血清金属蛋白酶组织抑制剂3和性别决定区Y框蛋白2在2型糖尿病肾损伤早期诊断中的临床应用

目的探究血清金属蛋白酶组织抑制剂3(tissue inhibitors of metalloproteinases 3,TIMP3)和性别决定区Y框蛋白2(transcription factor determining region Y box protein 2,SOX2)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)肾损伤的早期诊断。方法选取2022年4月至2023年4月在华北石油管理局总医院就诊的102例T2DM患者为研究对象,根据24 h尿蛋白排泄率(uri-nary albumin excretion rate,UAER)将T2DM患者分为肾损伤组(n=40)和无肾损伤组(n=62),另选取同期在华北石油管理局总医院行体检的健康者50名为对照组。酶联免疫吸附法测定所有受试者血清TIMP3、SOX2水平;比较3组受试者一般资料、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)、UAER、血肌酐(serum creatinine,Scr)、估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、血清TIMP3、SOX2水平;Pearson相关性分析血清TIMP3与SOX2及两者与HbA1c、UAER、Scr、eGFR之间的关系;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清TIMP3、SOX2对T2DM患者肾损伤的诊断价值。结果T2DM患者血清TIMP3[(0.68±0.17)μg/L比(1.35±0.35)μg/L]及eGFR[(105.99±20.56)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))比(133.15±26.18)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)]显著低于对照组(P<0.05),且肾损伤患者血清TIMP3[(0.47±0.11)μg/L比(0.82±0.21)^(-1)μg/L]及eGFR[(74.69±10.22)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))比(126.18±27.23)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)]显著低于无肾损伤患者(P<0.05);血清SOX2[(8.91±1.82)kU/L比(5.15±1.31)kU/L]及HbA1c[(8.80±1.55)%比(5.52±0.83)%]、UAER[(70.13±18.06)mg/24 h比(13.22±3.61)mg/24 h]、Scr[(82.14±15.23)µmol/L比(53.19±5.62)µmol/L]显著高于对照组(P<0.05),且肾损伤患者血清SOX2[(10.81±2.13)kU/L比(5.15±1.31)kU/L]及UAER[(156.83±40.29)mg/24 h比(13.22±3.61)mg/24 h]、Scr[(113.77±13.58)µmol/L比(53.19±5.62)µmol/L]显著高于无肾损伤患者(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,TIMP3与UAER、Scr、HbA1c呈显著负相关(P<0.05),与eGFR呈显著正相关(P<0.05);SOX2与UAER、Scr、HbA1c呈显著正相关(P<0.05),与eGFR呈显著负相关(P<0.05);血清TIMP3与SOX2呈显著负相关(r=-0.590,P<0.05)。ROC结果显示,血清TIMP3联合SOX2诊断T2DM患者肾损伤的敏感度和特异度分别为95.0%、85.3%,显著高于TIMP3、SOX2单独测定。结论T2DM肾损伤患者血清TIMP3水平显著降低,SOX2水平显著升高,且两者与T2DM患者肾损伤密切相关,可用于T2DM患者肾损伤早期诊断。

胰腺癌组织中星形胶质细胞上调基因-1、性别决定区Y框蛋白2的表达及与患者临床特征和微血管密度的关系

目的探讨胰腺癌组织中星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的表达及与患者临床特征和微血管密度(MVD)的关系。方法收集原发性胰腺癌患者的胰腺癌组织80例和癌旁组织80例,采用免疫组织化学染色法检测胰腺癌组织和癌旁组织中AEG-1、SOX2的表达情况及MVD,分析胰腺癌组织中AEG-1、SOX2表达情况与胰腺癌患者临床特征和MVD的关系。结果胰腺癌组织和癌旁组织中AEG-1、SOX2表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。低分化、有淋巴结转移胰腺癌患者胰腺癌组织中AEG-1、SOX2高表达率分别高于中高分化、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,低分化、有淋巴结转移均是SOX2高表达的独立危险因素(P﹤0.05)。AEG-1、SOX2高表达胰腺癌组织中MVD均明显高于AEG-1、SOX2低表达的胰腺癌组织(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,AEG-1、SOX2表达均与MVD呈正相关。结论胰腺癌组织中AEG-1、SOX2高表达,且与胰腺癌分化程度、淋巴结转移情况有关,AEG-1、SOX2表达与MVD均呈正相关。

