靶向T细胞免疫治疗急性髓性白血病的策略

急性髓性白血病(AML)常伴有T细胞免疫功能不全,由于免疫检查点(IC)分子表达上调引起T细胞耗竭是其重要原因之一。利用IC抑制剂治疗AML有一定的临床效果,但患者T细胞耗竭的异质性很大,且还存在其他原因引起的T细胞免疫功能不全,多层面分析区分不同类型的免疫缺陷而采取相应的靶向T细胞免疫治疗才是理想的策略。

长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。

C反应蛋白与血清白蛋白比值对急性髓性白血病老年患者预后的评估

目的探讨C反应蛋白与血清白蛋白比值(CAR)对急性髓性白血病老年患者预后的评估价值。方法选取2018年2月—2022年12月徐州医科大学附属医院诊断的84例非M3急性髓性白血病老年患者进行回顾性分析。根据ROC曲线确定CAR最佳截断点,将患者分为低CAR组和高CAR组,比较各组间临床指标的差异,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用COX比例风险回归模型进行预后因素分析。结果根据ROC计算CAR的AUC为0.870(95%CI:0.788~0.953,P<0.05),根据约登指数计算CAR最佳截断值为0.370,灵敏度为86.2%,特异度为81.8%。CAR≤0.370的35例为低CAR组,CAR>0.370的49例为高CAR组。高CAR组中C反应蛋白水平更高(P<0.05),血清白蛋白水平更低(P<0.05),低CAR组患者诱导化疗后更容易实现首次完全缓解(P<0.05)。低CAR组的总生存期及无进展生存期均优于高CAR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。COX比例风险回归模型显示,CAR是影响老年急性髓性白血病患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论较高的CAR值提示非M3急性髓性白血病老年患者的预后更差,CAR可能成为此类患者预后评价的有效标志物。

LINC01410调控miR-124/stat3轴参与急性髓性白血病免疫逃逸的机制研究

目的:探究LINC01410调控微小RNA-124(miR-124)/信号传导与转录激活因子3(stat3)轴参与急性髓性白血病免疫逃逸的机制。方法:采集21例AML患者骨髓样本、同时期25例非恶性血液病患者骨髓及外周血样本,收集骨髓样本中白细胞及外周血中的自然杀伤细胞(NK);通过qRT-PCR法检测LINC01410及miR-124表达;Western blot检测stat3蛋白表达;ELISA法检测IFN-γ含量;LDH试剂盒检测NK细胞毒性;双荧光素酶报告基因检测LINC01410、miR-124、stat3的靶向关系。结果:与非恶性血液病患者相比,AML患者骨髓中LINC01410表达显著增加,miR-124表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,IL-2组NK细胞中LINC01410及p-stat3/stat3表达显著降低(P<0.05),miR-124表达、IFN-γ含量、NK细胞毒性显著增加(P<0.05);与IL-2组相比,sh-LINC01410组LINC01410及p-stat3/stat3表达显著降低(P<0.05),miR-124表达、IFN-γ含量、NK细胞毒性显著增加(P<0.05);miR-124表达沉默可逆转LINC01410低表达对AML免疫逃逸的抑制作用;与IL-2组相比,miR-124 mimics组IFN-γ含量及NK细胞毒性显著增加(P<0.05);stat3过表达可逆转miR-124对AML免疫逃逸的抑制作用。结论:LINC01410沉默通过激活miR-124/stat3轴抑制AML免疫逃逸。

B7家族在急性髓性白血病中的表达及免疫治疗研究进展

急性髓性白血病(AML)是一种克隆性造血干细胞疾病,可重塑骨髓微环境从而促进肿瘤复发和耐药形成。B7家族分子在多种肿瘤组织中异常表达,且B7家族分子通过免疫和非免疫途径影响免疫反应和肿瘤进展,是潜在的治疗靶点。然而,B7分子在AML中的表达特征和治疗价值仍不清楚。本文将从B7家族分子的特性、在AML中的表达模式及意义作一综述,以期B7分子在AML免疫治疗中发挥重要作用。

