LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

SOX9通过转化生长因子β信号通路调节角膜内皮损伤后内皮-间质转化过程

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y-box protein 9,SOX9)是否会调控角膜内皮细胞损伤后的角膜上皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程及具体机制。方法转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低人角膜内皮细胞B4G12中SOX9的表达,使用甲萘醌构建体外B4G12细胞损伤模型,设4个分组:si-NC组(转染siRNA-阴性对照)、si-SOX9组(转染siRNA-SOX9)、si-NC+甲萘醌组(转染siRNA-阴性对照后添加外源性甲萘醌做损伤处理)、si-SOX9+甲萘醌组(转染siRNA-SOX9后添加外源性甲萘醌做损伤处理)。通过实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测各组细胞中EndMT关键因子Snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2,SNAIL2)及相关信号通路关键因子表达变化,阐明SOX9调控EndMT过程的功能和机制。结果转染siRNA-SOX9敲低细胞SOX9表达后,给予甲萘醌细胞损伤处理,观察到细胞中SNAIL2的表达会随SOX9的敲低而降低,同时观察到转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路中SNAIL2的上游关键因子Smad2/Smad3的表达也随着SOX9的敲低而降低。结论SOX9通过TGF-β信号通路调控角膜内皮损伤后EndMT过程。

SOX2、MRP1、SDF-1在胃癌组织中的表达及与临床病理参数的相关性

目的:研究性别决定相关基因簇2(SOX2)、多重耐药蛋白1(MRP1)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在胃癌组织中的表达及与临床病理参数的相关性。方法:选取2018年3月~2021年3月在曹县中医院确诊的62例胃癌患者,采用免疫组化法检测胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中SOX2、MRP1、SDF-1的表达情况,并研究三者的表达状况与临床病理参数的相关性。结果:相比癌旁组织、正常胃黏膜组织标本,胃癌组织标本SOX2阳性率明显更低,MRP1、SDF-1阳性率明显更高,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌患者性别、年龄、肿瘤直径、Lauren分型与胃癌组织中SOX2、MRP1、SDF-1的阳性表达无相关性(P>0.05)。胃癌患者TNM分期、分化程度、淋巴转移、浸润深度、组织学分型与胃癌组织中SOX2的阳性表达呈负相关,与胃癌组织中MRP1、SDF-1的阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论:SOX2在胃癌组织中呈低表达,MRP1、SDF-1则呈现高表达,且与胃癌患者TNM分期、分化程度、淋巴转移、浸润深度、组织学分型呈正相关性。

转录因子OCT4、SOX2在胃癌中的表达及临床意义

目的观察POU5fl转录因子-4(OCT4)及性别决定基因相关转录因子-2(SOX2)在胃癌组织表达的变化及其与胃癌病理特征的相关性。方法 48例胃癌组织作为研究对象,48例胃正常组织作为对照(距离肿瘤病灶>10 cm)。利用免疫组化检测手段比较OCT4及SOX2在胃癌组织及胃正常组织的变化,分析其与胃癌各病理指标的相关性。结果 OCT4及SOX2在胃癌组织阳性表达率分别为75.0%及25.0%,胃正常组织分别为27.1%及64.6%,癌组织与正常组织比较差异均有统计学意义(P<0.005);OCT4与SOX2蛋白在癌组织表达呈负相关性(r=-3.29,P=0.002<0.05)。经过分析后发现OCT4在胃癌组织的表达与淋巴结转移和TNM分期及分化程度有关(P<0.05),SOX2在胃癌组织的表达与胃癌的TNM分期和淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05)。结论胃癌的发生可能与OCT4升高、SOX2的下调有关,OCT4及SOX2的联合检测可作为预测胃癌发展的靶指标。