血管内皮生长因子和性别决定区Y框蛋白2在胃癌中的表达及与预后的关系

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和性别决定区Y框蛋白2(SOX2)在胃癌组织中的表达及其与临床病理和预后的意义。方法收集2012年3月至2017年12月皖北煤电集团总医院病理科存档的胃癌手术标本40例,应用免疫组化检测40例胃癌和32例癌旁组织中VEGF和SOX2的表达情况,观察胃癌病人VEGF和SOX2的表达情况并分析与不同病理特征和生存的相关性。结果①胃癌组织中VEGF与SOX2的表达率分别为70.0%及65.0%,癌旁组织中分别是46.4%及37.5%,均差异有统计学意义(P<0.05)。②VEGF的高表达与胃癌病人低分化、局部更深浸润、出现淋巴结转移及高临床分期有关(P<0.05),SOX2的高表达与胃癌病人出现淋巴结转移及高临床分期有关(P<0.05)。③Spearman相关性分析发现,在胃癌中VEGF的表达与SOX2的表达呈正相关关系(r=0.375,P=0.017)。生存分析显示胃癌病人中VEGF及SOX2同时高表达与VEGF或SOX2单独高表达或不表达相比具有较差的预后(P<0.05)。结论VEGF和SOX2的高表达水平可能促进胃癌的发生、发展和侵袭,并且预示着病人有着更差的预后,有望成为胃癌诊断、治疗和预后判断的一个靶标。

性别决定区Y框蛋白2、含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5在宫颈癌中的表达及与临床病理特征的关系分析

目的探讨性别决定区Y框蛋白2(Sox-2)、含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(Lgr5)在宫颈癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法收集2016年3月至2017年9月郑州市妇幼保健收治的经病理检查证实的74例宫颈癌、39例宫颈上皮内瘤变及36例正常宫颈组织石蜡包埋标本,应用免疫组化S-P法检测上述组织标本Sox-2、Lgr5蛋白表达情况,并分析Sox-2、Lgr5蛋白表达与宫颈癌患者性别、体质量、病理类型、肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移之间的关系。结果Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率分别为77.03%、79.73%,均高于宫颈上皮内瘤变组织(38.46%、41.03%)和正常宫颈组织(5.56%、2.78%),差异均有统计学意义(P均<0.05)。Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率与患者性别、体质量、病理类型均无关(P均>0.05);Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率与患者的肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关,肿瘤分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移患者Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率高于肿瘤分化程度为高中分化、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤浸润深度为T1~T2及无淋巴结转移患者(P均<0.05)。结论Sox-2、Lgr5在宫颈癌中均呈高表达,且表达水平与患者疾病进展有着密切关系。

非小细胞肺癌组织中性别决定区Y框蛋白2、糖原合成酶激酶-3β表达观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达变化,并探讨其意义。方法选择西部战区总医院存档的NSCLC及其对应癌旁组织石蜡标本各42例份(分别记为肿瘤组和癌旁组),采用免疫组化SP法检测两组SOX2、GSK-3β,分析两者间及其与NSCLC临床病理参数的相关性。结果肿瘤组和癌旁组SOX2阳性率分别为73.8%、4.8%,GSK-3β阳性率分别为47.6%、100%,两组比较,P均<0.05。SOX2表达与NSCLC分化程度呈负相关,GSK-3β表达与NSCLC是否发生淋巴结转移呈正相关(P均<0.05)。非小细胞肺癌组织中SOX2与GSK-3β表达无相关性(P>0.05)。结论NSCLC组织中SOX2表达升高,GSK-3β表达降低,SOX2和GSK-3β的表达与NSCLC的发生发展可能有关,有望成为NSCLC早期诊断及预测预后的生物学标记物。

