CHD1基因在美国王鸽和绿壳蛋鸡性别鉴定中的应用研究

为快速、准确鉴定出美国王鸽和绿壳蛋鸡的性别,本研究基于CHD1基因在不同性别鸟类基因组中的大小差异,建立美国王鸽和绿壳蛋鸡性别鉴定的分子生物学方法。首先提取美国王鸽和绿壳蛋鸡基因组DNA,应用引物对2550F/2718R扩增CHD1基因第17、18外显子及之间的内含子区域,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果并进行测序验证。PCR扩增结果表明,雄性个体只有1条条带,而雌性个体都是2条条带,基于PCR技术的性别鉴定结果与人工鉴定的结果一致。测序结果显示,CHD1基因在美国王鸽基因组上的扩增片段大小分别为593 bp和447 bp;在绿壳蛋鸡基因组上的扩增片段大小分别为682、656 bp和448 bp。目的片段中外显子长度均为169 bp,保守性好,同源性为100%。但内含子序列在2群体间的同源性较低,片段大小差异主要是由Z染色体上CHD1基因内含子区变异引起的。本研究成功建立了基于CHD1基因序列大小差异的肉鸽和绿壳蛋鸡性别鉴定方法,为开展精准选种选配提供了技术指导。

基于白尾海雕粪便样品的SSR引物及性别鉴定引物的开发

白尾海雕(Haliaeetus albicilla),是鹰形目鹰科海雕属的一种大型猛禽、国家一级保护动物,位于食物链顶端,对于维持生态平衡和生物多样性具有重要作用.每年冬季,大批白尾海雕在我国吉林省珲春市敬信湿地越冬,形成了国内最大的越冬种群.为了实现基于粪便样品开展白尾海雕种群遗传学等方面的研究的可行性,填补白尾海雕亚洲种群的研究空白,需要开发新的微卫星DNA,即SSR(simple sequence repeat)引物和性别鉴定引物.本研究以NCBI上公布的白尾海雕全基因组数据为基础,进行了SSR引物和性别鉴定引物的开发.随后,使用白尾海雕粪便样品对引物进行了筛选,最终获得9对SSR引物和2对性别鉴定引物.本研究为白尾海雕种群遗传学深入研究提供了丰富有效的SSR分子标记,也为白尾海雕性别分子鉴定提供了新的引物选择.

变性者之性别鉴定的方法探析

《法医类司法鉴定执业分类规定》将性别鉴定纳入法医临床鉴定范围,使得运用法医临床学、临床医学及形态学等相关学科对人的性别(第二性征)进行检验鉴定成为合规方法;由此以变性者之性别鉴定所面临的有关问题为切入点,阐述了实施此类鉴定的方法和注意事项。

家禽胚胎期性别鉴定技术研究与应用进展

性别鉴定是家禽生产的重要环节之一,目前通用的雏鸡翻肛鉴定法费时费工,家禽从业者和科研人员多年来致力于研发家禽孵化期胚胎性别鉴定技术,以提高性别鉴定效率、节能省工并避免淘汰公雏。总结现有家禽胚胎性别鉴定主要方法、最新研究进展和产业化应用情况,以及未来的发展建议,为家禽早期性别鉴定技术研究和应用提供参考。家禽胚胎性别分化由遗传物质决定,性腺的两性分化随着胚胎发育逐渐清晰,随之分泌性激素,导致胚胎雌雄性激素水平差异,随着胚胎的进一步发育,雌雄胚胎会出现其他差异性表观性状(羽色等)。基于上述鸡胚发育规律,可以通过检测雌雄胚胎遗传物质、性激素和其他表观性状的差异进行性别鉴定。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)或环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术分析鸡胚性染色体上的特定基因(CHD、EE0.6、SWIM、Xho-I、DMRT等),可实现性别鉴定,该方法鉴定准确率为100%,但操作复杂,需要采集胚胎组织或血液等带遗传物质的样品,仅适用于科研领域或高价值家禽品种,难以产业化应用。使用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)试剂盒测量鸡胚性激素含量,包括雌酮、雌二醇、睾酮、雄烯二酮和二氢睾酮等,可实现性别鉴定,该方法同样操作复杂,需要采集胚胎血液或尿囊液,但准确率较高,达98%以上。此外,利用光谱图像技术识别种蛋内物质成分和物理特性差异,借用机器学习建立雌雄胚胎识别光谱模型,也可实现鉴定,该方法为非侵入式,速度快,但准确率有限且通用性差。产业应用方面,德国SELEGGT公司开发了一种性激素快速检测试剂并推出一套商用鸡胚性别鉴定技术和装备,已实现产业化应用,准确率达98.5%,但是鉴定速度仅为3600枚/h,远低于市场期望值;德国AAT公司也推出了一种基于高光谱图像技术的全自动鸡胚性别鉴定设备(CHEGGY),检测速度为20000枚/h,鉴定准确率为96%,但仅适用于羽色自别系品种。从家禽产业应用需求角度看,基于光谱图像检测法的性别鉴定技术优势明显,产业化应用潜力最大,需要深入研究家禽胚胎发育期雌雄鸡胚间的生理差异和生理信号检测方法,为高效鸡胚性别鉴定技术和装备研发提供理论支撑。