干细胞转录因子SOX2、OCT4在不同分化程度胃癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:肿瘤组织的分化程度是决定胃癌预后的重要因素,本研究检测胃癌组织中性别决定相关基因簇2(sex determining region Y-box 2,SOX2)、八聚体结合蛋白-4(octamer binding factor 4,OCT4)的表达,探讨SOX2、OCT4的表达与胃癌患者临床病理因素及预后的关系及意义。方法:通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)和免疫组化检测了60例分化程度不同的胃癌组织与正常黏膜组织中SOX2和OCT4的mRNA及蛋白的表达量,并分析SOX2和OCT4基因的表达水平与患者临床病理参数的关系。结果:q RT-PCR、Western blot检测显示,高分化胃癌组织SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=0.103 3,P>0.05;t=0.116,P>0.05),但显著高于中分化胃癌组织(t=12.48,P<0.05;t=22.78,P<0.05)和低分化胃癌组织(t=17.56,P<0.05;t=30.00,P<0.05),差异有统计学意义。与SOX2相反,高分化胃癌组织OCT4 mRNA的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=2.436,P>0.05;t=1.064,P>0.05),但显著低于中分化胃癌组织(t=13.23,P<0.05;t=25.56,P<0.05)和低分化胃癌组织(t=12.10,P<0.05;t=69.48,P<0.05),差异有统计学意义。免疫组化显示,高分化胃癌组织中SOX2的阳性表达率(10/21)高于中分化胃癌组织(7/20)和低分化胃癌组织(2/19,P<0.05),高分化胃癌组织中OCT4的阳性表达率(2/21)低于中分化胃癌组织(6/20)和低分化胃癌组织(12/19,P<0.05),与临床病理参数相比较,胃癌中SOX2和OCT4蛋白的表达与患者的性别、年龄无关,差异无统计学意义(P>0.05)。与病理分期、浸润程度、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:SOX2基因的低表达水平和OCT4的高表达水平促进胃癌的发生、发展和侵袭,有望成为胃癌诊断、治疗和预后判断的一个指标。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

胃癌组织中IFN-γ、IL-4和SOX-2蛋白表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性分析

目的:探讨胃癌组织中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、性别决定相关基因簇-2(SOX-2)蛋白表达情况及其与幽门螺杆菌(HP)感染的相关性。方法:选取其中胃癌样本67例(胃癌组)、胃炎样本85例(胃炎组)和胃溃疡样本73例(溃疡组),采用免疫组化法检测各组样本的IFN-γ、IL-4和SOX-2蛋白表达情况,并分析其阳性率与HP感染的关系。结果:胃炎组HP阳性率(91.8%,78/85)高于胃癌组(79.1,53/67)和溃疡组(74.0%,54/73),差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组与溃疡组HP阳性率差异无统计学意义(P=0.475)。免疫组化染色显示,IFN-γ蛋白在胃癌组呈强阳性表达,在胃炎及溃疡组呈弱阳性表达;IL-4及SOX-2蛋白在胃癌组呈弱阳性表达,在胃炎及溃疡组呈强阳性表达。胃癌组IFN-γ蛋白阳性率高于胃炎组和溃疡组,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组IL-4和SOX-2蛋白阳性率低于胃炎组和溃疡组,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌HP感染与组织中SOX-2蛋白表达呈负相关关系(r=-0.732,P<0.05),与IFN-γ和IL-4蛋白表达无显著相关性。结论:胃癌的发生和发展可能与胃黏膜组织中IFN-γ蛋白表达上调、IL-4和SOX-2蛋白表达下调有关;HP感染可能通过影响SOX-2蛋白表达促进胃癌发生。

胃癌组织中SOX2与TGF-β1、Smad3的表达及相互关系

目的：研究胃癌组织中性别决定相关基因簇2（SOX2）与转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3的表达情况及与胃癌组织临床病理因素之间的关系，并探讨三者之间的相关性。方法：采用免疫组织化学法标记SOX2、TGF-β1及Smad3，检测其在正常胃组织和胃癌组织中的蛋白表达情况，并结合临床病理学资料对实验数据进行统计学分析。结果：SOX2、Smad3蛋白在胃癌组的积分光密度（IOD）值低于正常胃组织（P ＜0．05），TGF-β1在胃癌组的IOD值高于正常胃组织（P ＜0．05）。 TGF-β1 IOD值的高表达多见于低分化、有淋巴结转移及Ⅲ～Ⅳ期的胃癌组中（P ＜0．05）；SOX2、Smad3 IOD值的高表达多见于高－中分化、无淋巴结转移及Ⅰ＋Ⅱ期胃癌组中（P ＜0．05）；SOX2、TGF-β1和Smad3蛋白在胃癌组织中的IOD值与患病年龄、性别无关（P ＞0．05）。在胃癌中TGF-β1与Smad3之间呈负相关性；SOX2与Smad3之间呈正相关性；TGF-β1与SOX2之间呈负相关性。结论：SOX2、TGF-β1及Smad3蛋白的异常表达与胃癌的发生、发展和临床病理特征有关。

