SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

子宫内膜癌中性别决定区Y框蛋白-2表达及与血管生成的关系

目的检测子宫内膜癌中性别决定区Y框蛋白(SOX)-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,关注二者与白细胞分化抗原(CD)34标记的微血管密度(MVD)的关系。方法 56例子宫内膜癌根治手术后存留的蜡块组织作为观察组,25例无明显病变的子宫内膜组织作为对照组,采用免疫组化方法检测两组中SOX-2、VEGF和CD34的表达。结果两组中SOX-2和VEGF表达的阳性率及MVD值差异显著。观察组中SOX-2和VEGF的阳性率和MVD值与肿瘤的最大径和Ki67标记的增殖指数密切相关。VEGF的阳性率与淋巴结转移和脉管累犯密切相关。观察组中SOX-2和VEGF的阳性率和MVD值均与年龄、分化程度无明显相关性。相关分析显示观察组中SOX-2和VEGF、SOX-2和MVD值之间无明显相关性。结论子宫内膜癌中SOX-2低表达、VEGF和MVD高表达对肿瘤的发生和进展均有重要作用。子宫内膜癌中SOX-2对血管的形成无明显作用。

过表达性别决定区Y框蛋白7基因对骨肉瘤细胞生长及免疫逃逸相关因子表达的影响

目的:探讨过表达性别决定区Y框蛋白7(SOX7)基因对骨肉瘤MG-63细胞活力、周期、凋亡、Wnt/β-catenin信号及免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达的影响。方法:将人骨肉瘤MG-63细胞分为空白组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-SOX7组,pcDNA3.1转染参照Lipofectamine 2000试剂盒说明书。通过CCK-8法检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞24~72 h的细胞活力;流式细胞仪检测pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞48 h的细胞周期和凋亡率。Western Blot检测SOX7、β-catenin、cyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达。结果:pcDNA3.1-SOX7转染MG-63细胞后,细胞中SOX7蛋白表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,G_(0)/G_(1)期细胞百分比明显升高,G_(2)/M期和S期百分比明显降低,β-catenin、CyclinD1、Survivin、VEGF和TGF-β1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达SOX7基因可抑制骨肉瘤MG-63细胞活力,阻碍细胞周期进程,诱导细胞凋亡,抑制免疫逃逸相关VEGF和TGF-β1表达,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

大鼠S100A8基因启动子质粒的构建及其SOX7结合元件的初步鉴定

目的:构建大鼠S100钙结合蛋白A8(S100A8)基因启动子荧光素酶报告质粒,并在HEK-293T中检查过表达性别决定区Y框蛋白7(SOX7)基因对S100A8启动子活性的影响,同时筛选可能的SOX7结合元件。方法:采用PCR技术扩增大鼠S100A8启动子全长,经双酶切后连接到pGL3-basic中,命名为pGL3-S100A8-FL。将pGL3-S100A8-FL与前期构建的pIRES2-SOX7质粒共转染HEK-293T,再测定荧光素酶活性。此外,运用JASPAR预测S100A8启动子区可能包含的SOX7结合元件,并依此构建4个启动子截短质粒(即pGL3-S100A8-1~4)。将pGL3-S100A8-FL和pGL3-S100A8-1~4分别与pIRES2-SOX7共转染HEK-293T,检查荧光素酶活性。接着构建SOX7结合元件突变的S100A8启动子质粒(即pGL3-S100A8-M),与pIRES2-SOX7转染HEK-293T,检测其荧光素酶活性。结果:将pGL3-S100A8-FL与p IRES2-SOX7共转染HEK-293T,发现过表达SOX7可显著增加pGL3-S100A8-FL启动子活性。将pGL3-S100A8-FL和pGL3-S100A8-1~4分别与p IRES2-SOX7共转染HEK-293T,发现pGL3-S100A8-4启动子活性显著低于pGL3-S100A8-FL和pGL3-S100A8-1~3,提示SOX7与S100A8启动子结合元件可能位于-200~+51 nt区域内。将-86~-57 nt元件突变质粒(pGL3-S100A8-M)或pGL3-S100A8-FL与pIRES2-SOX7共转HEK-293T,发现pGL3-S100A8-M启动子活性显著低于pGL3-S100A8-FL。提示SOX7可能与S100A8启动子-86~-57 nt元件结合。结论:成功构建大鼠S100A8基因启动子全长、截短和突变荧光素酶报告质粒,并初步确定S100A8启动子区的SOX7结合元件。

沉默GCN5或SOX9基因对Thy-1肾炎大鼠肾组织中TGF-β1生成的影响

目的:研究沉默大鼠肾组织中通用控制核苷酸合成5(general control nonderepressible 5,GCN5)基因、性别决定区Y框蛋白9(SRY related HMG box-9,SOX9)基因对Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织内转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)生成的影响。方法:分别用慢病毒(lentivirus,LV)包装GCN5和SOX9发夹状小干扰RNA(shRNA),即制备LV-shGCN5和LV-shSOX9重组病毒。然后行大鼠肾动脉灌注术将LV-shGCN5和LV-shSOX9分别导入大鼠肾脏,再经尾静脉注射兔抗大鼠胸腺细胞抗血清(anti-thymocyte serum,ATS)复制Thy-1N模型。在注射ATS后3 h,取大鼠肾组织,用RTPCR和Western blot检查各组大鼠肾组织中GCN5和SOX9的mRNA及蛋白表达水平,以验证干扰效果及GCN5、SOX9对TGF-β1产生的影响。结果:利用肾动脉灌注术将LV-shGCN5或LV-shSOX9重组病毒导入大鼠肾组织后,不仅能有效沉默相应的靶基因,而且还能下调TGF-β1的表达。结论:沉默大鼠肾组织中GCN5或SOX9基因后能显著抑制Thy-1N大鼠肾内TGF-β1的生成。