鱼类性别鉴定研究进展

简述了鱼类性别的决定,受遗传、环境因素共同影响;介绍了鱼类性别鉴定方法:表观观测法、组织切片、超声鉴定法、血液生化指标及激素判别法、染色体形态以及染色体带型差异判别法、分子标记法、单细胞测序技术等。分析了各种方法的优缺点及其实际应用范围。提出,今后对于鱼类性别鉴定方法,应着重研究性别特异位点,创新筛选技术,并加大性别分化机制和性别控制的研究力度,进一步开发单细胞测序技术在鱼类性别鉴定中的应用,对于鱼类,尤其是具有明显性别二态性的鱼类研究和渔业发展,具有重要意义。

基于泄殖腔观察的肉鸽性别鉴定方法

为了提高肉鸽配对的准确性和降低肉鸽性别鉴定的成本,利用扩肛器(H23523鼻镜)对74只青年肉鸽(申王肉鸽1号,5月龄)进行翻肛操作,通过观察其外露的泄殖腔,比较雌、雄肉鸽生殖突起形态特征,并将基于泄殖腔观察的鉴定结果与染色体螺旋蛋白基因(chromobox-helicase-DNA binding gene,CHD)PCR法鉴定结果进行比较。结果显示:5月龄雌、雄肉鸽的泄殖腔内生殖突起形态特征有明显差异(雄肉鸽生殖突起呈乳头或山峰状,尖而细;雌肉鸽生殖突起大而圆,或无突起),泄殖腔观察法与CHD基因PCR法鉴定结果一致率为95.9%。结果表明:通过利用扩肛器翻肛观察泄殖腔内生殖突起的肉鸽性别鉴定方法准确率较高、成本较低,具有推广应用价值。

猪性别鉴定双重PCR方法的建立

哺乳动物的后代性别选择往往引起社会的关注。在畜牧业养殖生产中,公母畜个体在生长速度及生产价值等方面存在差异,人们往往希望后代是雌性,以满足经济要求,因此早期性别鉴定技术十分关键。有性精液技术在后代性别选择方面具有较高的准确性和可重复性,但目前对含X、Y精子的鉴定方法尚不十分准确。为快速鉴别猪的性别,研究建立了一种可靠、准确、简便的猪DNA样品双重PCR性别鉴定的方法。首先从NCBI获得了猪X性染色体特异性遗传基因A激酶锚定蛋白4(AKAP4)和Y染色体特异性遗传基因性别决定基因(SRY)的序列,设计双重PCR引物,测试引物的特异性扩增产物;之后对双重PCR扩增条件进行升级优化以获得最佳的反应条件,确定了反应的灵敏度;最后对20个猪DNA样品进行了盲检,性别鉴定结果均正确,准确率高、灵敏度高。实验获得的双重PCR方法为今后猪生产中性别鉴定提供了基础数据。

牛早期胚胎性别鉴定的PCR方法研究

探讨了ＰＣＲ法鉴定牛早期胚胎性别时所用的引物，反应缓冲液中Ｍｇ２＋浓度，循环反应的次数及可能造成污染的各种因素对性别鉴定结果的影响．并对１８个胚胎进行了性别鉴定，移植３８枚性别鉴定后的胚胎，成功产下２头与预测性别一致的牛犊，胚胎性别可鉴率为９４．１％，预测性别符合率为１００％．