血清miR-214、miR-143在急性髓性白血病中的表达水平及与疾病复发的关系

目的探讨急性髓性白血病(AML)患者血清微小RNA(miR)-214、miR-143的表达水平,并分析二者与AML治疗后复发的关系。方法选取2019年1月—2021年4月四川大学华西医院血液内科治疗的AML患者94例作为研究对象(AML组),根据AML患者治疗后1年内是否复发分为AML缓解亚组60例和AML复发亚组34例,另选择同期医院健康体检者50例作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-214、miR-143表达水平;Spearman等级相关分析AML患者血清miR-214、miR-143表达与治疗后复发的关系,多因素Logistic回归分析AML患者复发的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-214、miR-143水平预测AML患者治疗后复发的效能。结果AML组患者血清miR-214表达水平高于健康对照组,miR-143表达水平低于健康对照组(t/P=7.024/<0.001,7.191/<0.001);复发亚组AML患者血清miR-214表达水平高于缓解亚组,miR-143表达水平显著低于缓解亚组(t/P=2.940/0.004,6.596/<0.001);复发亚组AML患者WBC高于缓解亚组,Hb、PLT水平低于缓解亚组(t/P=3.788/<0.001,2.093/0.039,2.974/0.004);AML患者复发与血清miR-214表达呈正相关(r/P=0.584/<0.001),与血清miR-143表达呈负相关(r/P=-0.428/<0.001);多因素Logistic回归分析显示,WBC高、miR-214高为AML患者复发的危险因素[OR(95%CI)=1.647(1.062~2.555)、1.392(1.031~1.879)],Hb高、PLT高、miR-143高是其保护因素[OR(95%CI)=0.839(0.805~0.991)、0.714(0.514~0.992)、0.768(0.606~0.974)];ROC曲线分析显示,血清miR-214、miR-143及二者联合预测AML复发的曲线下面积为0.765、0.900、0.939,二者联合预测AML复发的效能优于单项指标预测(Z/P=3.318/0.002,2.342/0.019)。结论AML患者血清miR-214表达上调,miR-143表达下调,二者对预测AML患者复发具有较好的效能。

中药治疗对急性髓性白血病患者化疗后便秘的预防效果观察

目的探讨中药治疗对急性髓性白血病(AML)患者化疗后便秘的预防效果。方法54例AML患者作为研究对象,随机分为观察组和对照组,各27例。对照组给予化疗和防治感染治疗,观察组在对照组基础上应用中药治疗。对比两组化疗后便秘发生情况。结果对照组发生11例便秘,发生率为40.74%;观察组发生3例便秘,发生率为11.11%。观察组便秘发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用中药治疗的方法可以预防AML化疗后发生便秘,从而保障了患者顺利进行化疗,减轻了患者的痛苦,提高了患者的生活质量,具有显著的临床效果。

miR-638促进急性髓性白血病增殖作用机制的研究

目的探讨miR-638促进急性髓性白血病(AML)增殖的作用机制。方法通过培养HL-60细胞系,应用Lipofectamine 2000脂质体将miR-638模拟物(mimic)、miR-638抑制物(inhibitor)及阴性对照组(NC)转染至白血病细胞系HL-60,采用RT-qPCR验证miR-638的转染效果,采用CCK8实验检测miR-638对细胞增殖能力的影响,采用AnnexinV/PI双染流式细胞术实验检测miR-638对白血病细胞凋亡的影响,采用Western blot实验检测MCTS1的表达水平。结果与NC相比,miR-638模拟物转染HL-60细胞后水平升高,miR-638抑制物转染HL-60细胞后水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05),转染效果较好。与NC相比,miR-638模拟物转染至HL-60细胞后,细胞增殖水平明显降低;miR-638抑制物转染至HL-60细胞后,细胞增殖水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。AnnexinV/PI双染流式细胞术实验发现,与NC相比,转染miR-638模拟物后HL-60细胞凋亡率显著升高,转染miR-638抑制物后HL-60细胞凋亡率显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-638模拟物可显著降低HL-60细胞内MCTS1的表达水平,miR-638抑制物可显著增加HL-60细胞内MCTS1的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-638低表达可促进AML的增殖能力,并抑制细胞凋亡;其调控机制可能是通过结合致癌基因MCTS1共同促进白血病的发生。

FLAG方案治疗难治性、复发性急性髓性白血病的疗效观察

目的：观察FLAG方案治疗难治性和复发性急性髓性白血病的疗效。方法：应用FLAG方案：氟达拉滨（FDR）50mg静滴d1-5，阿糖胞苷1g静滴q12h、d1～5，C-CSF200μg皮下注射d0-5。结果：13例难治和复发性的急性髓性白血病，7例完全缓解（53．8％），部分缓解3例（23％），总有效率76．9％。结论：FLAG方案对部分难治和复发的急性髓性白血病有效，尤其是早期复发者。

