龙胆苦苷调控PPAR-α改善胆汁淤积性肝损伤的药效机制研究

目的 探讨龙胆苦苷通过过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)通路对胆汁淤积性肝损伤的影响及作用机制。方法 (1)48只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组、模型组[α-萘基异硫氰酸酯(ANIT),灌胃]、熊去氧胆酸组(200 mg/kg,灌胃)以及龙胆苦苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg,灌胃),每组8只。各组小鼠连续给予相应干预措施7 d。第5天给药6 h后,正常组灌胃给予空白橄榄油溶液,其余各组小鼠灌胃给予ANIT诱导胆汁淤积性肝损伤。给药结束后,观察小鼠体质量变化;记录肝脏质量,计算肝脏指数;检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBil)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测肝组织PPAR-α、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;Western blot法检测小鼠肝脏中PPAR-α、细胞色素P4503A4(CYP3A4)、肉碱棕榈酰转移酶2(CPT2)以及组成型雄甾烷受体(CAR)蛋白表达。(2)采用L02人肝细胞进行体外实验,建立牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDC)胆汁淤积性肝细胞损伤模型,采用10、50、100μmol/L龙胆苦苷进行干预。测定细胞上清液中AST、ALT、TBA的含量;RT-qPCR法验证肝细胞中PPAR-α、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA表达;Western blot法检测肝细胞中PPAR-α、CYP3A4、CPT2以及CAR蛋白表达。(3)另在TCDC胆汁淤积性肝细胞损伤模型基础上,采用PPAR-α激动剂(非诺贝特)和抑制剂(GW6471)进行PPAR-α拮抗实验。Western blot法检测肝细胞中PPAR-α、CYP3A4、CPT2、CAR蛋白表达。结果 (1)龙胆苦苷可下调胆汁淤积性肝损伤小鼠血清中AST、ALT、TBA、TBil含量(P<0.05),并改善小鼠肝脏病变情况。(2)龙胆苦苷可上调胆汁淤积性肝损伤模型小鼠肝组织和模型细胞中PPAR-α mRNA水平,降低促炎细胞因子NF-κB、TNF-α、IL-1β的mRNA水平。(3)龙胆苦苷能上调胆汁淤积性肝损伤小鼠肝组织PPAR-α、CYP3A4、CPT2蛋白水平,降低CAR蛋白水平。(4)PPAR-α抑制剂可降低龙胆苦苷对胆汁淤积性肝损伤细胞中PPAR-α的上调作用,并进一步影响PPAR-α对于CYP3A4、CPT2、CAR蛋白的调控作用。结论 龙胆苦苷可通过上调PPAR-α蛋白调控胆汁酸相关蛋白CYP3A4、CPT2、CAR表达,进而降低NF-κB、TNF-α、IL-1β等促炎细胞因子水平,从而发挥抗胆汁淤积性肝损伤的作用。

基于16S rRNA基因测序技术分析急性肝内胆汁淤积大鼠的肠道菌群

目的 探讨ANIT诱导的大鼠急性肝内胆汁淤积(acute intrahepatic cholestasis,AIC)与肠道菌群的关系。方法 以SPF级的SD大鼠为实验对象,随机分为正常对照组、模型组,每组24只,依据取材时间不同又将各组随机分为24 h、48 h、72 h 3个亚组,每组8只。模型组通过一次性予2%ANIT按100 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃造模诱发AIC模型,正常对照组予等容积色拉油灌胃。通过高通量测序法对肠道粪便细菌16S rRNA的V_(3)~V_(4)区进行基因测序及生物信息学分析。结果 AIC造模后,随着时间增加,α多样性指数逐步升高,造模72 h组相比造模24 h组,Shannon指数有显著性差异;β多样性发现,利用基于加权Unifrac距离PcoA分析或NMDS分析均显示:正常对照组、造模24 h组和造模48 h组的肠道菌群显示比较明显的聚集效应;在门水平上,厚壁菌门(Firmicutes)丰度在造模48 h后显著下降,变形菌门(Proteobacteria)的丰度显著上升,拟杆菌门(Bacteroidetes)的丰度显著上升;LEfSe对组间差异显著的物种分析结果显示,LDA值大于4的微生物类群有35个。结论 模型组干预后大鼠肠道菌群结构和多样性均发生显著变化。