尾型同源盒转录因子2基因及转录因子性别决定区Y框蛋白2在结直肠癌中的表达及其临床意义

尾型同源盒转录因子2基因（CDX2）与结直肠癌的发生和分化密切相关，性别决定区Y框蛋白2（SOX2）在肿瘤细胞的自我更新中起重要作用。本研究旨在探讨对结直肠癌患者CDX2和SOX2的蛋白表达水平与临床病理特征的相关性。

砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响

目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关。

子宫腺肌病患者子宫内膜组织中Ki-67、bcl-2和STAT3表达变化及意义

目的观察子宫腺肌病患者子宫内膜组织中细胞核相关抗原(ki-67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)及信号传导与转录激活因子3(STAT3)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测40例子宫腺肌病患者异位、在位内膜组织及41例正常子宫内膜组织中的ki-67、bcl-2及STAT3,并分析三者的关系。结果子宫腺肌病在位内膜和正常子宫内膜增殖期的ki-67、bcl-2阳性表达率均高于分泌期,P均<0.05。子宫腺肌病异位内膜分泌期的ki-67阳性表达率均高于同期子宫腺肌病在位内膜和正常子宫内膜,子宫腺肌病异位、在位内膜bcl-2、STAT3阳性表达率均高于同期正常子宫内膜,P均<0.05。子宫腺肌病异位、在位内膜组织中ki-67、bcl-2和STAT3的表达,两两均呈正相关,P均<0.05。结论子宫腺肌病异位内膜组织中ki-67、bcl-2及STAT3表达均升高,三者可能共同促进该病的发生发展。

CDX2、HNF4α、SOX2蛋白联合检测对幽门螺杆菌感染相关高危胃癌的诊断价值

目的探讨尾侧型同源转录因子2(CDX2)、肝细胞核因子4α(HNF4α)、性别决定相关基因簇2(SOX2)蛋白联合检测对幽门螺杆菌(Hp)感染相关高危胃癌的诊断价值。方法选取胃癌患者(胃癌组)及萎缩性胃炎患者(胃炎组)为研究对象。免疫组化检测两组CDX2、HNF4α、SOX2蛋白表达情况,13C-尿素呼气试验检测Hp感染情况。比较两组CDX2、HNF4α、SOX2阳性表达率及Hp阳性率。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CDX2、HNF4α、SOX2及三者联合对Hp相关高危胃癌的诊断效能。结果胃癌组CDX2及SOX2阳性表达率低于胃炎组(P<0.05),HNF4α阳性表达率高于胃炎组(P<0.05)。胃癌组Hp阳性率高于胃炎组(P<0.05)。两组Hp阳性者CDX2及HNF4α阳性表达率高于Hp阴性者,而SOX2阳性表达率低于Hp阴性者(均P<0.05)。CDX2、HNF4、SOX2对Hp相关高危胃癌的诊断效能低于三者联合的诊断效能。结论胃癌组织中CDX2、HNF4α、SOX2蛋白对Hp相关高危胃癌具有较高的诊断效能,且三者联合可提高灵敏度。