和厚朴酚诱导人急性髓性白血病KG1a细胞凋亡

目的:探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对人急性髓性白血病KG1a细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:XTT法检测不同质量浓度HNK对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同质量浓度HNK作用后KG1a细胞的细胞周期及凋亡,RT-PCR法检测KG1a细胞Bcl-2、Bid、Bax、Bak、Bad、P53、NF-κB等凋亡相关基因的表达。结果:HNK(2.5、5、8、10、15、20、40μg/ml)对KG1a细胞的增殖有明显抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.01),其中24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为10.23、8.25μg/ml。流式细胞术结果显示,经HNK(5、10μg/ml)处理后,KG1a细胞被阻滞在G0/G1期,早期凋亡率分别为(11.16±1.27)%和(21.46±3.13)%,显著高于对照组的(6.03±1.10)%(P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,HNK(10μg/ml)处理后KG1a细胞内促凋亡基因Bax表达显著上调,Bad轻度上调;抗凋亡基因NF-κB表达显著下调。结论:HNK能诱导人急性髓性白血病KG1a细胞凋亡,其机制可能与Bax、Bad基因表达上调及NF-κB基因表达下调有关。

t(8;21)急性髓性白血病特征和预后分析(英文)

t(8;21)是急性髓性白血病最常见的染色体异常之一。t(8;21)AML具有独特的临床特征,化疗缓解率较高,生存期较长,但亦有预后较差的报道。为进一步探讨中国人群t(8;21)AML的临床特征及预后因素,对75例t(8;21)AML患者,其中包括68例FABM2,5例M4,2例M5进行了回顾性分析。结果表明:39例患者骨髓中可见Auer小体(52%),而骨髓嗜酸细胞增多(>5%)见于5例(6.7%);免疫分型高表达CD34和HLADR,仅有13例患者表达CD19(20.9%);细胞遗传学分析示62.5%患者具有附加染色体异常,主要附加异常类型为性染色体丢失(LOS),+4,del(9q)及+8;通过常规诱导化疗,完全缓解率82.7%;随访1-96月,19例复发,中位复发时间为10.5月(3-42月),中位生存时间是20个月,5年预期生存率为32.3%;多因素分析显示染色体核型,髓外白血病,年龄及缓解后治疗方式是影响生存的主要预后因素;伴有附加染色体异常患者的生存期较单纯t(8;21)患者短(P=0.019),而不同附加异常之间无明显差异;髓外白血病亦是不良的预后因素(P=0.012),年龄≤15岁患者比年龄>15岁者生存期长(P=0.045);接受造血干细胞移植的患者的预后好于单纯化疗者(P=0.030)。结论:中国人群t(8;21)AML具有不同于其他人群的特性,其预后相对较差,尤其是伴有附加染色体异常及髓外白血病者预后更差;对于具有不良预后因素的t(8;21)AML患者应该建议接受造血干细胞移植。

PDCD5在成人急性髓性白血病骨髓细胞的异常表达

为了研究成人急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)骨髓细胞凋亡促进分子---PDCD5的表达,以探讨PDCD5在AML发病机制中的作用,利用21种不同荧光标记的单克隆抗体标记骨髓细胞,通过流式细胞术检测AML病人及正常人骨髓不同群细胞的胞内PDCD5的表达。部分标本进行蛋白印迹实验检测AML病人及正常人骨髓细胞内PDCD5的表达。结果表明:36例未治AML病人骨髓总的有核细胞内PDCD5平均荧光强度明显低于30例正常人组,分别为3059±1392:7432±1261(P<0.01),其中未治AML病人骨髓粒细胞、单核细胞、幼稚细胞及淋巴细胞内PDCD5平均荧光强度均低于相应的正常人组骨髓细胞,分别为3939±2121:8367±1045;3156±1635:5917±2329;2824±1592:3998±2106;1474±816:3355±2042(P值均小于0.01)。部分标本进行蛋白印迹检测的结果也显示AML病人骨髓细胞内PDCD5的表达低于正常人。结论:未治AML病人骨髓总有核细胞的PDCD5表达低于正常人,未治AML病人骨髓粒细胞、单核细胞、幼稚细胞及淋巴细胞内PDCD5表达均低于正常人组骨髓细胞。PDCD5的异常表达可能在AML的病理机制中起到一定的作用。

