广谱性拮抗植物病原菌枯草芽孢杆菌的分离鉴定及芽孢形成条件的研究

从大兴安岭松苑原始森林林区分离得到的一株对梨黑斑病菌具有拮抗作用的芽孢杆菌,经形态学、生理生化和分子生物学鉴定为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis Z58;平板对峙实验结果表明B. subtilis Z58对17种植物病原菌均具有拮抗作用;单因素和正交设计得出B. subtilis Z58生成芽孢的最适条件为:发酵液体积:吸附材料质量为4:1,菌体量6 ×109/g和温度为32℃,且该菌株芽孢形成率在15 d达到98%以上,到90 d时基本无营养体存在,该菌株有望开发成农用生防微生物菌剂。

水稻内生细菌的分离及其拮抗性与潜在致病性测定

从江苏省扬州、南通、常州和徐州等地水稻根、茎和种子分离获得内生细菌736个菌株，其中对稻瘟病菌、稻恶苗病菌、稻纹枯病菌和稻白叶枯病菌拮抗的菌株分别占20．7％、5．4％、3．1％和1．1％，且主要来自根和茎，并有24个和3个菌株分别对2种和3种病菌有拮抗活性。对稻瘟病菌和稻恶苗病菌拮抗的内生细菌转管培养20代后，多数菌株拮抗活性稳定，对其他两种病菌拮抗的菌株转管培养后则拮抗能力大都显著下降或丧失。经形态和生理生化鉴定，高拮抗菌株G87（对稻瘟病菌、稻恶苗病菌、稻白叶枯病菌拮抗）和J215（对稻瘟病菌、稻恶苗病菌拮抗）为枯草芽孢杆菌。针刺和剪叶接种试验表明，大多数水稻内生细菌不致病，少数（3．4％～4．8％）在人工接种条件下可有致病能力或潜在致病性。

硅酸盐细菌解钾兼拮抗活性菌株的筛选

从紫色土壤中分离筛选出具有解钾拮抗双重活性的硅酸盐细菌CS1和CS2 9菌株 .接菌处理 ,其水溶性钾分别增加 75 %和 6 5 % ,转化率达 0 .82 %和 0 .72 % .两株菌对革兰氏阳性的蜡样芽孢杆菌 ,金黄色葡萄球菌 ,藤黄八叠球菌等和革兰氏阴性的大肠杆菌均有较强的抑菌活性 .筛选菌株中 91.2 %具有解钾活性 ,但拮抗活性菌株只占总数的11.6 % ,表明二性状之间无相关关系 .表 4参

多功能放线菌Act12对土传病原真菌的拮抗性及其鉴定

采用琼脂块法及抑菌试验,研究了多功能放线菌Act12对6种常见土传病原真菌的拮抗作用;采用形态特征、生理生化特性及16 S rDNA序列分析,确定了Act12的分类地位。结果表明,Act12对6种供试土传病原真菌具有不同程度的拮抗作用,其中,对木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)和尖孢镰刀菌西瓜专化型(F.ox-ysporum f.sp.niveum)的拮抗圈直径分别达到20.5 mm和18.4 mm;培养48 h,Act12无菌发酵滤液对木贼镰刀菌的抑菌率达到83.2%。菌株显微形态、培养特征、生理生化特性及16 S rDNA序列分析结果表明,多功能放线菌Act12为链霉菌属的密旋链霉菌(Streptomyces pactum)。

青海高原东部土壤中拮抗性放线菌的生态分布特征

采用常规方法研究了从青海高原东部海晏、湟源、湟中、大通、西宁、互助、乐都和平安等八个县(市 ) ,粮田 (旱地和水地 )、菜地 (露地和保护地 )及自然土壤 34个样区 4 0个代表性土壤样品中分离所得 6 85株放线菌对 6种靶标菌的拮抗性。结果表明 ,(1)拮抗性放线菌占放线菌总数的比例与土壤利用方式有关 :粮田、菜地和自然土壤中拮抗性放线菌所占比例分别为 2 6 .8%、2 3.8%和 2 0 .5 % ,保护地土壤中拮抗性放线菌的比例是露地的 2倍 ,旱地土壤中拮抗性放线菌的比例明显高于水地 ;(2 )供试菌株中对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、假丝酵母、青霉、西瓜枯萎病菌和黄瓜枯萎病菌有拮抗活性菌株数分别为 2 .8%、14 .9%、3.5 %、0 .9%、1.8%和 0 .6 %。说明供试菌株对细菌的拮抗作用强于真菌 ,对革兰氏阳性细菌的拮抗作用强于革兰氏阴性细菌 ,对单细胞真菌的拮抗作用强于丝状真菌。

蕃茄根土区系中拮抗性细菌的分布与青枯病发生的关系

对番茄植株根土区系中桔抗菌数量的研究表明，重病田健株根土区系中拮抗菌数量占总分离菌数的比例最大，为８．２％，其中根围拮抗菌的分离频率高于根际与根表，但多数来源于根围的菌株其拮抗作用易丧失，而报表来源的菌株拮抗作用不易丧失。所分离的拮抗菌（９３．２％）属于产芽孢的细菌。

烟草赤星病菌拮抗性放线菌Q14的筛选及鉴定

烟草赤星病对烟草生产威胁极大,旨在通过筛选拮抗菌为烟草赤星病菌的生物防治提供新的选择。采用平板分离培养、对峙平板法、16S rDNA系统发育分析等方法。结果显示,从茄子根围土壤中分离到36株放线菌,以烟草赤星病菌为目标菌,采用对峙平板法测定,筛选到6株有拮抗活性菌株,占所分离总数的16.67%。其中Q14对烟草赤星病菌的拮抗作用最强,抑菌带宽为14.5 mm,并且对黄瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌也有较强的拮抗作用。通过对菌株Q14的形态观察培养特征生理生化反应和16S rDNA测定(GenBank登录号KC675186),将其鉴定为多产色链霉菌。分离获得的一株多产色链霉菌拮对烟草赤星病有较好的拮抗作用,目前国内尚属首次报道,对烟草赤星病生物防治又提供了新的选择。

