自噬底物蛋白p62表达下调(P<0.01)。与H/R组比较,Fg组、CQ组、Fg+CQ组细胞的存活率回升(P<0.01),线粒体自噬体减少,LC-3Ⅱ/Ⅰ表达下调(P<0.01),p62表达上调(P<0.05),细胞自噬被抑制。结论FgBβ15-42肽干预后可降低H/R-AKI细胞中自噬及线粒体自噬水平,对HK2细胞H/R损伤有保护作用。

小鼠急性缺血-再灌注肾损伤模型的建立及体会

目的观察应用小鼠制备急性缺血-再灌注性肾损伤模型的效果。方法应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性缺血-再灌注肾损伤模型,其中两组分别于术后24h和48h后处死观察肾功能及肾脏病理变化,另一组观察其病情及存活情况14天。结果各次造模成功率均达85%以上;术后24h及48h实验组血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组肾脏外观出现典型"大白肾"表现,镜下出现典型急性肾小管坏死表现,并有较多炎症细胞浸润,肾小管组织学评分与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.01);实验组在观察期间逐渐出现典型急肾衰竭表现,至14天末,死亡率达91.7%,而对照组全部正常存活。结论应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉可制备稳定急性缺血-再灌注肾损伤模型,而且成功率较高。

人参山楂饮对大鼠急性心肌缺血-再灌注损伤模型影响的研究

目的观察人参山楂饮对大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型的影响。方法实验大鼠随机分为假手术组、模型组、对照组、治疗组,比较各组缺血再灌注6h后血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素(ET)的变化。结果缺血-再灌注6h后与模型组比较,予人参山楂饮的治疗组和予卡维地络的对照组NO均有提高,MDA、AngⅡ、ET均下降,但治疗组优于对照组。结论人参山楂饮有保护血管内皮缺血-再灌注损伤、抗缺血-再灌注时氧自由基介导的脂质过氧化作用,提示人参山楂饮对心肌缺血-再灌注损伤有多重保护作用。

小鼠急性缺血-再灌注肾损伤模型的建立及体会

目的观察应用小鼠制备急性缺血-再灌注性肾损伤模型的效果。方法应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性缺血-再灌注肾损伤模型,其中两组分别于术后24h和48h后处死观察肾功能及肾脏病理变化,另一组观察其病情及存活情况14天。结果各次造模成功率均达85%以上;术后24h及48h实验组血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组肾脏外观出现典型“大白肾”表现,镜下出现典型急性肾小管坏死表现,并有较多炎症细胞浸润,肾小管组织学评分与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.01);实验组在观察期间逐渐出现典型急肾衰竭表现,至14天末,死亡率达91.7%,而对照组全部正常存活。结论应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉可制备稳定急性缺血-再灌注肾损伤模型,而且成功率较高。

麝香、冰片对大鼠脑缺血-再灌注急性期和恢复早期炎性损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨麝香、冰片对脑缺血-再灌注损伤大鼠急性期及恢复早期的保护作用及机制。方法:将180只大鼠随机分为假手术组,模型组,麝香高、低剂量组(50、25 mg/kg),冰片高、低剂量组(50、25 mg/kg),醒脑静10m L/kg组。各组大鼠灌胃给药4 d,线栓法复制脑缺血-再灌注模型,观察麝香、冰片对脑缺血-再灌注炎性损伤急性期及恢复早期神经功能缺损评分、脑组织匀浆环氧酶(COX-2)和5脂氧酶(5-LOX)活性变化及海马组织Cys LT2蛋白及mRNA表达的影响。结果:麝香、冰片能显著提高脑缺血-再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分,改善其脑组织病理形态,降低脑内COX-2和5-LOX的活性,抑制脑海马组织Cys LT2蛋白表达。结论:麝香、冰片能对抗大鼠脑缺血-再灌注急性期炎性损伤,其机制可能与抑制脑内COX-2与5-LOX的活性有关。

