G-CSF对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞的细胞周期、增殖细胞及分化的影响

本研究探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞周期、凋亡及各细胞亚群增殖、分化的影响。6Gy照射BALB/c小鼠制造中重度急性辐射损伤模型,随机分为对照组及重组人G-CSF治疗组[rhG-CSF100μg/(kg.d)×14天]。用PI法检测照后72小时内胸腺细胞周期及凋亡变化,流式细胞仪检测照后7至28天不同时间点胸腺CD4-CD8-细胞4阶段及CD4+CD8+、CD8+CD4-、CD8-CD4+细胞比例。结果显示,G-CSF在照后6小时即可使胸腺细胞出现G0/G1期阻滞G-CSF组vs对照组为(82.0±5.0)%vs(75.9±2.8)%(p<0.05),S期下降G-CSF组vs对照组为(10.2±4.8)%vs(15.7±2.3)%(p<0.05),但对G2/M期细胞比例影响不大。胸腺细胞受照后6小时即出现明显调亡,12小时达高峰。G-CSF组在照后6小时及12小时胸腺细胞凋亡率分别为(11.5±2.4)%、(15.5±3.3)%,对照组则分别为(16.5±2.2)%、(22.6±0.7)%,两时间点统计学差异明显(p<0.05)。胸腺CD4-CD8-(double negative,DN)细胞成熟分4个阶段(DN1-4),G-CSF组照后7天DN1细胞比例明显高于对照组(p<0.05),照后21天DN3、DN4细胞比例高于对照组(p<0.05),提示G-CSF可促进DN1细胞增殖,并使其向DN3、DN4阶段分化。G-CSF对胸腺CD4+CD8+细胞的影响主要在于减轻其恢复过程中的二次下降的程度,使其在照后28天接近正常,并明显高于对照组[(71.0±6.3)%vs(25.5±6.3)%](p<0.05)。结论 :G-CSF可调节急性辐射损伤胸腺细胞周期,减少胸腺细胞凋亡,促进胸腺CD4-CD8-及CD4+CD8+细胞增殖、分化,加快急性辐射损伤后中枢免疫恢复。

凉血固元益肾汤对肠型急性辐射损伤大鼠骨髓造血功能的保护作用

目的通过动物实验观察凉血固元益肾汤对肠型急性辐射损伤大鼠骨髓造血机能的保护作用。方法清洁级雄性SD大鼠85只,随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组、凉血固元益肾汤中剂量组(中药中剂量组)、凉血固元益肾汤高剂量组(中药高剂量组)。在适应性饲养后,于照射前禁食8 h,除空白对照组外,各组均通过全身一次性^(60)Co-γ射线10 Gy(源皮距3 m)照射制备大鼠急性肠型辐射损伤模型。自照射后第1天至处死前,中药中、高剂量组分别按照10 ml/kg给予含生药2.73 g/ml、5.46 g/ml的凉血固元益肾汤浓缩液灌胃,阳性药对照组按10 ml/kg给予生理盐水配置的0.3 g/ml谷氨酰胺混悬液灌胃,空白对照组和模型对照组按10 ml/kg给予生理盐水灌胃,1次/d。在照射后第3、5、10天,除空白对照组外各组分别随机抽取5只检测白细胞、红细胞(红细胞计数、血红蛋白浓度和红细胞比容)、血小板情况,并剖取一侧股骨进行骨髓病理切片染色观察。结果(1)白细胞:与空白对照组比较,各组在照射后第3、5、10天均明显降低(P<0.01),各治疗组与模型对照组及各治疗组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)红细胞:照射后第3天,与空白对照组比较,模型对照组红细胞计数、血红蛋白浓度和红细胞比容明显降低(P<0.05,P<0.01),中药高剂量组各指标高于模型对照组及阳性药对照组(P<0.01),甚至其红细胞计数和血红蛋白浓度高于空白对照组(P<0.05);照射后第5天,各组红细胞计数、血红蛋白浓度和红细胞比容比较,差异无统计学意义(P>0.05)。照射后第10天,与空白对照组比较各组红细胞计数、血红蛋白浓度和红细胞比容均出现明显降低(P<0.01),且中药中剂量组红细胞计数和红细胞比容水平均高于模型对照组(P<0.05)。(3)血小板:照射后第3天,各组血小板计数比较,差异无统计学意义(P>0.05),但第5天和第10天各组血小板计数均明显低于空白对照组(P<0.01),且各治疗组与模型对照组及各治疗组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。骨髓HE染色显示,照射后第3天和第5天,各辐射组骨髓内淋系和巨核系造血细胞数量明显下降,骨髓结构疏松紊乱,其中中药中、高剂量组红系造血细胞相对数量较多;照射后第10天,各照射组红系、粒系和巨核系造血细胞基本消失,但中药高剂量组可见以上三系造血细胞数量增多且有增殖再生的趋势。结论大剂量辐射后短期应用凉血固元益肾汤对^(60)Co-γ射线一次性全身照射10 Gy所致急性肠型辐射损伤大鼠的骨髓造血功能有保护作用,尤对红细胞造血功能更为明显,并可一定程度促进骨髓造血细胞再生。

粒细胞集落刺激因子对急性辐射损伤小鼠中枢及外周血淋巴细胞亚群重建的影响

目的观察粒细胞集落刺激因子（G—CSF）对急性辐射损伤小鼠中枢及外周血淋巴细胞亚群重建的影响。方法雌性BALB／c小鼠60只经6Gy照射后随机分为照射组、G—CSF＋照射组。G—CSF＋照射组小鼠给与重组人G—CSF100μg·kg^-1·d^-1皮下注射，连续14d，照射组小鼠给与等体积磷酸盐缓冲液（PBS）皮下注射，连续14d，另设空白对照组小鼠20只。照后7、14、21和28d颈部脱臼处死小鼠，取出胸腺制成单个核细胞悬液，使用流式细胞仪检测胸腺CD4＋CD8＋、CD4＋CD8-、CD4-CD8＋、CD4-CD8-细胞亚群的比例。使用全血细胞计数仪进行外周血白细胞计数及淋巴细胞绝对值测定，流式细胞仪检测照后14、28、60d外周血淋巴细胞亚群比例，CCK-8法检测脂多糖（LPS）、刀豆蛋白A（ConA）刺激后脾脏淋巴细胞增殖指数。结果照后7d胸腺CD4＋CD8＋细胞比例降至最低，14d出现反弹，21d再次下降，以后逐渐恢复。照后28dG．CSF＋照射组CD4＋CD8＋细胞比例恢复正常并高于照射组（t=12．22，P〈0．05）。照后21dG—CSF＋照射组CD4-CD8＋细胞比例亦明显高于照射组（t=3．77，P〈0．05）。照后7d外周血白细胞及淋巴细胞绝对值降至最低，照后14和60d，G—CSF＋照射组CD3＋CD8＋T细胞比例明显高于照射组（t=4．31，5．78，P〈0．05），但两组间CD3＋CD4＋T细胞比例在各时间点无明显差异。G—CSF＋照射组B淋巴细胞比例在照后14d明显低于照射组（t=7．3，P〈0．05），但很快恢复，照后28和60d两组B淋巴细胞比例差异无统计学意义。照后14d，G—CSF＋照射组脾脏淋巴细胞对LPS、ConA刺激的增殖指数分别为照射组的4．37和2．98倍。结论G—CSF可促进照后胸腺细胞亚群的恢复，提高外周血淋巴细胞数量，调节外周血淋巴细胞亚群比例，提高淋巴细胞增殖功能，促进急性辐射损伤后中枢及外周免疫重建。