早期胃癌患者H. pylori感染与活检组织PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的关系

目的探讨早期胃癌患者幽门螺杆菌( H.pylori )感染与活检组织人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、性别决定相关基因簇2(SOX2)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达的关系。方法选取2015年1月至2018年2月湖南省脑科医院收治的确诊为早期胃癌并接受手术的患者128例,其中 H.pylori 阴性者43例(阴性组), H.pylori 阳性者85例(阳性组)。取存档的胃癌组织及癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化法检测 H.pylori 阴性及阳性胃癌组织与癌旁组织中PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的阳性表达情况,采用Logistic回归分析法分析其与 H.pylori 感染的关系。结果 H.pylori 阳性胃癌组织及癌旁组织中PTEN及SOX2阳性率明显低于 H.pylori 阴性组织( P <0.05), H.pylori 阳性胃癌组织及癌旁组织中NF-κB p65阳性率明显高于 H.pylori 阴性组织( P <0.05);胃癌组织PTEN、SOX2阳性率明显低于癌旁组织( P <0.05),胃癌组织NF-κB p65阳性率明显高于癌旁组织( P <0.05);经Logistic回归分析,胃癌组织PTEN、SOX2蛋白阳性表达降低 H.pylori 感染风险( OR= 0.483 、0.562,P < 0.05 ),NF-κB p65蛋白阳性表达增加 H.pylori 感染风险( OR=3.871,P <0.05)。结论 H.pylori 感染可导致早期胃癌组织中PTEN、SOX2蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白表达升高,推测 H.pylori 可能通过影响PTEN、SOX2及NF-κB p65蛋白的表达而参与胃癌的发生、发展过程。

急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平对不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值

目的探究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke)患者长链非编码核糖核酸性别决定相关基因簇2重叠转录本(long non-coding RNA sex determination related gene cluster 2 overlapping transcript,lncRNA SOX2OT)、微小RNA(microRNA,miR)-331水平对不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值。方法选取2020年3月~2021年11月张家口市第二医院神经内科收治的120例急性缺血性脑卒中患者为研究组,另选取同期该院健康体检人员120例作为对照组。根据颈动脉超声检查情况将患者分为无斑块组24例、稳定斑块组40例和不稳定斑块组56例;依据患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分将患者分为轻度神经功能缺损组51例、中度神经功能缺损组47例和重度神经功能缺损组22例;实时荧光定量PCR法检测研究组和对照组血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平;Pearson法分析急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平的相关性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清lncRNA SOX2OT,miR-331水平对急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值。结果与对照组比较,研究组血清lncRNA SOX2OT水平明显升高(1.86±0.47 vs 1.00±0.03),miR-331水平明显降低(0.51±0.14 vs 1.02±0.04),差异有统计学意义(t=20.004,38.370,均P<0.001);无斑块组、稳定斑块组和不稳定斑块组血清lncRNA SOX2OT水平依次升高(1.27±0.31,1.78±0.45,2.18±0.56),miR-331水平依次降低(0.74±0.19,0.56±0.16,0.37±0.10),差异均有统计学意义(F=30.671,60.656,均P<0.001);轻度神经功能缺损组、中度神经功能缺损组和重度神经功能缺损组血清lncRNA SOX2OT水平依次升高(1.58±0.41,1.94±0.48,2.35±0.60),miR-331水平依次降低(0.67±0.18,0.46±0.12,0.27±0.07),差异均有统计学意义(F=21.100,65.923,均P<0.001);急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT与miR-331水平呈负相关(r=-0.467,P<0.001);血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平单独及二者联合诊断急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.819,0.766和0.921,血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平单独及二者联合诊断急性缺血性脑卒中患者重度神经功能缺损的AUC分别为0.716,0.801和0.904,二者联合优于血清lncRNA SOX2OT和miR-331单独诊断(Z=2.211,3.179,2.673,2.081,均P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT水平呈高表达,miR-331水平呈低表达,二者可作为评估急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的生物学指标。