乌司他丁对肝缺血-再灌注后急性肺损伤的保护作用

目的 :观察肝缺血再灌注后急性肺损伤的发病机制及乌司他丁的干预作用。方法 :建立大鼠部分肝缺血再灌注模型 ,随机分为手术对照组 (对照组 ) ,肝缺血 90 min组 (缺血组 ) ,肝缺血 90 m in、再灌注 12 0 m in组 (再灌注组 ) ,缺血前 30 m in静脉注射乌司他丁 +肝缺血 90 min、再灌注 12 0 min组 (乌司他丁组 )。检测支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中总蛋白含量、肺组织干 /湿质量比 (D/ W)、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)含量及血浆中丙二醛 (MDA)含量。结果 :1与对照组比较 ,肝缺血再灌注损伤后各组大鼠 BAL F中总蛋白含量均明显升高(P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,再灌注组总蛋白升高更为明显 ,乌司他丁能干预其升高 ;肺 D/ W则均明显降低(P均 <0 .0 1) ,乌司他丁能干预其降低程度。 2随着肝缺血再灌注的发生 ,肺组织 MPO与血浆 MDA含量均逐渐升高 ,以再灌注组升高更明显 (P均 <0 .0 1) ,乌司他丁能干预 MDA和 MPO的升高。结论 :肝缺血再灌注后急性肺损伤的主要病理生理过程是氧化抗氧化系统的失衡 ,中性粒细胞是肺组织急性损伤的主要炎性细胞 ;乌司他丁通过抑制中性粒细胞在肺组织中的渗出及其抗氧化作用显著减轻急性肺损伤的程度。

黏附因子-1、IL-18在大鼠左心缺血再灌注诱导的急性肺损伤中的作用

目的:探讨白介素-18、黏附因子-1在左心缺血再灌注肺损伤中的作用及对呼吸功能的影响.方法:60只SD大鼠随机均分为实验组和对照组,实验组复制左心缺血再灌注肺损伤模型并与BL-420生物信号采集分析系统相联,对照组不做左冠状动脉的前降支结扎其余操作同实验组.比较缺血30min、再灌注30min、再灌注60min3个时间点两组大鼠肺组织白介素-18、黏附因子-1表达情况、外周血和支气管肺泡灌洗液中白介素-18水平、动脉血氧分压及呼吸曲线进行比较.结果:各时间点实验组大鼠肺组织白介素-18、黏附因子-1表达高于对照组;外周血和支气管肺泡灌洗液中白介素-18水平高于对照组;PaO2低于对照组;呼吸曲线的幅度、强度、持续时间均低于对照组,上述差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:白介素-18激活黏附因子-1释放增多,吸引白细胞在肺循环发生黏附聚集释放反应,引起炎性细胞因子的进一步释放,导致肺炎症反应失衡,引起急性炎症损伤,致呼吸功能下降.

血必净对大鼠肝缺血-再灌注后急性肺损伤的保护作用

目的观察肝脏缺血-再灌注后急性肺损伤的发病机制及血必净对其的干预作用。方法将健康雄性Wistar大鼠90只随机分3组:假手术组(SOG组)30只,缺血再灌注组(I/R组)30只,血必净组(XBJ组)组30只。XBJ组术前3d经尾静脉注射血必净注射液5ml·kg-1·d-1。于再灌注6h、12h、24h各组分别随机选取10只大鼠进行标本检测:观察大鼠肺脏组织病理切片;取新鲜肺组织测定湿/干重比(W/D)、肺组织髓过氧化物酶(MPO)含量,取动脉血检测血气分析(PaO2)。结果XBJ组较I/R组在相同时相点的肺脏病理改变较轻,MPO含量显著降低(P<0.01);W/D显著降低(P<0.01);PaO2升高(P<0.05)。结论血必净注射液对肝脏缺血-再灌注后急性肺损伤具有保护作用,该作用与抑制中性粒细胞在肺内集聚、减少氧自由基的产生有关。