子宫内膜癌中性别决定区Y框蛋白-2表达及与血管生成的关系

目的检测子宫内膜癌中性别决定区Y框蛋白(SOX)-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,关注二者与白细胞分化抗原(CD)34标记的微血管密度(MVD)的关系。方法 56例子宫内膜癌根治手术后存留的蜡块组织作为观察组,25例无明显病变的子宫内膜组织作为对照组,采用免疫组化方法检测两组中SOX-2、VEGF和CD34的表达。结果两组中SOX-2和VEGF表达的阳性率及MVD值差异显著。观察组中SOX-2和VEGF的阳性率和MVD值与肿瘤的最大径和Ki67标记的增殖指数密切相关。VEGF的阳性率与淋巴结转移和脉管累犯密切相关。观察组中SOX-2和VEGF的阳性率和MVD值均与年龄、分化程度无明显相关性。相关分析显示观察组中SOX-2和VEGF、SOX-2和MVD值之间无明显相关性。结论子宫内膜癌中SOX-2低表达、VEGF和MVD高表达对肿瘤的发生和进展均有重要作用。子宫内膜癌中SOX-2对血管的形成无明显作用。

下调性别决定区Y框蛋白9对口腔鳞癌细胞上皮间质转化及克隆能力的影响

目的探讨下调性别决定区Y框蛋白9(SOX9)对口腔鳞癌(OSCC)细胞上皮间质转化(EMT)及克隆能力的影响。方法 OSCC BcaCD885细胞中转染si RNA control、SOX9 siRNA,同时以不做任何转染的细胞作为control组。实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot筛选干扰效果较好的SOX9 siRNA1做后续研究。细胞克隆实验测定细胞克隆形成能力,免疫荧光检测上皮钙黏附素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达,Western blot检测E-cadherin、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Vimentin、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移。结果 SOX9 siRNA组细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平均明显低于control组(P<0.05)。SOX9siRNA1细胞克隆形成数目、细胞侵袭和迁移数目明显降低,并且细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平也明显降低,与control组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。SOX9 siRNA1组细胞中Vimentin表达水平降低,而E-cadherin表达水平升高,细胞EMT受到抑制,与control组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论下调SOX9可抑制OSCC细胞EMT和克隆形成,以及细胞侵袭和迁移。

微小RNA-202和转录因子性别决定区Y框蛋白9在膀胱癌组织中表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨微小RNA 202(miR-202)和转录因子性别决定区Y框蛋白9(Sox9)在膀胱癌中的表达及与临床预后的关系。方法选取2012年6月至2013年12月河南大学第一附属医院肿瘤科收治的120例行切除术的膀胱癌病人作为研究对象,收集癌组织(n=120)及癌旁正常组织(n=120),采用免疫组化检测组织中Sox9蛋白表达,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测癌组织及癌旁组织中miR-202和Sox9表达量,观察两组组织中miR-202、Sox9表达水平、与临床病理参数关系、二者相关性及与病人预后关系。结果膀胱癌组织中Sox9阳性表达率为70.83%,癌旁组织为31.67%,差异有统计学意义(P<0.05);膀胱癌组织中miR-202水平低于癌旁组织(P<0.05),Sox9水平高于癌旁组织(P<0.05);miR-202、Sox9表达与年龄、性别、肌层浸润无关(P>0.05),与病理分级及淋巴结转移相关(P<0.05);膀胱癌组织中miR-202和Sox9表达呈负相关性(r=-0.835,P=0.000);膀胱癌组织中miR-202高表达病人中位生存时间为(48.61±1.82)个月,高于低表达组的(37.99±2.47)个月(P<0.05),miR-202高表达病人预后5年生存率为52.94%,高于低表达组的30.77%(P<0.05);Sox9高表达病人中位生存时间为(39.78±2.60)个月,低于低表达组的(49.62±1.90)个月(P<0.05),Sox9高表达病人预后5年生存率为38.18%,低于低表达组的60.00%(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、Sox9是影响病人预后的独立危险因素,miR-202是影响膀胱癌病人预后的保护因素。结论膀胱癌组织中miR-202低表达,Sox9高表达,二者表达呈正相关,与病人病理分级及淋巴结转移相关,miR-202低表达与Sox9高表达生存期短,预后差,可能作为膀胱癌预后评估的潜在标记物。