消黄去疸汤对胆汁淤积性肝损伤大鼠肠物理屏障及Th17/Treg平衡的影响

目的 探讨消黄去疸汤对胆汁淤积性肝损伤大鼠肠黏膜屏障及免疫的作用机制。方法 48只大鼠随机分为空白组、模型组(0.075 g/kg α-萘异硫氰酸酯)、熊去氧胆酸组(0.06 g/kg)和消黄去疸汤低、中、高剂量组(5.62、11.23、22.47 g/kg),每组8只。HE染色观察肝组织病理变化,比色法检测血清ALT、AST、TBIL、TBA水平,RT-qPCR与Western blot法检测肝组织RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达,以及肠组织ZO-1、occludin、claudin-3、Jam-3 mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测脾脏Th17、Treg细胞百分率。结果 模型组大鼠肝细胞形态脂质样沉积,脂肪样变性,汇管区周围有结缔组织增生,伴随炎性细胞浸润;各给药组均能改善肝组织病理损伤,且高剂量组更为明显。与空白组比较,模型组血清ALT、AST、TBIL、TBA水平升高(P<0.01),肝组织RORγt mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),肠组织ZO-1、occludin、claudin-3、Jam-3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),脾脏Th17细胞百分率升高(P<0.01),Treg细胞百分率降低(P<0.01);与模型组比较,熊去氧胆酸组和消黄去疸汤各剂量组血清ALT、AST、TBIL、TBA水平降低(P<0.01),肝组织RORγt mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),肠组织ZO-1、occludin、claudin-3、Jam-3 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),脾脏Th17细胞百分率降低(P<0.01),Treg细胞百分率升高(P<0.01)。结论 消黄去疸汤可有效缓解胆汁淤积性肝损伤,其机制可能与改善肠道黏膜屏障及调节Th17/Treg免疫平衡有关。

黄芪多糖对急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型的影响

探究黄芪多糖对急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate transaminase,AST)、肿瘤坏死因子a(tumornecrosisfactor-a,TNF-a)、白细胞介素6(interleukin6,IL-6)水平的影响。将雄性健康SD大鼠54只随机分为空白组、实验组(模型组、熊去氧胆酸组及黄芪多糖低、中、高剂量组),每组9只。除空白组、模型组外,其余四组大鼠均给予熊去氧胆酸溶液及黄芪多糖低、中、高(0.2、0.4、0.8 g/kg)溶液,1次/d,共7 d。于第5 d,实验组给予1%α-萘异硫氰酸酯(ANIT)油溶液灌胃建立模型,空白组给予等容积橄榄油。观察大鼠一般情况,采用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST含量,采用ELISA法检测血清中炎性因子TNF-α、IL-6表达水平。与空白组相比,模型组ALT、AST、TNF-α、IL-6均升高,具有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,熊去氧胆酸组及黄芪多糖低剂量组、中剂量组、高剂量组均降低,具有显著性差异(P<0.01)。与熊去氧胆酸组相比,黄芪高剂量组效果最为显著,ALT、AST、TNF-α、IL-6均降低,具有显著性差异(P<0.01)。黄芪多糖可以缓解ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积性肝损伤并降低ALT、AST、TNF-α、IL-6水平。

