耳霉菌急性注射对大鼠的感染性及致病性

目的应用PCR扩增技术检测微生物农药耳霉菌急性注射感染性及致病性,探讨PCR方法在真菌类微生物农药感染性及致病性评价中的应用。方法将50只健康7~9周龄SPF级Wistar大鼠按体重随机分为2组,分别为耳霉菌染毒组(40只)和对照组(10只),雌雄各半。将2.0×10^7 CFU/ml耳霉菌悬浮剂按0.5 ml/只经腹腔一次性注射,对照组不作处理;连续观察21 d。记录动物中毒症状、死亡情况,并对死亡动物进行大体解剖。于染毒后第0、3、7、14、21天剖解动物的脑、淋巴结、肝、脾、肺、肾等组织,采集血液及盲肠内容物提取基因组DNA,利用耳霉菌nuc-LSU基因特异性引物进行PCR检测。结果耳霉菌染毒组动物注射耳霉菌后第0、3、7、14、21天,脑、血液、淋巴结、肝、脾、肺、肾、盲肠内容物等组织中均未检出耳霉菌。实验动物染毒后,未见明显中毒症状,观察期内无大鼠死亡,大体检查及病理检查均未见明显异常。结论耳霉菌经腹腔注射急性染毒后对大鼠无感染性及致病性。本检测方法可快速、有效地检测出耳霉菌的侵染及清除情况,且具有良好的特异性、可重复性,可做为微生物农药感染性、致病性的检测方法。