大鼠血中AQP-2与DIC相关急性非少尿型肾损伤的相关性分析

目的研究弥散性血管内凝血(DIC)相关的急性非少尿型肾损伤与大鼠血中水通道蛋白2(AQP-2)的相关性,探讨AQP-2作为DIC相关急性非少尿型肾损伤早期诊断指标的意义。方法清洁级雄性Wistar大鼠24只随机分为两组。对照组(n=9)静脉滴注10mL无菌生理盐水,大鼠滴注4h3只,6h3只,8h3只;实验组(n=15)注射脂多糖(LPS)溶液(LPS 30mg/kg体质量,溶于10mL无菌生理盐水,滴注LPS 4h5只,6h 5只,8h5只。各组静脉滴注后取血液检测血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、D-二聚体(D-D)、血浆纤维蛋白原(FIB)、血清肌酐(SCr)、血尿素(BUN)水平,监测各组在滴注LPS时间段内的尿量;滴注结束后取各组肾、肺组织HE染色及纤维素染色,观察组织中微血栓形成情况以及组织病理损伤;同时酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血液中AQP-2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、加压素(AVP)、白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。采用SNK-q及直线相关方法对结果进行统计学分析,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)并计算曲线下面积(AUC)来评价AQP-2和SCr的诊断价值。结果各个实验亚组PLT和FIB水平与对照组相比明显减低(P<0.05);实验组PT与对照组相比延长,尿量、血清中D-D、TNF-α和AVP,SCr、BUN明显增高(P<0.05);实验组各亚组大鼠的血清中AQP-2和对照组相比有明显减低的趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。AQP-2和TNF-α、AVP、IL-1β呈负相关(r=-0.557、-0.629、-0.780);光镜下,LPS 6h组可见肺毛细血管有微血栓形成,肺间质水肿;肾有炎细胞浸润。结论大鼠静脉持续注射LPS诱导大鼠建立DIC相关急性非少尿型肾损伤模型,随着病程的发展,AQP-2在血中有下降趋势,并且与AVP、TNF-α、IL-1β呈负相关,提示AQP-2可能参与大鼠DIC早期的肾损伤,为非少尿型急性肾损伤早期辅助性诊断提供新的指标。

播散性血管内凝血急性非少尿型肾损伤大鼠尿水通道蛋白-1水平与炎性因子的相关性

目的探讨播散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation, DIC)急性非少尿型肾损伤大鼠尿水通道蛋白-1(aquaporin-1, AQP-1)水平变化及与白细胞介素(interleukin, IL)-18、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)的相关性。方法 24只Wistar大鼠随机分为脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)4、6、8 h组各5只,对照4、6、8 h组各3只。LPS 4、6、8 h组经股静脉滴注LPS溶液30 mg/kg,持续时间分别为4、6、8 h,制备DIC急性非少尿型肾损伤模型;对照4、6、8 h组分别经股静脉滴注等量生理盐水4、6、8 h。收集滴注LPS溶液或生理盐水期间尿量,测定AQP-1、IL-18、TNF-α、NGAL水平;滴注结束采集各组心脏血液,检测血小板计数、纤维蛋白原、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间,及血浆D-二聚体、肌酐水平;采血后处死大鼠,取一侧肾脏及肺组织行HE或纤维素染色,光镜下观察肺、肾组织毛细血管充血、微血栓形成情况;Pearson法分析尿AQP-1与IL-18、TNF-α、NGAL水平的相关性。结果对照4、6、8 h组尿AQP-1、IL-18、TNF-α、NGAL水平,血小板计数、纤维蛋白原、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间,及血浆D-二聚体、肌酐水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);LPS 4、6、8 h组血小板计数、纤维蛋白原较对照4、6、8 h组降低,凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间较对照4、6、8 h组延长,血浆D-二聚体、肌酐较对照4、6、8 h组升高,尿量均较对照4、6、8 h组增多(P<0.05);LPS 4、6、8 h组血小板计数、纤维蛋白原依次降低(P<0.05),D-二聚体依次升高(P<0.05);LPS 8 h组凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间较LPS 4、6 h组延长(P<0.05),LPS 4 h组与LPS 6 h组比较差异无统计学意义(P>0.05);LPS 6、8 h组尿量较LPS 4 h组增加,肌酐较LPS 4 h组增高(P<0.05),且LPS 8 h组肌酐均较LPS 6 h组增高,尿量与LPS 6 h组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照4、6、8 h组肺组织纤维素染色镜下无明显异常病理改变,LPS 4、6、8 h组毛细血管呈不同程度的充血及微血栓形成;对照4、6、8 h组和LPS 4 h组HE染色镜下肾小管上皮细胞未发生明显变化,LPS 6、8 h组可见少量炎症细胞浸润、上皮细胞肿胀;LPS 4、6、8 h组尿AQP-1[(114.83±2.35)、(124.18±0.51)、(140.37±2.09)ng/L]、NGAL[(5.69±0.02)、(6.32±0.08)、(7.03±0.02)μg/L]、TNF-α[(39.84±0.39)、(41.96±1.20)、(47.42±1.16)ng/L]、IL-18[(23.61±0.17)、(24.96±0.12)、(28.49±0.79)ng/L]依次升高,且均高于对照4、6、8 h组(P<0.05);LPS 4、6、8 h组尿AQP-1与TNF-α、IL-18、NGAL水平呈正相关(r=0.959,P<0.001;r=0.962,P<0.001;r=0.978,P<0.001)。结论 DIC急性非少尿型肾损伤大鼠尿AQP-1明显升高,且与TNF-α、IL-18、NGAL呈正相关,可作为评估肾损伤的敏感标志物。