以色列急性麻痹病毒LN株全基因克隆与遗传进化分析

研究旨在了解辽宁省以色列急性麻痹病毒(IAPV)的遗传进化特点。试验选取成年患病蜜蜂提取IAPV并进行PCR测序,选取China-BJ (GenBank登录号:KX421583.1)基因序列设计12对引物进行全基因克隆,将获得的基因序列与GenBank已公布的19株IAPV序列进行遗传进化分析。结果显示:试验成功分离出IAPV,并将其命名为IAPV-LN株(GenBank登录号:MZ269472.1)。IAPV-LN株与China-BJ和China-BJ2 (GenBank登录号:MG599488.1)同属一个分支。研究表明,丹东市某蜂场患病蜜蜂中分离得到的IAPV-LN株与China-BJ2、China-BJ的亲缘关系最近,可能来自同一个原始毒株。

以色列急性麻痹病毒(IAPV)研究进展

以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)是一种常见的蜜蜂病毒,于2007年被分离鉴定以来即被发现在世界范围内的不同蜜蜂种间广泛传播,并能侵染熊蜂和胡蜂等其他授粉昆虫。IAPV不仅对蜜蜂造成急性麻痹等症状,其与狄斯瓦螨(Varroa destructor)的协同作用也被认为与越冬期蜂群的大量损失密切相关。针对IAPV的研究多集中在流行病学和致病性上,关于其致病机制及防治方法方面的认识仍较缺乏。全面地对IAPV相关研究进行综述,以期全面认识这一对蜜蜂等授粉昆虫健康产生严重威胁的病毒。

以色列急性麻痹病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立以色列急性麻痹病毒(IAPV)荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中IAPV RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以体外转录制备的重组质粒标准品为模板,经过反应条件优化,建立了IAPV荧光定量RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对70份福建地区临床疑似IAPV感染的蜜蜂样品进行检测,并对阳性样品进行测序验证。结果显示,荧光定量RT-PCR方法的最佳引物和探针浓度分别为0.25μmol/L和0.20μmol/L,最佳退火温度为61℃。该方法仅对IAPV出现阳性扩增信号,对蜜蜂克什米尔病毒、蜜蜂慢性麻痹病毒、蜜蜂残翅病毒、蜜蜂急性麻痹病毒、蜜蜂黑蜂王台病毒、蜜蜂囊状幼虫病毒等6种病毒均未出现扩增,特异性较强;该方法对重组质粒标准品的最低检测限为9.7拷贝/μL,比普通RT-PCR敏感性高约100倍;该方法批内及批间变异系数均小于1.5%,重复性好。利用该方法和普通RT-PCR方法分别对70份临床样品进行检测,结果显示,两种方法的阳性检出率分别为31.4%(22/70)和27.1(19/70),二者的符合率为95.9%。本研究首次建立的IAPV Taq Man荧光定量RTPCR检测方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为IAPV的流行病学调查及其分子生物学的快速检测奠定了基础。

以色列急性麻痹病毒LN株VP2蛋白序列分析及B淋巴细胞抗原表位预测

为分析以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus, IAPV)LN株VP2蛋白的序列并预测B淋巴细胞抗原表位,试验以IAPV-LN株RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP2基因,通过BLAST序列比对获得IAPV-LN株VP2基因的核苷酸序列,并推导氨基酸序列,建立VP2蛋白的3D模型;用DNAStar软件中的Protean模块综合分析VP2蛋白的亲水性、柔性区域、表面可能性和抗原表位等。结果表明:IAPV-LN株VP2基因序列长度为810 bp,编辑了270个氨基酸,其与GenBank中公布的IAPV-BJ株(GenBank登录号为KX421583.1)核苷酸序列同源性为99%,氨基酸序列同源性为99%;与IAPV-BJ2(GenBank登录号为MG599488.1)株核苷酸序列同源性为98%,氨基酸序列同源性为99%。该蛋白是亲水性蛋白质,柔性区域和表面可能性区域较多;IAPV-LN株VP2蛋白空间构象比较规则,其可能形成抗原表位的区域是14~22,167~175,239~246位氨基酸处。

以色列急性麻痹病毒(IAPV)RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立以色列急性麻痹病毒（Israeli acute paralysis virus，IAPV）特异性核酸检测方法，本研究以IAPV polvmerase polyprotein基因为靶基因设计合成1对特异性引物，建立了IAPV的RTPCR检测方法。结果显示，对蜜蜂的5种不同病毒进行RT-PCR检测，只有IAPV病毒检测结果为阳性，具有良好的特异性；对IAPV的最低检测限为10^3拷贝／μL，具有较高的灵敏度；利用该检测方法对来自福建省不同养蜂场的8份蜜蜂样品进行检测，3份样品为阳性，通过序列比对分析，同源性超过99％，进一步证实为IAPV。结果表明，所建立的IAPV RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，具有良好的实用性。

蜜蜂以色列急性麻痹病毒(IAPV)研究进展

2006年冬季至2007年春季,美国发生了大范围的蜜蜂突然消失现象,类似的情况也发生在欧洲的部分地区,引发了严重的授粉危机。科学家对此展开了深入细致的研究并推测以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysisvirus,IAPV)很可能是蜂群崩溃失调病(colony collapse disorder,CCD)的致病因素。随着研究的深入,对CCD的致病因素及其发生机制有了更深入的认识,并趋向于认为多方面的致病因素可能导致了CCD的发生。本文综述了目前国内外对IAPV的研究进展。