左心缺血再灌注大鼠急性肺损伤组织中ICAM-1与TNF-α的表达

目的:探讨黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在左心缺血再灌注诱导的大鼠急性肺损伤中的作用及对呼吸功能的影响。方法:60只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组30只;实验组通过结扎左冠状动脉的前降支及放松结扎线再通复制左心缺血再灌注肺损伤模型,对照组只穿线,不结扎血管。于缺血30min、再灌注30min及再灌注60min(每个时间点10只),经BL-420生物信号采集处理系统记录2组大鼠呼吸曲线,采用酶联免疫法检测大鼠外周血和支气管肺泡灌洗液中TNF-α水平,采用免疫组化SP法检测大鼠肺组织TNF-α、ICAM-1的表达。结果:各时间点实验组大鼠呼吸曲线的幅度、强度及持续时间均低于对照组(F组间=422.869,P<0.001),外周血和支气管肺泡灌洗液中TNF-α水平高于对照组(F组间=51.240和202.084,P<0.001),肺组织TNF-α、ICAM-1的表达高于对照组(P<0.001)。3个时间点实验组大鼠肺组织ICAM-1和TNF-α的表达均呈正相关(rS=0.362,0.741和0.803,P均<0.05)。结论:左心缺血再灌注后TNF-α可能通过诱导内皮细胞高表达ICAM-1,引起炎症反应失衡,致肺急性炎症损伤。

右美托咪定对大鼠肢体缺血-再灌注所致急性肺损伤的影响

目的探讨右美托咪定对大鼠肢体缺血-再灌注所致急性肺损伤的影响及相关机制。方法雄性清洁级SD大鼠120只,随机分为三组:对照组、缺血-再灌注组、右美托咪定组。在术前、肢体缺血-再灌注后0、1、3、6h测定大鼠PaO2、肺组织湿干比重(W/D)、血清SOD活性、MDA浓度及TNF-α水平,并观察肺组织病理学变化。结果与对照组比较,缺血-再灌注组再灌注后0、1、3、6h肺组织W/D和TNF-α水平明显升高(P<0.05),PaO2明显降低(P<0.05);再灌注1、3、6 h MDA浓度明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与缺血-再灌注组比较,右美托咪定组再灌注后6h肺组织W/D和TNF-α明显下降、PaO2水平明显升高(P<0.05),再灌注后3、6 h SOD活性明显升高(P<0.05),再灌注后1、3、6hMDA浓度明显降低(P<0.05)。结论右美托咪定可以减轻大鼠肢体缺血-再灌注所致的急性肺损伤,其机制与减轻炎性反应和抗氧化应激有关。

姜黄素预处理对缺血-再灌注所致急性肾损伤大鼠肾组织血管内皮修复和内皮祖细胞归巢的影响

目的探讨姜黄素预处理对缺血-再灌注所致急性肾损伤大鼠肾组织血管内皮修复和内皮祖细胞(EPC)归巢的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)模型组、阴性对照组、姜黄素干预组,每组6只。造模前,给予姜黄素干预组、阴性对照组分别腹腔注射姜黄素、二甲基亚砜预处理7 d。肾脏IRI模型组、阴性对照组及姜黄素干预组均利用夹闭肾动脉后再开放的方法构建肾脏IRI模型,造模后24 h处死各组大鼠。采用阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色法观察各组大鼠肾小管损伤情况;采用CD133/CD34免疫荧光双染法观察各组大鼠EPC归巢情况;采用免疫组化染色法观察各组大鼠肾小管周围毛细血管内皮细胞CD31的表达。结果肾脏IRI模型组、阴性对照组的扩张肾小管数量、肾组织EPC数量较正常对照组增多,肾小管周围CD31表达较正常对照组减少(均P<0.05)。姜黄素干预组扩张肾小管数量较肾脏IRI模型组和阴性对照组减少,肾组织EPC数量、肾小管周围CD31表达较肾脏IRI模型组、阴性对照组增加(均P<0.05)。结论姜黄素预处理可促进EPC向肾脏归巢,以修复毛细血管周围损伤的内皮细胞,进而减轻肾小管损伤,从而缓解缺血-再灌注诱导的急性肾损伤。