黄肝煎液对胆汁淤积性肝损伤大鼠的保护作用及急性毒性研究

目的:观察医院制剂黄肝煎液对胆汁淤积性肝损伤的保护作用及急性毒性。方法:将72只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组和黄肝煎液低、中、高剂量组,每组12只,均连续灌胃给予相应药物14天,每天2次。除正常对照组外,其它各组均于给药第12天灌胃给予α-萘异硫氰酸酯(ANIT)建立胆汁淤积性肝损伤大鼠模型。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、羟脯氨酸(Hyp),血清黄疸指数总胆汁酸(TBA)及总胆红素(TBIL)水平;测定各组大鼠胆汁流量并计算肝脏指数;采用HE染色检测肝组织病理变化。急性毒性试验研究中,40只KM小鼠随机分为对照组和黄肝煎液组,黄肝煎液组以最大给药剂量灌胃给予黄肝煎液,对照组灌胃给予等量生理盐水。观察给药后14 d内小鼠的急性毒性反应,并测定血清ALT、AST、ALP、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)水平,计算脏器指数,评价黄肝煎液的急性毒性。结果:与模型组比较,黄肝煎液能够显著降低大鼠血清肝功能指标(ALT、AST、ALP和Hyp)及黄疸指数(TBIL和TBA),明显减小肝脏系数,增加胆汁流量,差异具有统计学意义(P<0.01),肝组织病理学改变显著改善。急性毒性试验中,以最大给药浓度1.63 g·mL^(-1),最大给药体积40 mL·kg^(-1)灌胃小鼠,24 h内给予黄肝煎液3次,最大日给药量为195.6 g·kg^(-1)(相当于临床成人日用剂量的80倍)时,除部分小鼠体质量降低、稀便软便外,其余小鼠均未出现死亡和明显的急性毒性反应。结论:黄肝煎液对ANIT诱导的大鼠胆汁淤积性肝损伤具有一定的保护作用,且无明显急性毒性反应。

妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇血清PAF、ESM-1和 TGF-β_(1)水平与新生儿急性肺损伤的关系

目的 评价妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)孕妇血清血小板活化因子(PAF)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)和转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平与新生儿急性肺损伤(ALI)的关系。方法 选择2020年1月至2022年1月在该院诊断为ICP的孕妇128例作为ICP组,选择同期在该院产检的正常孕妇45例作为对照组。比较ICP组和对照组血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)水平;比较血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)在不同严重程度ICP患者及生产不同严重程度ALI新生儿的ICP患者中的水平;分析血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)诊断ICP患者生产的新生儿发生ALI的效能。结果 ICP组血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)水平明显高于对照组(P<0.01);ICP患者重度组血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)水平明显高于轻度组(P<0.01);ALI组ICP患者血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)水平明显高于无ALI组(P<0.01),且RDS组ICP患者血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)水平明显高于TTPN组(P<0.01)。血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)联合检测诊断ICP患者生产的新生儿发生ALI的灵敏度为80.6%,特异度为100.0%,AUC为0.965,AUC明显高于PAF、ESM-1、TGF-β_(1)单项检测(P<0.05);而PAF、ESM-1、TGF-β_(1)单项检测诊断ICP患者生产的新生儿发生ALI的AUC之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 血清PAF、ESM-1和TGF-β_(1)可能是判断ICP严重程度的指标,参与了ALI的发生、发展,PAF、ESM-1和TGF-β_(1)联合检测有助于提高对ICP患者生产的新生儿发生ALI的诊断效能。

KIF12基因新复合杂合突变导致进行性家族性肝内胆汁淤积1例报告

目的鉴定导致1例进行性家族性肝内胆汁淤积8(PFIC 8)患儿的KIF 12基因变异及其对功能的影响。方法分析1例PFIC 8患儿的临床资料,对患儿及其父母进行全外显子组测序,变异用一代测序进行验证。通过免疫荧光染色、细胞模型、实时定量聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹反应研究变异对基因功能的影响。同时对已报道的17例PFIC 8患儿的临床资料和基因变异进行文献复习。结果患儿,男,1个月14天,临床表现以发热和黄疸为主。全外显子组测序发现,患儿的KIF 12基因存在c.539G>A+c.928C>T复合杂合突变,此前未见报道。免疫荧光结果显示患儿肝细胞的KIF12蛋白的细胞内定位发生改变。在293T细胞中,c.539A、c.928T和c.539A+c.928T均可以使KIF12的mRNA表达减少,c.928T和c.539A+c.928T可使KIF12的蛋白水平表达降低(P<0.05)。文献回顾显示,已有7个KIF 12的纯合突变和1个复合杂合突变(c.538C>T+c.539G>A)被报道。在已报道的病例中,KIF 12的突变类型和PFIC 8患儿的肝外临床表型无关。结论在1例PFIC 8患儿中发现1种新的KIF 12复合杂合突变。在已发现的9个突变中,其类型与PFIC8肝外临床表型可能无关。