缺氧诱导因子-1α和PTEN、P53在急性髓性白血病骨髓基质细胞中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和PTEN、P53在急性髓性白血病骨髓基质细胞中的表达及意义。方法分离培养28例急性髓性白血病患者和22例正常对照样本骨髓基质细胞,RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达,免疫组织化学技术检测基质细胞HIF-1α和PTEN、P53蛋白表达和分布。结果急性髓细胞白血病(AML)组HIF-1αmRNA和蛋白表达率显著高于对照组(P<0.05),AML组P53蛋白表达率显著高于对照组(P<0.05),而PTEN表达率显著低于对照组(P<0.01)。HIF-1α在骨髓基质细胞的阳性表达与P53的高表达和PTEN的低表达相关联(P<0.05)。结论HIF-1α可能是白血病异常骨髓造血微环境形成过程中的重要调控因子,HIF-1α的表达可能与PTEN和P53基因表达调控相关。

三氧化二砷联合FLAG方案治疗复发急性髓性白血病及对白血病干细胞的影响

目的:探讨三氧化二砷(Arsenic Trioxide,AT)联合改良氟达拉滨+阿糖胞苷+粒系集落刺激因子(FLAG)方案治疗复发难治急性髓性白血病(AML)的疗效以及对白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)的作用。方法:10例难治和复发AML患者采用AT联合FLAG方案治疗,观察临床治疗效果,并检测治疗前后患者骨髓中LSC和P-gp阳性细胞数的变化。结果:10例患者经AT联合FLAG方案治疗,持续缓解时间平均8个月(4～12个月),完全缓解率(CR)3个月、6个月和12个月分别为80%、60%和25%。10例患者均出现了Ⅳ度骨髓抑制,但未出现其它严重不良反应,无1例在治疗过程中死亡。骨髓中P-gp^+细胞由治疗前的(23.55±2.75)%降为治疗后的(11.67±3.50)%;骨髓中LSC(CD34^+CD38^-CD123^+)的相对含量显著降低,治疗前和治疗后分别为(4.30±1.30)%和(2.60±0.70)%。结论:AT联合改良FLAG方案可有效诱导难治和复发急性髓性白血病患者缓解,并降低患者骨髓中白血病干细胞(LSC)和P-gp^+细胞的数量。

阿可拉定下调STAT5基因表达对急性髓性白血病发挥抗肿瘤作用

目的研究阿可拉定在体内外对急性髓性白血病(AML)的抗肿瘤作用及其对AML的重要靶点的影响。方法用MTT法测定阿可拉定在体外对MV-4-11细胞生长抑制作用,流式细胞分析不同浓度阿可拉定对MV-4-11细胞的凋亡和周期的影响,RT-PCR检测阿可拉定对FLT3和STAT5基因表达的影响,采用MV-4-11细胞NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型评价阿可拉定在体内抑制肿瘤生长的作用。结果MTT结果表明,阿可拉定能够明显抑制MV-4-11细胞生长,IC50为7.48μmol·L-1;在体外不同浓度的阿可拉定能够明显诱导MV-4-11细胞凋亡,使G0/G1期细胞比例升高且呈现浓度依赖性;体内实验表明,阿可拉定明显抑制荷瘤小鼠皮下瘤块的生长,且用药时间越早对控制肿瘤进展越有利。结论阿可拉定明显下调STAT5基因的表达,在体外能够明显抑制含FLT3-ITD突变体的MV-4-11细胞生长,在体内也表现出良好的抑制肿瘤生长的作用。

成人急性髓性白血病免疫学表型分析

目的:分析成人急性髓性白血病(AML)免疫学表型特征。方法:采用三色流式细胞仪(FCM),以CD45/SSC双参数散点图设门,对213例AML患者进行免疫学表型分析。结果:AML主要表达CD117(88.73%)、CD13(90.61%)、CD33(75.59%)、CD34(62.91%)、HLA-DR(63.85%)抗原;CD14和CD64在AML-M4中表达率为54.55%和31.82%,在AML-M5中表达率为40.00%和60.00%,CD14的特异性高于CD64。30.5%的AML患者伴有淋系抗原表达,主要是CD7(23.0%)。AML-M3患者CD117表达率为86.67%,CD34和HLA-DR表达率偏低(P<0.05)。结论:CD13、CD117和CD33联合应用更有利于确定髓性白血病。CD14和CD64有助于确定AML-M4、M5,前者特异性更强。CD34及HLA-DR低表达为AML-M3的特征。