性别决定区Y框蛋白9诱导人口腔鳞状细胞癌CAL27微管形成和上皮间质转化的机制初探

目的探究性别决定区Y框蛋白9(SOX9)对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)CAL27微管形成和上皮间质转化的影响及其作用机制。方法设计合成SOX9-shRNA1和SOX9-shRNA2,将SOX9-shRNA1和SOX9-shRNA2转染到CAL27细胞中,实时荧光定量聚合酶链反应检测SOX9的表达水平;微管形成实验检测微管结节数目的变化;免疫荧光检测波形蛋白(Vimentin)的含量;免疫印迹法检测钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、纤连蛋白(Fibronectin)、Wnt、β-连环蛋白(β-catenin)和T细胞4(TCF-4)蛋白的相对表达量。结果SOX9-shRNA1和SOX9-shRNA2转染CAL27细胞后,SOX9的表达水平显著降低(F=578.000,P=0.000;F=96.850,P=0.000)。干扰SOX9后可抑制OSCC细胞上皮间质转化。干扰SOX9后微管结节数目和Vimentin阳性细胞数显著减少(F=169.700,P=0.000);E-cadherin蛋白表达水平显著升高(F=181.400,P=0.000);N-cadherin、Fibronectin、Wnt、β-catenin、TCF-4蛋白表达水平显著降低(N-cadherin:F=101.400,P=0.000;Fibronectin:F=122.300,P=0.000;Wnt:F=70.290,P=0.000;β-catenin:F=81.740,P=0.000;TCF-4:F=37.020,P=0.000)。结论干扰SOX9降低Vimentin的含量,抑制微管形成,影响上皮间质转化标记分子的蛋白表达以及抑制Wnt/β-catenin通路的激活,结果表明SOX9可诱导人OSCC细胞CAL27微管形成和上皮间质转化,这一作用与Wnt/β-catenin通路激活抑制存在关联。

松果菊苷通过性别决定区Y框蛋白4对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:研究松果菊苷(Echinacoside)对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法:胃癌AGS细胞分成对照组和Echinacoside组,对照组不用松果菊苷处理,Echinacoside组分别用5,10,20,40,80μmol·L^(-1)的松果菊苷培养。CCK-8法检测细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、性别决定区Y框蛋白4(SOX4)蛋白表达。在胃癌AGS细胞中转染SOX4过表达载体,给予松果菊苷处理,同样测定细胞增殖、周期、凋亡和Bax、Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、SOX4蛋白表达。结果:5,10μmol·L^(-1)的松果菊苷处理后的胃癌AGS细胞光密度(OD)值无明显变化,20,40,80μmol·L^(-1)的松果菊苷处理后的胃癌AGS细胞OD值明显降低(P<0.05),因此选择20,40,80μmol·L^(-1)松果菊苷处理胃癌AGS细胞。与对照组比较,Echinacoside组(20,40,80μmol·L^(-1)松果菊苷处理)胃癌AGS细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、SOX4蛋白表达水平下降,并且松果菊苷对胃癌AGS细胞周期和凋亡的影响随着作用浓度的升高而增加(P<0.05)。SOX4过表达载体能够逆转松果菊苷对胃癌AGS细胞增殖抑制、周期阻滞、凋亡促进、Bax蛋白表达促进和Bcl-2、Cyclin D1、CDK4、SOX4蛋白抑制作用(P<0.05)。结论:松果菊苷通过SOX4抑制胃癌AGS细胞增殖并诱导细胞凋亡。

性别决定区Y框蛋白18在肿瘤中的研究进展

性别决定区Y框蛋白(SOX)18是转录因子SOX家族中的一员。在胚胎发育时期,SOX18对心脏发生和血管及淋巴管的生成至关重要,SOX18的突变或表达异常参与了多种疾病的发生。近年研究证实,SOX18的异常表达也参与了多种肿瘤的发生、发展及转移,本文总结了SOX18的功能特性及其在肿瘤中的研究进展。

Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9和周期素依赖性激酶4在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义