银杏雌雄株性别鉴定的分子标记研究进展

银杏是原产于我国的一种具有重要观赏价值和经济价值的植物。银杏为雌雄异株,雄株多用于绿化,而雌株多用于经济林生产。由于银杏具有童期长,开花结实较晚的特点,因此在生产上对银杏雌雄株进行早期的性别鉴定具有重要的研究和应用价值。形态学鉴定、生理生化鉴定和染色体核型分析鉴定等方法均不能实现对银杏雌、雄株性别的早期准确鉴定,而分子标记是是DNA水平遗传多态性的直接反映,是最为理想的鉴定方法。本文重点对银杏雌雄株性别鉴定的分子标记研究进展进行了整理归纳,并对分子标记在银杏雌雄株性别鉴定中的应用进行了讨论,以期为今后银杏雌雄株性别鉴定的分子标记相关研究提供一定的借鉴与参考。

关于胚胎分割前性别鉴定的探讨——对人教版高中生物选修 “胚胎工程”专题插图的解读

胚胎工程的应用与前景包括胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术,是对动物早期胚胎或者配子进行的多种显微操作和处理技术。在对胚胎进行鉴别时,经过处理后获得的胚胎,是不会对胚胎发育造成影响的。所以,在性别鉴定后的胚胎需要继续进行分割。本文关于胚胎分割前性别鉴定的探讨——对人教版高中生物选修3“胚胎工程”专题插图的解读,分为胚胎分割、胚胎性别鉴定和插图分析与修改意见来进行分析。

关于完善非医学需要胎儿性别鉴定刑事立法的思考

非医学需要胎儿性别鉴定具有严重的社会危害性,会带来一系列社会问题。现行相关法律制度对这一行为的规制非常混乱,不能达到有效遏制该行为的目的。完善非医学需要胎儿性别鉴定的刑事立法,合理设置非医学需要胎儿性别鉴定罪,准确界定此罪与其他相关罪名的关系能够彻底改变法律对该行为无力惩处的司法现状,防止与此相关的社会问题的进一步恶化。

牛胚胎性别鉴定与取样胚胎移植应用技术的研究

本研究应用ＰＣＲ技术扩增牛ＳＲＹ序列进行奶牛胚胎性别鉴定。经１０９枚鲜、冻胚的移植，获鲜胚移值妊娠率５８．６％（３４／５８），常规冷冻胚胎移植妊娠率４４．４％（１２／２７），一步细管冷冻解冻胚胎移值妊娠率１６．７％（４／２４）。犊牛性别验证与ＳＲＹ鉴定结果均相符合。实验中对胚胎发育时期的划分，胚胎质量评定和胚龄的确定，胚龄与受体发情时间在移植中的关系，胚胎的切割取样，取样胚胎的冷冻进行了研究。

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明:使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段;而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段,其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果,而常规PCR则需要20～30个细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别,同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。

应用PCR方法通过毛发进行哺乳动物性别鉴定

以哺乳动物的新鲜毛发和在冷冻条件下保存 ４个月的毛发作为材料． 从毛囊中提取 ＤＮＡ、应用 ＰＣＲ方法扩增 ＳＲＹ基因片段、 ＺＦＸ／ＺＦＹ基因片段、探讨哺乳动物性别鉴定的最优化 ＰＣＲ方案。结果表明． 毛发 ＤＮＡ和血液 ＤＮＡ均可获得相同的扩增结果．证实了毛发作为 ＰＣＲ扩增材料是可靠的。对不同材料量、不同模板量、不同提取方法进行比较．优化实验方案．达到１根毛发用Ｃｈｅｌｅｘ－１００提取得到的ＤＮＡ即可以成功地进行动物的性别鉴定。运用这种方法对随机选取的８种动物进行性别鉴定．得到的结果与表型完全一致。动物毛发作为材料不仅可以避免对动物的惊扰或损伤．同时，ＰＣＲ扩增ＺＦＸ／ＺＦＹ和ＳＲＹ基因快速、准确、灵敏．不受物种限制．可以广泛应用于哺乳动物的性别鉴定。