血清总胆汁酸对伴胆汁淤积的药物性肝损伤的诊断价值

目的 探讨血清总胆汁酸(TBA)对伴胆汁淤积药物性肝损伤的诊断价值。方法 收集2013年7月—2019年8月于首都医科大学附属北京佑安医院住院的药物性肝损伤(DILI)患者的临床资料、病理资料。以病理表现为依据,将入组患者分为伴胆汁淤积和无胆汁淤积两组,比较两组患者TBA水平。结果 共入组281例DILI患者,无胆汁淤积组患者127例(45.20%),胆汁淤积组患者154例(54.80%),其中胆汁淤积患者胆汁淤积病理表现以肝细胞胆汁淤积为主(61.04%)。两组患者性别、年龄、临床症状均无显著差异。胆汁淤积组患者TBA、总胆红素(TBil)及直接胆红素(DBil)均显著高于无胆汁淤积组患者[(97.01±72.08) vs (71.84±72.64)μmol/L、(139.17±147.23) vs (86.77±90.16)μmol/L、(102.30±110.63) vs (59.70±68.64)μmol/L,P均<0.05],且住院时间更长(P<0.05)。单因素分析表明,伴胆汁淤积组患者TBA、TBil及DBil显著高于无胆汁淤积的患者。多因素分析显示,TBA是药物性肝损伤患者胆汁淤积的独立预测指标。以99.70μmol/L为临界值,TBA预测肝组织学胆汁淤积的曲线下面积(AUC)为0.603(0.536~0.671)(P=0.003),其敏感度和特异度分别为52.6%和74.0%。且当TBA≥20.1μmol/L,即可考虑患者有75%的概率存在胆汁淤积,其敏感度大于76.6%。结论 血清TBA、TBil及DBil是鉴别药物性肝损伤胆汁淤积的敏感指标;血清TBA对伴胆汁淤积的药物性肝损伤具有一定的诊断价值。

褪黑素通过改善胆汁酸代谢减轻胆汁淤积肝损伤

目的初步探究褪黑素(melatonin,Mel)减轻胆酸(cholic acid,CA)诱导的胆汁淤积肝损伤的机制。方法将15只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为3组(n=5):对照组、1%CA组和1%CA+Mel组,对照组喂养正常饮食,1%CA组和1%CA+Mel组喂养1%CA饮食14 d构建胆汁淤积小鼠模型,1%CA+Mel组同时腹腔注射褪黑素(100 mg/kg)。对1%CA组和1%CA+Mel组小鼠的肝组织进行α-SMA免疫组化染色,采用RT-qPCR检测小鼠肝纤维化相关指标的mRNA表达水平。采用液相色谱-串联质谱联用技术检测肝脏总胆汁酸,自动生化分析仪检测血清总胆汁酸。为了进一步了解胆汁酸代谢的机制,采用RT-qPCR检测小鼠胆汁酸合成和肝脏解毒酶相关指标的mRNA表达水平,Western blot检测胆汁酸合成和肝脏解毒酶相关指标的蛋白表达水平。结果与1%CA组相比,1%CA+Mel组的小鼠肝纤维化相关指标Tgfβ1、ColⅠa1、ColⅡa1和α-SMA的mRNA表达水平明显降低(P<0.05),小鼠肝组织α-SMA免疫组化染色结果显示肝星状细胞活化明显减少。与1%CA组相比,1%CA+Mel组小鼠血清与肝脏中胆汁酸含量显著减少,其中TCA含量显著降低,胆汁酸合成酶胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,Cyp7a1)和Cyp8b1的mRNA水平均显著降低,肝脏解毒酶Cyp2b10和尿苷二磷酸葡萄糖醛基酶1A1(udp-glucuronosyltransferase,Ugt1a1)的mRNA水平明显升高,Cyp2b10和胆盐磺基转移酶(sulfotransferase family 2A member 1,Sult2a1/2)的蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论褪黑素通过减少胆汁酸合成和增加肝脏解毒酶的方式改善胆汁淤积。