目的 探究Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9(SOX9)和周期素依赖性激酶4(CDK4)在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义。方法 选取中国人民解放军第八十二集团军医院2015年1月至2017年6月收治的结直肠癌病人病理组织标本(结直肠癌组)94例及癌旁正常结直肠组织(正常结直肠组)39例,另取同时期结直肠息肉病人结直肠息肉组织(结直肠息肉组)51例。采用免疫组织化学SP染色法检测SOX9、CDK4的表达情况,分析SOX9、CDK4表达与结直肠癌病人临床病理参数之间的关系;对结直肠癌病人进行术后复查随访,分析结直肠癌病人生存情况。结果 SOX9在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为10.26%(4/39)、27.45%(14/51)、76.59%(72/94),差异有统计学意义(P<0.05);CDK4在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为7.69%(3/39)、21.57%(11/51)、54.84%(51/94),差异有统计学意义(P<0.05);正常结直肠组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠息肉组织、结直肠癌组织(P<0.05),结直肠息肉组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠癌组织(P<0.05)。结直肠癌病人病理组织SOX9、CDK4表达与肿瘤分化程度、临床分期、是否合并淋巴结转移有关(P<0.05);结直肠癌组织SOX9与CDK4表达呈正相关(r=0.58,P<0.001),由TCGA数据库检索结直肠癌组织SOX9、CDK4基因表达相关性显示,二者之间亦呈正相关(r=0.40,P<0.001);SOX9高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为44.6%、72.4%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=8.31,P=0.004);CDK4高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为25.6%、76.5%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=36.36,P<0.001)。结论 SOX9和CDK4在结直肠癌组织、结直肠息肉组织、正常结直肠组织中的阳性表达率逐渐降低,与结直肠癌肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及预后有关,可能参与结直肠癌的发生发展过程。

尾型同源盒转录因子2基因及转录因子性别决定区Y框蛋白2在结直肠癌中的表达及其临床意义

尾型同源盒转录因子2基因（CDX2）与结直肠癌的发生和分化密切相关，性别决定区Y框蛋白2（SOX2）在肿瘤细胞的自我更新中起重要作用。本研究旨在探讨对结直肠癌患者CDX2和SOX2的蛋白表达水平与临床病理特征的相关性。

SOX4和SOX12基因在多发性骨髓瘤中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性

目的探讨性别决定区Y框蛋白4(SOX4)和性别决定区Y框蛋白12(SOX12)基因在多发性骨髓瘤患者血清中的表达,及其与临床病理特征及预后的相关性。方法选取2019年5月至2020年5月该院诊治的87例多发性骨髓瘤患者作为研究组,对患者进行3年随访,根据3年内的预后情况分为生存组和死亡组,另选取同期在该院体检的87例健康者作为对照组。采用Pearson相关分析SOX4基因表达水平与SOX12基因表达水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析SOX4和SOX12基因对多发性骨髓瘤患者预后的预测效能;采用Kaplan-Meier生存曲线分析多发性骨髓瘤患者SOX4和SOX12基因表达与患者生存率的关系。结果研究组SOX4和SOX12基因表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);多发性骨髓瘤患者SOX4基因表达水平与SOX12基因表达水平呈正相关(r=0.689,P<0.05);不同ISS分期多发性骨髓瘤患者SOX4、SOX12基因表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同SOX4、SOX12基因表达情况多发性骨髓瘤患者HbA1c、CRP、PLT、血清钙水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组SOX4和SOX12基因表达水平均高于生存组,差异均有统计学意义(P<0.05);SOX4和SOX12基因单独检测评估多发性骨髓瘤患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.631、0.771,二者联合检测的AUC为0.839,AUC明显大于SOX4和SOX12基因各自单独检测的AUC(Z二者联合与SOX4=2.142、P=0.032,Z二者联合与SOX12=3.833、P<0.001);SOX4基因高表达患者3年生存率(63.64%)低于SOX4基因低表达患者(83.08%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.544,P=0.033),且生存时间也少于SOX4基因低表达患者;SOX12基因高表达患者3年生存率(53.84%)低于SOX12基因低表达患者(82.43%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.402,P=0.011),且生存时间也少于SOX12基因低表达患者。结论多发性骨髓瘤患者SOX4和SOX12基因表达水平与临床病理特征及预后关系密切,二者联合检测对多发性骨髓瘤患者的预后具有较高预测效能。