植物雌雄株性别鉴定研究方法的评价

综述了近 5 0年来国内外关于植物雌雄株性别鉴定各种常用方法的研究新进展 ,并就各种方法的优缺点加以讨论 ,同时提出建议。

基于高光谱图像的鸡种蛋孵化早期胚胎性别鉴定

为了对鸡种蛋孵化早期胚胎进行性别鉴定,构建了高光谱图像采集系统,在400~1 000 nm范围内获取94枚种蛋孵化0~12 d的高光谱透射图像。分别在胚胎的圆头、中间、尖头3个部位选择感兴趣区域（region of interest,ROI）,获取400~1 000 nm波段的响应信号,构建了支持向量机（support vector machine,SVM）、偏最小二乘判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLSDA）和人工神经网络（artificial neural network,ANN）的鸡胚胎性别鉴定模型,并比较了不同孵化时间雌雄胚胎的鉴别准确率。试验结果表明,SVM模型、PLSDA模型和ANN模型均对孵化第10天种蛋中间部位检测效果最好。随后通过分析第10天种蛋中间部位光谱响应的差异,选取600~900 nm的光谱值构建胚胎性别鉴定模型,结果发现,3种模型的判别准确率均有上升,SVM模型和PLSDA模型预测集样本判别准确率均为75.00%,ANN模型预测集样本判别准确率达到82.86%。其中,ANN构建的种蛋孵化胚胎性别检测模型的整体效果优于SVM模型和PLSDA模型。结果表明高光谱图像技术在检测鸡种蛋孵化早期胚胎性别方面有一定效果,但种蛋蛋壳的个体差异会对鉴定准确率造成一定影响。

低龄中华鲟外科手术性别鉴定技术

取 5 1尾人工养殖 1.5～ 5 .6年龄、体重 2 .6～ 35 .5kg的中华鲟 (Acipensersinensis) ,通过腹腔外科手术检查性腺并取得性腺组织材料。 5～ 5 .6年龄 (体重 18～ 35 .5kg)的中华鲟性腺都能通过肉眼分辩雌雄 ,是进行性别鉴定的较佳时期。手术时 ,水温 14 .3～ 30℃、切口位于腹中线或偏离腹中线 1～ 4cm、切口长 4～ 5 .5cm(体重 2 .6～ 9.7kg)或 3.8～ 7.5cm(13.5～ 35 .5kg)、切口采用医用丝线行交叉缝合或一针一结缝合、出池后的全程操作时间 2 0～ 30min ,可较圆满完成性腺检查和性腺组织取材 ,94 .1% (4 8/5 1)的受试鱼存活 ,伤口在 15～ 4 0d天愈合 ,缝合线自行消失。水温高、切口短。

雌雄异株植物性别鉴定的研究进展

雌雄异株植物为研究植物的性别决定和进化提供了一个模式体系,由于不同性别的植物具有不同的经济价值,所以其性别鉴定的研究不仅具有重要的理论意义,而且具有极为重要的实践价值。从外部形态、生理生化指标、染色体组型、同工酶、特异蛋白质分子、分子标记等方面,对近15年来国内外有关雌雄异株植物性别鉴定研究的进展作了总结,并对各种鉴定方法的优缺点进行了评价,同时对其研究发展趋势作了展望。

PCR技术在鸟类性别鉴定上的应用

根据鸟类性染色体连锁基因EE0．6在Z、W染色体上长度的不同,通过选择6对不同的引物,同时设置4种不同的反应条件,分别采用PCR技术对丹顶鹤、黑鹳、琉璃金刚鹦鹉、绯红金刚鹦鹉、鞭苔(?)鵼、戴冕鹤、火烈鸟的Z、W染色体上的EE0．6基因进行了特异性扩增。结果显示,某些引物组合能从雄鸟样品中扩增出1条片段(EE0．6Z,190 bp),而雌性鸟样品则能扩增出2务片段(EE0．6W和EE0．6Z,分别为250 bp和190 bp),但4组引物对6种鸟类EE0．6基N的扩增效果不同。证实,利用PCR技术能对鸟类进行性别鉴定。

DNA分子标记在雌雄异株植物性别鉴定中的应用

雌雄异株植物中不同性别的植株所产生的经济效应和生态效应存在一定的差异,在生产实践中,选取适宜性别的植株进行栽培有助于提高效率,避免不必要的浪费。然而,性别鉴定的常用方法大多是根据表型、代谢产物含量及活性等方面的差异,在成株阶段进行的,鉴定结果的可靠性和准确性都有一定的局限。近几年,DNA分子标记技术应用于雌雄异株植物的性别鉴定研究中,获得了快速准确的鉴定结果。在比较常用性别鉴定方法的基础上,主要就常用DNA分子标记在雌雄异株植物性别鉴定中的研究进展做一概述并对该领域的研究提出展望。