ABCB11基因突变致良性复发性肝内胆汁淤积症2型1例

患者,女性,29岁,因“间断皮肤瘙痒、纳差、尿黄10余年,加重10天”入院。现病史:患者2003年9月无明显诱因出现皮肤瘙痒、皮肤黄染,伴纳差、恶心、厌油、尿黄、大便颜色变浅,无腹痛、腹泻,无发热,于我院住院治疗。查肝功能异常(表1),血常规及凝血功能未见异常,甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒系列均阴性,诊断为“单纯性胆汁淤积”。

毛菊苣乙酸乙酯萃取物对大鼠溃疡性结肠炎合并急性肝损伤防治作用研究

目的研究毛菊苣根乙酸乙酯萃取物(CGEA)对大鼠急性肝损伤合并溃疡性结肠炎的保护作用。方法将SD大鼠36只随机分为正常组(Control)、模型组(Model)、柳氮磺吡啶肠溶片阳性对照组(Sulfasalazine,100 mg·kg^(-1))和CGEA高、低剂量组(150、100 mg·kg^(-1)),每组6只,除正常组外其余各组给予30%TNBS-40%乙醇溶液灌肠(60 mg·kg^(-1)),同时皮下注射含体积分数40%CCl4的橄榄油溶液2 mL·kg^(-1),一周2次,制备急性肝损伤模型合并溃疡性结肠炎模型,造模成功后将CGEA制备成水混悬液,按照CGEA高剂量组(150 mg·kg^(-1)),CGEA低剂量组(100 mg·kg^(-1))连续灌胃大鼠14 d,每日1次。14 d后,处死大鼠并取血清及肝脾组织,计算肝脾指数,检测大鼠血清相关指标;采用HE染色法观察肝、肠组织病理变化。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脾指数明显上升(P<0.01);血清中AST、ALT、AKP、γ-GT和MDA水平显著升高(P<0.05或P<0.01),SOD水平显著降低(P<0.05);肝组织遭到破坏,炎性细胞浸润;结肠组织结构杂乱,出现炎症细胞浸润现象。与模型组比较,给药组肝脾指数显著降低(P<0.01);血清中AST、ALT、AKP、γ-GT和MDA指标水平显著降低(P<0.05或P<0.01);给药组肝肠组织破坏程度减轻,炎性细胞浸润减少。结论CGEA可以减轻大鼠溃疡性结肠炎合并急性肝损伤程度,对其起到保护作用。

布鲁氏菌病合并胆汁淤积性肝病1例及文献复习

布鲁氏菌病是影响人类健康的重要人畜共患病,可累及人体全身任意器官或系统,临床表现多样。肝脏作为人体最大的网状内皮细胞吞噬系统,在机体抗布鲁氏菌感染中发挥着重要作用。布鲁氏菌感染常可引起机体转氨酶升高或肝脏肿大^([1]),但布鲁氏菌相关的肝脏肉芽肿和胆汁淤积性肝病较少,布鲁氏菌病引起的肝脏并发症需重视。

105例药物性胆汁淤积型肝损伤患者临床特征分析

目的探讨药物性胆汁淤积型肝损伤患者基本信息、临床特征、影像学表现及转归。方法回顾性分析近5年来的住院患者中诊断为药物性胆汁淤积型肝损伤的病例资料,记录其临床数据,至少随访6个月。结果共有105例药物性胆汁淤积型肝损伤患者,中位年龄55岁,男性占比54.3%,多无特异性临床症状。所涉及的药物近80余种,前3位依次为中药(34.3%)、抗肿瘤药(22.9%)、抗生素(10.5%)。49例行磁共振胰胆管成像患者中,有7例(14.3%)患者存在硬化性胆管炎样改变。105例患者中治愈53例(50.5%),好转41例(39.0%),未愈7例(6.7%),死亡4例(3.8%),总有效率为89.5%。结论药物性胆汁淤积型肝损伤主要发生于老年患者,涉及药物种类较多,以中药最为多见。药物还可引起类似于硬化性胆管炎样改变,因此应将药物性胆汁淤积型肝损伤作为胆汁淤积和胆管造影异常患者的鉴别诊断之一。基础肝病对患者预后无影响。二元Logistic逐步回归分析示:Roussel Uclaf因果关系评价法(RUCAM)评分低、血红蛋白水平低、住院时间短以及白细胞计数高是药物性胆汁淤积型肝损伤患者转归的独立危险因素。