性别决定区Y框蛋白2与妇科恶性肿瘤相关性研究进展

性别决定区Y框蛋白（SRY—related HMG—box，sox）基因家族最早由Gubbay等在Y染色体缺失的小鼠内发现。该基因家族主要编码一组进化上高度保守、结构上与SRY／sry（哺乳动物性别决定基因）相关的核转录因子。其共同特点含有一个高度保守的高迁移率族蛋白盒（high mobility group box，HMG—box）DNA结合域，通过与靶基因G结构域特异结合，在调控胚胎及组织的发育，干细胞的多能性、增殖、保持不分化状态、细胞分裂和决定细胞命运等方面具有重要作用，且作为转录因子与多种肿瘤的发生发展密切相关。

性别决定区Y框蛋白9基因的AdMax系统重组腺病毒载体的构建及其表达

目的 利用AdMax包装系统构建性别决定区Y框蛋白9（SOX9）基因重组腺病毒载体并对其进行鉴定。方法 应用聚合酶链反应（PCR）对SOX9基因进行扩增,重组入线性化的pAV-MCMV-绿色荧光蛋白（GFP）-3FLAG,后转化入DH5a感受态细胞,得到的转化子用菌落PCR进行鉴定,鉴定无误后,通过AdMax腺病毒包装系统转染HEK293细胞,并在其中包装成熟、扩增。用Western blot法对SOX9基因重组腺病毒进行检测,并把获得的病毒DNA进行PCR鉴定和滴度测定。结果获得的病毒DNA进行PCR鉴定,得到1 565 bp的片段,大小与SOX9基因相一致,证实SOX9基因片段已经重组进入腺病毒。Western blot检测中,在72×10395×103间可见大小与SOX9-GFP-Flag的融合蛋白（86×103）相吻合的阳性条带,病毒滴度为2.3×1011PFU/ml,表明SOX9蛋白成功表达。结论 成功建立安全、稳定、有效的SOX9基因重组腺病毒载体。

过表达性别决定区Y框蛋白7基因对骨肉瘤细胞生长及免疫逃逸相关因子表达的影响

目的:探讨过表达性别决定区Y框蛋白7(SOX7)基因对骨肉瘤MG-63细胞活力、周期、凋亡、Wnt/β-catenin信号及免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达的影响。方法:将人骨肉瘤MG-63细胞分为空白组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-SOX7组,pcDNA3.1转染参照Lipofectamine 2000试剂盒说明书。通过CCK-8法检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞24~72 h的细胞活力;流式细胞仪检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞48 h的细胞周期和凋亡率。Western Blot检测SOX7、β-catenin、cyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达。结果:pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞后,细胞中SOX7蛋白表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,G_(0)/G_(1)期细胞百分比明显升高,G_(2)/M期和S期百分比明显降低,β-catenin、CyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达SOX7基因可抑制骨肉瘤MG-63细胞活力,阻碍细胞周期进程,诱导细胞凋亡,抑制免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

腺相关病毒介导的成骨蛋白-1和性别决定区Y框蛋白9双基因联合转染兔退变椎间盘的生物学效应

目的 观察腺相关病毒（AAV）介导的成骨蛋白-1（OP-1）和性别决定区Y框蛋白9（SOX9）双基因体内转染对兔退变椎间盘的影响.方法 针刺损伤法制作兔退变椎间盘模型,于4周后,分别于造模椎间盘髓核内注射20μl双基因混合液（1∶1）、重组AAV（rAAV）-OP-1、rAAV-SOX9、rAAV-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、磷酸盐缓冲液（PBS）,于转染后9周行MRI观察椎间盘变化,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Ⅱ型胶原mRNA及蛋白多糖mRNA的变化.结果 MRI显示双基因组T2加权像信号强度明显恢复,与SOX9、OP-1组比差异有统计学意义（P＜0.05）；RT-PCR证实双基因组Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达量均明显高于单一SOX9及OP-1组（P＜0.05）.结论 SOX9及OP-1双基因联合转染治疗退变椎间盘组织具有明显作用；双基因治疗椎间盘退变具有协同效用.