微小RNA-145靶向调控SOX11表达及其对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-145(miR-145)对性别决定区Y框蛋白11(SOX11)的靶向调控作用及对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测正常乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MDA-MB-231细胞中的miR-145的表达水平;选取对数生长期MDA-MB-231细胞,采用脂质体法分别转染miR-145模拟物mimics(过表达组)或阴性对照质粒NC(阴性对照组),以未行转染的细胞为空白对照组;采用QPCR检测转染48 h后各组miR-145的表达水平,采用CCK-8和AnnexinⅤ-FITC/PI法检测各组细胞的增殖率和凋亡率,QPCR和Western blotting检测各组转染48 h后SOX11 mRNA和蛋白水平,采用荧光素酶报告实验验证miR-145与SOX11的靶向调控关系。结果 HBL-100细胞的miR-145表达水平为1.047±0.026,高于MDA-MB-231细胞的0.218±0.019(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组和过表达组的miR-145表达水平分别为1.022±0.034、0.987±0.028和3.408±0.097,过表达组的miR-145表达水平高于其余两组(P<0.05);过表达组转染48、72 h后的增殖率均低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组和过表达组的凋亡率分别为(6.12±0.79)%、(7.12±0.82)%和(26.11±1.95)%,SOX11 mRNA水平分别为1.066±0.074、1.105±0.091和0.126±0.023,SOX11蛋白水平分别为0.524±0.048、0.492±0.056和0.173±0.038,过表达组的凋亡率高于其余两组,SOX11 mRNA和蛋白水平低于其余两组(P<0.05)。荧光素酶活性检测结果显示miR-145可抑制野生型SOX11 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型SOX11 3’UTR的荧光素酶活性无影响。结论 miR-145在乳腺癌细胞中表达降低,可与SOX11 3’UTR特异结合,调控乳腺癌细胞的增殖和凋亡,有可能成为乳腺癌新的生物治疗靶点。

胃癌组织中SOX2表达及其临床病理特征的Meta分析

目的探讨性别决定区Y框蛋白2(SOX2)在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,为临床提供参考。方法计算机检索Pub Med、EMBASE以及中国知网、万方、维普等数据库中有关SOX2表达与胃癌研究的文献,检索年限为各数据库建库起至2016年10月1日。按照纳入和排除标准筛选文献、提取资料并评价质量,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析,计算合并OR值及其95%CI,并进行发表偏倚评估。结果共纳入13篇文献包括胃癌组织1492例,正常胃组织724例。Meta分析结果显示,SOX2在胃癌与正常胃组织(OR=0.16,95%CI:0.11~0.23)、胃癌高中分化组与低分化组(OR=2.66,95%CI:1.54~4.59)中的表达差异均有统计学意义(P<0.05);SOX2在淋巴结转移组与无淋巴结转移组(OR=0.54,95%CI:0.26~1.11)、临床Ⅰ+Ⅱ期与临床Ⅲ+Ⅳ期(OR=2.23,95%CI:0.82~6.09)、浸润深度T_1+T_2与T_3+T_4(OR=1.44,95%CI:0.64~3.22)、男性与女性(OR=1.10,95%CI:0.82~1.47)中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SOX2的表达与胃癌及其临床病理特征有关,但受纳入研究数量和质量限制,上述结论尚待开展更多高质量研究加以验证。

SOX5和PrPc在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中,性别决定区Y框蛋白5(SOX5)及细胞型朊病毒蛋白(PrPc)的表达和临床意义。方法:采用免疫组化法检测94例OSCC组织芯片及30例癌旁组织芯片中SOX5及PrPc的表达情况。结果:OSCC组织中SOX5和PrPc表达阳性率分别为69.15%和68.09%,明显高于癌旁组织中的表达(30.00%和20.00%)(P<0.05)。SOX5的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与性别、年龄、浸润深度、TNM分期、分化程度无关(P>0.05);PrPc的表达与肿瘤分化程度、患者年龄相关(P<0.05),与性别、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。SOX5与PrPc的表达呈正相关(r=0.432,P<0.01)。结论:SOX5和PrPc有可能作为OSCC早期诊断的生物标志物。

慢病毒介导SOX4表达下调对乳腺癌细胞生长及迁移能力的影响

目的研究慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白(SOX)4表达下调对乳腺癌细胞生长及迁移能力影响。方法以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,用含有SOX4siRNA的重组慢病毒和阴性对照慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western印迹方法检测细胞中SOX4表达变化。噻唑蓝(MTT)方法测定增殖变化,碘化丙啶(PI)单染法测定细胞周期分布变化,Transwell小室检测侵袭和迁移能力变化,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、上皮性钙黏附素(E-cadherin)、MMP-2、p21蛋白表达水平。结果SOX4siRNA重组慢病毒感染可以抑制乳腺癌细胞中SOX4基因的表达和转录。敲减SOX4后的乳腺癌细胞的增殖能力显著降低,细胞G0/G1期比例显著升高,细胞侵袭和迁移能力显著下降,细胞中CyclinD1蛋白表达水平显著降低,p21蛋白表达水平显著升高,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达水平显著下降,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。阴性对照慢病毒感染对MCF-7细胞中SOX4表达水平没有影响(均P>0.05),并且对细胞增殖、周期分布、侵袭、迁移水平和细胞中CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin蛋白表达水平均没有影响。结论敲减SOX4可以抑制乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移,并将乳腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期。