护肝布祖热方对大鼠肝内胆汁淤积性肝损伤的影响及机制

目的研究护肝布祖热方(HBF)对大鼠肝内胆汁淤积性肝损伤的影响及潜在机制。方法将大鼠随机分为对照组(control组)、模型组(model组)、熊去氧胆酸(UDCA)组(阳性对照,60mg/kg)和HBF低、中、高剂量组(HBF-L、HBF-M、HBF-H组,0.4、0.8、1.6g/kg),每组6只。各药物组大鼠每天灌胃相应药液1次,连续7d;control组和model组大鼠灌胃等体积水。实验第5天,除control组外,其余各组大鼠均单次灌胃α-异硫氰酸萘酯橄榄油溶液(100 mg/kg)建模。造模48 h后,检测大鼠血清中肝功能指标(天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素)含量和氧化应激指标[丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶]水平,观察肝组织病理形态变化,检测肝组织中炎症相关因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)]和法尼酯X受体(FXR)信号通路相关因子[FXR、小异源二聚体伴侣受体(SHP)、多药耐药蛋白2(MRP2)、胆盐输出泵转运蛋白(BSEP)、钠离子依赖性牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)、有机阴离子转运多肽2(OATP2)和胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)]mRNA,以及FXR信号通路相关蛋白(FXR、MRP2、BSEP、NTCP)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达情况。结果与model组比较,HBF-H组大鼠血清中上述肝功能指标含量和MDA水平,肝组织中上述炎症相关因子mRNA、CYP7A1 mRNA的表达水平以及NF-κBp65蛋白的相对表达量均显著降低,血清中GSH水平和肝组织中FXR、SHP、MRP2、BSEP、NTCP、OATP2mRNA的表达水平以及FXR、MRP2、BSEP、NTCP蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01),肝组织病理改变明显好转;HBF-L组、HBF-M组、UDCA组大鼠均只有部分指标显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论HBF可预防大鼠肝内胆汁淤积性肝损伤,此作用可能与激活FXR信号通路、减轻炎症和氧化应激有关。

黄秦艽对ANIT诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤保护研究

为了探讨黄秦艽水提物(WVBF)对ANIT诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤保护作用及机制研究,将雄性C57BL/6小鼠50只随机分为5组,即正常组(NC)、模型组(MC)、阳性对照熊去氧胆酸组(UDCA 45 mg/kg)、WVBF低剂量组(WVBF 25 mg/kg)和WVBF高剂量组(WVBF 50 mg/kg).灌胃给予WVBF,连续10 d,在第7天用ANIT油溶液(75 mg/kg)一次性灌胃造模,采集血液和肝脏样品测定血生化、肝脏病理以及FXR/SHP通路相关基因水平.结果显示:与模型组相比,WVBF给药组小鼠肝脏坏死情况明显好转,炎性细胞浸润减少,血清中ALT、AST、TBA、T-Bil-V和D-Bil-V明显下降,肝脏中Fxr、Shp、Mpr2和Bsep mRNA的水平显著上调,WVBF(50 mg/kg)组Ntcp的mRNA水平显著下调(P<0.05).这表明黄秦艽对ANIT诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤具有保护作用,其机制可能与调节胆汁酸的合成、分泌、转运和重吸收有关.