检测蜜蜂急性麻痹病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立和初步应用

【背景】蜜蜂急性麻痹病毒(Acute Bee Paralysis Virus,ABPV)是一种高毒力的蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的大批死亡和蜂群衰竭。【目的】建立一种快速、灵敏的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法。【方法】根据ABPV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和探针,通过对引物、探针浓度和退火温度等反应条件进行优化,建立基于TaqMan探针检测ABPV的实时荧光RT-PCR方法,并对方法的灵敏性、特异性和稳定性进行验证。【结果】ABPV实时荧光RT-PCR检测方法在9.8×101-9.8×108 copies/μL之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2为0.998,扩增效率为103.8%。该方法的检测灵敏度为9.8copies/μL;对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别为0.19%-0.80%和0.57%-1.07%,重复性良好。对2018年-2019年在福建地区采集的70份蜜蜂样品进行ABPV检测,阳性率为2.86%。【结论】建立的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法能用于该病的实验室检测、流行病学调查和疫情监测。

蜜蜂KBV和APV病毒RT-PCR检测技术研究

根据蜜蜂克什米尔病毒(Kashmirbeevirus,KBV)和急性麻痹病毒(Acuteparalysisvirus,APV)的RNA聚合酶基因序列,参照DonStoltz报道的引物KBV1、KBV2,美国农业部提供的引物DC62F、DC682R,对美国农业部惠赠的标准KBV和APV的RNA聚合酶基因片段,以及2001-2002年收集到的中国21个省市的180份疑似KBV和APV病蜂RNA聚合酶基因片段进行RT-PCR。对以KBV1、KBV2和DC62F、DC682R为引物扩增出的RNA聚合酶基因片段进行克隆、转化,并对克隆结果测序,证明其可靠性。建立了用分子生物学方法检测蜜蜂KBV和APV病毒的技术,有一定的应用前景。检测结果表明:到目前为止,我国蜜蜂群中未发现KBV和APV病毒病。

蜜蜂麻痹病研究进展

蜜蜂麻痹病是一种由慢性麻痹病毒或急性麻痹病毒引起的成年蜜蜂传染病,给养蜂生产带来严重损失。发病的蜜蜂通常表现为身体颤抖,丧失飞行能力,出现爬行现象。本文对急性麻痹病毒、慢性麻痹病毒以及麻痹病的传播途径、患病特征和检测技术等进行综述,以期为生产实践中防控和治疗蜜蜂麻痹病提供理论依据。

秋末蜜蜂病毒病混合感染诊断实例

山东莒县部分乡镇蜂群短期内死亡严重,通过对典型发病蜂场临床症状调查和实验室病毒检测,确诊发病蜂场病因主要为蜜蜂以色列急性麻痹病毒、克什米尔病毒、残翅病毒混合感染,究其原因为秋季治螨不彻底、蜂群饲喂不足、饲养管理不善所造成,建议蜂农更新养殖理念,饲养强群,彻底治螨,搞好蜂场环境卫生,在蜜源匮乏季节要及时饲喂,避免盗蜂发生,从而提高蜂群的抗病能力。

蜂群崩溃失调病(CCD)研究进展

2006年冬到2007年春,蜂群崩溃失调病(colony collapse disorder,简称CCD)在世界范围内流行,已造成巨大损失。CCD是指意蜂蜂群中大量的成年工蜂短时间内突然在巢外失踪,没有发现尸体,只剩下蜂王、卵、一些未成年的工蜂和大量蜜粉残留于巢脾内的症状。到目前为止,经调查发现以色列急性麻痹病毒(Israeliacute paralysis virus,IAPV)是导致CCD的最大嫌疑,但CCD的确切致病机理尚未揭开。本文综述了CCD的主要症状、可能的致病原因等方面的研究进展,提出若干需要高度关注的问题,以及防范CCD的措施。

河南省2009年急性弛缓性麻痹病原流行病学分析

目的了解河南省2009年急性弛缓性麻痹病例的监测情况。方法采集532例AFP病例标本,进行病原流行病学分析。结果分离到PV15株,阳性率为2.82%,其中PVⅡ型占所有分离PV的40%;分离到NPEV118株,阳性率为22.2%;口服脊灰减毒活疫苗＂零＂剂次免疫的AFP病例的PV分离率依次高于12次和≥3次免疫者;79例60d后随访残留麻痹的病例PVⅡ分离率为7.59%。结论 AFP病例实验室监测系统是敏感的,做好OPV常规免疫和强化免疫同样重要,PVⅡ对部分未完成全程免疫的AFP病例是一种潜在的致麻痹病因。

北京地区六种蜜蜂病毒病的流行病学研究

【目的】对蜜蜂的6种病毒:以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)、残翅病毒(Deformed wing virus,DWV)、囊状幼虫病病毒(Sacbrood virus,SBV)、急性蜜蜂麻痹病毒(Acute bee paralysis virus,ABPV)、黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)、慢性麻痹病毒(Chronic bee paralysis virus,CBPV)在北京地区的流行情况进行调查,以期为该地区蜜蜂病毒病的防控提供一定的理论依据。【方法】应用多重RT-PCR法确定上述6种病毒在该地区的感染情况,并通过序列分析确定特异性。【结果】在所有检测样本中均未检测到急性麻痹病病毒和慢性麻痹病病毒,感染率最高的是以色列急性麻痹病毒,其次是残翅病毒。检测的样本普遍存在混合感染。【结论】以色列急性麻痹病毒、残翅病毒、囊状幼虫病病毒、黑蜂王台病毒4种病毒可能在北京地区广泛分布。