BMAL1对H_(2)O_(2)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制探讨

目的探讨节律基因BMAL1对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制。方法构建BMAL1稳定过表达的H9C2细胞系后,实验分为2个部分。(1)实验1。对照组、H_(2)O_(2)组(0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组(BMAL1稳定过表达H9C2细胞)、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组(0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h)。(2)实验2。H_(2)O_(2)组、BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达+抑制NRF2+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组(NRF2抑制剂2μmol/L的ML385预处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h,再用0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)、BMAL1过表达+抑制HO-1+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+Znpp+H_(2)O_(2))组(HO-1抑制剂5μmol/L的Znpp预处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h,再用0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)。CCK-8法检测细胞活力,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、TBA法检测丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测BMAL1、核因子E2相关因子2(NRF2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果(1)与Control组相比,BMAL1-OE组BMAL1 mRNA表达水平升高,H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性下降、MDA含量增加,BMAL1、NRF2和HO-1蛋白相对表达水平降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性增加,MDA含量减少,而BMAL1、NRF2和HO-1蛋白相对表达水平升高(P<0.05);(2)与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组和BMAL1-OE+Znpp+H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性降低,MDA含量增加(P<0.05)。结论BMAL1可能通过上调NRF2/HO-1信号轴,减轻H_(2)O_(2)诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤。

CDX2和SOX4在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨尾型同源盒转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2, CDX2)和Y 染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(sex-dertermining region of Y chromosome related high mobility group box 4, SOX4)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用Western Blot法检测CDX2 蛋白和SOX4 蛋白在50 例胃癌及其远癌胃组织中的表达,分析两者与胃癌临床病理特征之间的关系,Pearson 相关系数分析CDX2 蛋白、SOX4 蛋白在胃癌组织中表达的相关性;免疫荧光法检测蛋白细胞内定位。结果:免疫荧光通过镜下观察,CDX2 阳性信号在胃癌组织中主要位于细胞核,SOX4 阳性信号也见于细胞核。Western Blot 结果提示,CDX2 蛋白、SOX4 蛋白在胃癌组织中高表达,在远癌胃组织中低表达(P<0.05)。CDX2 蛋白表达与胃癌浸润深度、胃癌的TNM 分期、有无淋巴转移有关(均P<0. 05),与肿瘤分化程度、肿块大小、年龄和性别等无关(P>0.05)。SOX4 蛋白表达与胃癌有无淋巴转移和TMN分期有关(P<0. 05),与肿瘤分化程度、浸润深度、肿块大小、年龄和性别等无关(P>0.05)。Pearson 相关性分析提示在胃癌组织中CDX2 和SOX4 蛋白表达呈负相关(r=-0.476, P<0.05)。结论:CDX2 低表达和SOX4 高表达与胃癌病情进展有关,CDX2 和SOX4 在胃癌组织中表达呈负相关。联合检测CDX2和SOX4 的表达可作为反映胃癌临床病理学特点新的分子病理标志物。

红细胞转化特异性转录因子相关基因的生物信息学研究

目的利用生物信息学方法分析人红细胞转化特异性转录因子（ETS）相关基因（ERG）以及蛋白的结构，为进一步研究其功能和参与的调控机制提供理论依据。方法通过GenBank搜索ERG基因序列（NM_001136154）及蛋白序列（NP_001230357），采用生物信息学方法分析该基因在不同物种中的差异，分析该蛋白的亚细胞定位、二级结构、功能域以及相互作用蛋白。结果该基因编码一个长度为468个氨基酸的蛋白质，具有2个PNT和ETS两个功能域。ERG蛋白理论相对分子质量为53837．51，理论等电点为7．29。二级结构中α螺旋（H）占比12．35％，β折叠（E）占比3．50％，无规卷曲占比84．16％。ERG蛋白含有4个可能的N连接糖基化位点，11个潜在的酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点，5个豆蔻酰基化位点，7个蛋白激酶C（PKC）磷酸化位点以及1个酪氨酸激酶磷酸化位点。并进一步利用STRING分析了该蛋白的相互作用网络。结论利用生物信息学预测出的结构和功能信息，为ERG的相关研究提供一定的信息基础。