转录因子κB和早期生长反应因子1在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达

目的研究转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和早期生长反应因子1(early growthresponse factor-1,Egr-1)在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达及意义。方法将α-异硫氰酸萘酯(ANIT)按50 mg/kg 一次灌胃大鼠,建立急性肝内胆汁淤积性肝损伤的动物模型,免疫组织化学法和实时荧光定量 PCR 分别检测灌胃后24、48、72 h 肝组织中 NF-κB p65蛋白表达和 Egr-1 mRNA 表达量,全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)。结果模型组24、48、72 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量分别为(12.73±3.02)×10^(-2)、(8.19±2.29)×10^(-2)、(5.79±0.78)×10^(-2),24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05);模型组24、48、72 h肝组织 NF-κB p65核表达阳性细胞率分别为48.3%、26.5%、2.7%,其中24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级分别与同一时间点的血清 TB、DB、ALT 呈正相关(P 均<0.05);模型组24、48 hEgr-1 mRNA 表达量分别与同一时间点的血清TB、DB、AIT、GGT 呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 NF-κB p65、Egr-1 mRNA 表达量与72 h 时血清 TB、DB、ALT、GGT 无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级与同一时间点的血清 GGT 亦无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 Egr-1 mR-NA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级无相关关系(P 均>0.05)。结论 NF-κB和 Egr-1在肝内胆汁淤积性肝损伤肝组织中表达增高,与肝损伤程度相关,参予了肝内胆汁淤积性肝损伤的病理过程。[临床儿科杂志,2008,26(10):879-884]

1例头孢克洛致急性胆汁淤积型药物性肝损伤儿童患者的药学监护

1例11岁儿童患者,因服用头孢克洛4 d后出现尿黄、皮肤瘙痒入院。查肝功能异常,诊断为急性胆汁淤积型药物性肝损伤,给予保肝、退黄、降酶等对症治疗。针对患者未成年和肝损伤急性加重等特点,药学监护集中于保肝药物的合理选用、糖皮质激素个体化给药方案的制定、不良反应的监测以及药物不良相互作用的干预,同时通过用药教育提高患者用药依从性,减少潜在的用药风险。治疗4周后,患者肝功能恢复正常出院。

消黄去疸汤对ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤大鼠的保护作用

目的:探讨消黄去疸汤改善胆汁淤积性肝损伤的疗效。方法:将28只SD大鼠按随机数字表法分为空白组(NOM)、模型组(MOD)、熊去氧胆酸组(UDCA)和消黄去疸汤组(XHQD),每组7只,各组大鼠每天给予相应药物灌胃1次,连续7 d。至第5天时,除NOM组外,其余各组大鼠予以α-萘异硫氰酸酯(ANIT)灌胃诱导胆汁淤积性肝损伤模型。监测大鼠90 min胆汁流量,计算各组大鼠肝脏指数,HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化,透射电镜观察肝细胞超微结构,全自动生化仪检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)与总胆汁酸(TBA)含量,Elisa法检测大鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)的含量。采用qRT-PCR法测定大鼠肝组织中TNF-α、IL-1β以及IL-6 mRNA的表达。结果:与NOM组比较,MOD组大鼠在各个时间段胆汁流量降低,AST、ALT、ALP、γ-GT含量增加,肝脏指数升高,DBil、TBil、TBA水平升高,SOD活性及GSH、MDA水平降低,TNF-α、IL-1β以及IL-6 mRNA水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与MOD组大鼠比较,UDCA组大鼠15、30、75、90 min时间段胆汁流量升高,XHQD组大鼠各个时间段胆汁流量均升高,UDCA与XHQD组大鼠AST、ALT、ALP、γ-GT含量减少,肝脏指数降低,DBil、TBil、TBA水平降低,SOD活性及GSH水平降低、MDA水平升高,SOD活性及GSH水平降低、MDA水平升高,TNF-α、IL-1β以及IL-6 mRNA水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:消黄去疸汤对胆汁淤积型肝损伤大鼠具有明显的保护作用,其作用机制可能是调节氧化应激及炎症反应。

SWE观察儿童急性淋巴细胞白血病化疗后药物性肝损伤的保肝治疗效果

目的探讨实时剪切波弹性成像(SWE)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗后药物性肝损伤(DILI)保肝治疗过程中的应用价值。方法选取ALL化疗后确诊为药物性肝损伤患儿100例,按严重程度分1~3级(轻、中、重度)三个亚组。对照组为50例健康儿童。应用SWE技术对DILI治疗前后及对照组进行检查,获取弹性模量平均值(Emean值),同时记录肝功能指标。对比观察Emean值及肝功能指标在DILI治疗过程的变化情况。结果ALL化疗后DILI肝实质Emean值与肝功能指标治疗前与对照组、治疗前后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SWE技术可无创量化ALL化疗后DILI治疗过程中的肝硬度变化,监测治疗效果。