细胞分裂周期蛋白42、性别决定区Y框蛋白2在骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织的表达及其临床意义

目的检测细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)和性别决定区Y框蛋白2(SOX2)在骨软骨瘤组织、骨肉瘤组织中的表达, 探讨Cdc42和SOX2与骨肉瘤临床病理因素及预后之间的关系。方法采用免疫组织化学法检测2018年3月至2022年11月青岛市中医医院病理确诊的96例骨肉瘤组织和35例骨软骨瘤组织中Cdc42和SOX2的表达, 采用χ^(2)检验进行统计学分析。结果 Cdc42在骨肉瘤组织中阳性表达率为62.50%(60/96), 明显高于骨软骨瘤组织中阳性表达率[11.43%(4/35)], 差异有统计学意义(χ^(2)=26.774, P<0.01)。Cdc42表达水平与骨肉瘤患者恩内金分期(Eneeking分期)、肺转移明显相关(χ^(2)=5.039、5.248, P<0.05), Cdc42表达水平与骨肉瘤患者病变部位、性别、组织类型、年龄、软组织浸润、ALP水平无相关(χ^(2)=0.012、0.183、0.027、0.028、0.200、0.072, P>0.05)。SOX2在骨肉瘤组织中阳性表达率为42.71%(41/96), 明显高于骨软骨瘤组织中阳性表达率[8.57%(3/35)], 差异有统计学意义(χ^(2)=13.399, P<0.01)。SOX2表达水平与骨肉瘤患者Eneeking分期、软组织浸润、肺转移明显相关(χ^(2)=4.690、5.243、6.152, P<0.05), SOX2表达水平与骨肉瘤患者病变部位、性别、组织类型、年龄、ALP水平无相关(χ^(2)=0.051、0.001、0.083、0.002、0.319, P>0.05)。结论 Cdc42和SOX2在骨肉瘤组织中表达上调, 联合检测Cdc42和SOX2有助于判断骨肉瘤生物学行为和预后。

微小RNA-342-3p靶向性别决定区Y框蛋白6对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-342-3p靶向性别决定区Y框蛋白6(SOX6)对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其分子机制。方法:选取2021年6月至2022年6月驻马店市中心医院收集的121例原发性肝癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分析肝癌组织和癌旁组织miR-342-3p表达水平;采用miRNA对照和miR-342-3p过表达慢病毒感染人肝癌细胞HepG2,构建miRNA对照组和miR-342-3p组细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和体外移植瘤实验分析miRNA对照组和miR-342-3p组细胞的增殖;采用流式细胞术分析两组细胞的周期变化;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)凋亡试剂盒分析两组细胞的凋亡水平;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-342-3p的靶基因;蛋白质免疫印迹(Western blot)分析蛋白质表达水平。组间计数资料比较采用t检验。结果:肝癌组织中miR-342-3p表达水平(1.23±0.22)明显低于癌旁组织表达水平(0.71±0.14),差异有统计学意义(t=21.710,P<0.05)。miRNA对照组细胞吸光度(A)值(2.02±0.13)明显高于miR-342-3p组(1.61±0.09),差异有统计学意义(t=6.441,P<0.05)。miRNA对照组细胞克隆形成率[(85.92±4.95)%]明显高于miR-342-3p组[(59.06±4.39)%],差异有统计学意义(t=9.942,P<0.05)。miRNA对照组细胞体内成瘤体积[(690.67±72.49)mm 3]明显高于miR-342-3p组[(59.06±4.39)mm 3],差异有统计学意义(t=9.942,P<0.05)。miRNA对照组细胞G 0/G 1期百分比[(41.33±2.58)%]明显低于miR-342-3p组[(58.33±2.93)%],差异有统计学意义(t=10.980,P<0.05)。miRNA对照组细胞S期百分比[(39.17±2.71)%]明显高于miR-342-3p组[(28.33±3.31)%],差异有统计学意义(t=5.911,P<0.05)。miRNA对照组细胞凋亡率[(2.63±0.95)%]明显低于miR-342-3p组[(16.33±2.29)%],差异有统计学意义(t=13.510,P<0.05)。SOX6是miR-342-3p的靶基因。癌旁组织中miR-342-3p靶基因SOX6表达水平(1.01±0.12)明显低于肝癌组织表达水平(2.00±0.14),差异有统计学意义(t=18.924,P<0.05)。miRNA对照组细胞SOX6蛋白表达水平(1.19±0.17)明显高于miR-342-3p组(0.62±0.11),差异有统计学意义(t=6.924,P<0.05)。结论:miR-342-3p在肝癌组织中呈低表达,通过靶向调节SOX6蛋白表达水平促进肝癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡水平。