MiR-133b通过抑制SOX4调节膀胱癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力

目的:膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制仍不十分清楚。虽然研究表明miR-133b可调控膀胱癌的发生,但其机制尚未明确。性别决定基因-区域转录因子4(sex determining region Y-box transcriptim factor 4,SOX4)在肿瘤的发生中起至关重要的作用,目前尚不清楚在膀胱癌中miR-133b与SOX4是否存在相互作用。本研究旨在探究膀胱癌组织和细胞中miR-133b和SOX4的表达情况及其对膀胱癌细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的调控作用,并探讨在调节膀胱癌细胞生物特性过程中miR-133b与SOX4的相互关系。方法:获取2015年1至6月在中南大学湘雅二医院行手术切除的10例患者的膀胱癌及邻近癌旁组织标本,分别采用real-time PCR和蛋白质印迹法检测膀胱癌组织、癌旁组织、膀胱癌细胞系及正常膀胱上皮细胞中miR-133b的mRNA表达水平和SOX4的蛋白质表达水平。利用数据库TargetScan预测SOX4与miR-133b的相关性。利用脂质体Lipofectamine 2000为载体,将miR-133b模拟物、抑制物或SOX4的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染至T24细胞。应用双荧光素酶报告基因检测系统检测高表达miR-133b对T24细胞表达SOX4的影响。体外培养T24细胞14 d,计数培养克隆数并计算克隆形成率。使用CCK-8试剂盒检测T24细胞在不同时间点(0、12、24、48、72、96 h)的增殖情况。应用Transwell检测T24细胞的侵袭能力。结果:与癌旁组织和正常膀胱上皮细胞比较,膀胱癌组织和膀胱癌细胞系均低表达miR-133b、高表达SOX4,并且miR-133b mRNA与SOX4蛋白质在膀胱癌组织中的表达水平呈负相关(r=-0.84)。TargetScan数据库预测SOX4存在miR-133b结合位点,miR-133b模拟物转染可抑制膀胱癌T24细胞内SOX4的表达。MiR-133b模拟物或shRNA-SOX4转染均能抑制膀胱癌T24细胞的体外增殖、克隆形成和侵袭能力。相对于转染miR-133b抑制物,miR-133b抑制物和shRNA-SOX4共转染能够显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力。结论:MiR-133b和SOX4均能参与调控膀胱癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力,并且miR-133b可以通过抑制SOX4的表达从而抑制膀胱癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力。

CDX2、SOX2在浆液性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:探究卵巢浆液性肿瘤组织中尾型同源盒转录因子2(CDX2)、Y染色体性别决定区相关的高迁移率族盒蛋白2(SOX2)表达水平及其与预后关系。方法:选取2012年6月-2015年6月本院收治的卵巢浆液性癌患者84例、卵巢交界性浆液性肿瘤患者52例、卵巢良性浆液性肿瘤(卵巢浆液性囊腺瘤)患者63例,收集术中卵巢浆液性癌患者癌组织及癌旁正常组织(距病灶>5 cm),卵巢交界性浆液性肿瘤组织及卵巢良性浆液性肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测组织中CDX2、SOX2蛋白表达;Kaplan-Meier生存曲线分析卵巢浆液性癌组织中CDX2、SOX2蛋白表达与患者预后关系;Cox回归模型分析浆液性卵巢癌患者预后影响因素。结果:癌旁正常组织、卵巢良性浆液性肿瘤组织、卵巢交界性浆液性肿瘤组织、卵巢浆液性癌组织中CDX2蛋白高表达率依次降低,SOX2蛋白高表达率依次升高(P<0.05)。与FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期、组织学分级G1、无淋巴结转移、无远处转移、未复发患者比较,FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、组织学分级G2-G3、淋巴结转移、远处转移、复发患者癌组织中CDX2蛋白高表达率降低、SOX2蛋白高表达率升高(P<0.05)。卵巢浆液性癌组织中CDX2与SOX2蛋白表达呈负相关(P<0.05)。5年累积生存率,CDX2低表达患者(32.9%)低于高表达患者(71.4%),SOX2低表达患者(68.8%)高于SOX2高表达患者(21.2%)(P<0.05)。Ⅲ-Ⅳ期FIGO分期、淋巴结转移、远处转移及CDX2低表达、SOX2高表达是影响卵巢浆液性癌患者不良预后发生的独立危险因素(P<0.05)。结论:卵巢浆液性癌组织中CDX2蛋白低表达、SOX2蛋白高表达,二者可能在肿瘤进展中存在相互作用,与患者FIGO分期、组织学分级升高及复发、死亡等预后不良发生密切相关。