白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的观察白藜芦醇对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)变化规律的影响,探讨白藜芦醇对SAP大鼠肠黏膜缺血-再灌注损伤保护作用的可能机理。方法将54只大鼠随机分为假手术组、SAP组及白藜芦醇治疗组3组,每组18只。应用逆行胰胆管穿刺注射牛磺胆酸钠制备大鼠SAP模型,白藜芦醇溶液于制模成功后5 min通过阴茎背静脉注射,于制模成功后3、6及12 h时分别取6只大鼠剖杀,观察各组大鼠回肠黏膜组织中SOD、MDA、ICAM-1、VCAM-1和组织学变化以及白藜芦醇对其的影响。结果与假手术组比较,SAP组小肠组织中SOD活性在各时相均降低(P<0.05),MDA水平均升高(P<0.05),ICAM-1和VCAM-1的表达量均明显升高(P<0.05);与SAP组比较,白藜芦醇治疗组中白藜芦醇可明显升高SOD活性(P<0.05),降低MDA水平(P<0.05),使ICAM-1和VCAM-1的表达量均明显降低(P<0.05),同时白藜芦醇可减轻其组织病理损害。结论氧自由基参与了SAP大鼠肠黏膜缺血-再灌注损伤的病理生理过程,白藜芦醇可提高SAP大鼠肠黏膜组织中SOD活性、降低MDA水平,抑制脂质过氧化反应,下调肠组织中ICAM-1和VCAM-1的表达量,从而在SAP时减少对肠黏膜上皮细胞的损伤,对肠黏膜缺血-再灌注损伤起保护作用。

舒芬太尼后处理对子宫缺血-再灌注大鼠急性肺损伤的影响

目的研究舒芬太尼后处理对子宫缺血-再灌注(IR)大鼠急性肺损伤的影响。方法成年雌性SD大鼠45只,随机分为三组:对照组(C组)、IR组和舒芬太尼后处理组(SPC组),每组15只。IR组、SPC组建立子宫缺血45 min再灌注2 h模型,SPC组给予舒芬太尼后处理。检测大鼠处理后子宫、血清及肺组织中TNF-α、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及肺湿干重比(W/D)、肺通透性指数(LPI)。结果 IR组、SPC组子宫、血浆及肺脏中TNF-α、MDA含量、W/D、LPI明显高于C组(P<0.05);SPC组TNF-α、MDA含量、W/D、LPI明显低于IR组(P<0.05);IR组、SPC组子宫、血浆以及肺脏中SOD活性明显低于C组(P<0.05);SPC组SOD活性明显高于IR组(P<0.05)。结论舒芬太尼后处理能减轻子宫缺血-再灌注大鼠急性肺损伤,可能与减少氧自由基和炎症因子的产生,降低肺通透性,减轻肺水肿,从而减轻子宫缺血-再灌注大鼠引发的急性肺损伤有关。

Notch-1/NICD信号在普罗布考保护大鼠急性脑缺血后再灌注损伤中的作用

目的：研究普罗布考对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后大脑的保护作用及其与Notch-1/Notch胞内域（NICD）蛋白信号通路的关系。方法：SD大鼠随机分为假手术组、缺血组及普罗布考组。采用大脑中动脉闭塞（MCAO）法建立局灶性脑缺血再灌注模型，经普罗布考腹腔注射处理后，采用转角试验判断神经功能，2,3,5氯化三苯四氮唑（TTC）染色法测量脑梗死体积，干湿法测定脑组织含水量，免疫印迹检测Notch-1和NICD蛋白的表达，免疫酶联反应检测血清中炎症因子白介素8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果：普罗布考可改善急性脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能，减轻脑水肿；与缺血组相比，普罗布考治疗组Notch-1/NICD蛋白表达降低，IL-8和TNF-α分泌也相应减少。结论：普罗布考可激活Notch-1/NICD信号通路，进而调节IL-8和TNF-α的表达，发挥对急性脑缺血再灌注损伤脑的保护作用。