青海高寒地区油菜地土壤中放线菌组成及拮抗性放线菌研究

【目的】研究青海高寒生态区油菜地土壤中放线菌组成及其对油菜菌核病、黑斑病及软腐病的拮抗性,为克服青海油菜连作障碍提供放线菌生态依据及拮抗性生防放线菌菌株。【方法】以青海化隆县（2830 m）、门源县（2800 m）、互助县（2600 m）及青海农业科学院（2300 m）4个海拔高度不同的代表性地区采集的4个土样为研究对象,采用稀释平板法分离计数、皿内琼脂块法筛选拮抗放线菌及发酵滤液抑菌率测定法检测拮抗效果。【结果】①低海拔油菜田土壤中放线菌数量较多,在海拔2300 m的农科院油菜田土壤中,高氏1号培养基上分离的放线菌总数、小单孢菌数量及小单孢菌在放线菌中所占比例分别是高海拔地区（2600-2830 m）的1.5-2.7倍、3.4-6.2倍及1.4-2.5倍,而链霉菌所占比例为51.6%,在海拔较高的3个油菜田土壤中,链霉菌所占比例高达60.6%-75.0%,高海拔土壤中以腐殖酸为碳源能源的链霉菌数量约为低海拔土壤的2倍。②在91株分离自青海高寒地区油菜田土壤放线菌中,有58.2%的放线菌对油菜3种病原菌有抗菌活性;在海拔大于2 600 m的3个供试地区,随着海拔降低,对3种病原菌有拮抗性的放线菌的比例从53.8%提高到70.8%,对胡萝卜软腐欧文氏菌有抗性的放线菌的比例从21.4%降低到5.9%。③从青海高寒地区油菜田土壤中分离的53株拮抗性放线菌中,对芸苔链格孢菌、核盘菌及胡萝卜软腐欧文氏菌有拮抗性的放线菌分别占供试放线菌的59.3%,26.4%及13.2%,拮抗芸苔链格孢菌的放线菌比例最高。④青海高寒地区油菜田土壤中放线菌数量及拮抗性放线菌比例与土壤养分之间无规律性关系。⑤对核盘菌和芸苔链格孢菌有较强抑制作用的放线菌所占比例分别为14.3%和12.5%,尚未筛选到对胡萝卜软腐欧文氏菌有较强抑制作用的拮抗性放线菌;放线菌发酵滤液对核盘菌和芸苔链格孢菌的最高抑制率分别为51.7%和69.7%。【结论】青海高寒地区油菜田土壤中放线菌总量、拮抗性放线菌比例及对不同病原菌的抗性与土壤所处海拔高度有一定关系,与土壤养分之间无规律性关系,表明青海不同海拔高度油菜种植区的土壤微生态环境对3种油菜土传病害的潜在抗性不同。

青海沙珠玉人工植被系统土壤放线菌生态分布及拮抗性

为探索人工植被重建对土壤放线菌的影响,采用稀释平板法及琼脂块法对青海沙珠玉地区植被重建后沙土中放线菌的生态分布及拮抗性进行了研究.结果表明:随着高寒干旱沙地植被重建和覆盖度的提高:土壤放线菌数量显著增加,其中退耕还草地土壤中放线菌总数较沙地提高145.4%,小单孢菌数量约为沙地的6倍;拮抗性放线菌平均筛出率大幅度增加,退耕还草地土壤中拮抗性放线菌、天然草地土壤中抗细菌放线菌及林地土壤中抗病原真菌放线菌的平均筛出率约分别为沙地的2、3.2及1.5倍;地表植被盖度与土壤养分对放线菌数量以及拮抗性放线菌数量有很大影响,其中有机质、碱解氮含量以及鲜草产量与放线菌总数的相关性达到极显著水平(P<0.01),有机质含量、鲜草产量与拮抗性放线菌株数的相关性达到极显著水平(P<0.01).此外,植被盖度、土壤全氮、全磷、全钾、全盐以及速效钾含量与放线菌总数、链霉菌数、小单孢菌数的相关性也达到显著水平(P<0.05).

轮纹病菌拮抗性大豆根瘤内生菌的筛选、抗性和促生作用

从河南部分地区采集的大豆根瘤中分离276株内生细菌,采用平板对峙法进行初筛、复筛和内生菌发酵滤液抑菌活性测定,对拮抗性代表菌株进行大豆轮纹病菌菌丝抑制效果显微观察、菌体生理生化特性测试、16S rDNA测序、系统发育分析及抗盐碱性试验和接种试验。结果表明,17株初筛内生菌经复筛和发酵滤液抑菌活性测定,其中8株抑菌率达50%以上;受作用菌丝发生扭结、缠绕成环状,菌丝末端分枝增多、变细、透明,部分菌丝末端膨大、原生质浓缩、断裂,一些菌丝被内生菌形成生物薄膜包埋、逐渐消融。8株内生菌中5株（DD013、DD123、DD156、DD159、DD287）初步鉴定为芽孢杆菌属Bacillus,DD150为赖氨酸芽孢杆菌属Lysinibacillu、DD267为肠杆菌属Enterobacter,菌株DD303为苍白杆菌属Ochrobactrum。抗盐碱性生长曲线表明,菌株DD287对3%NaCl盐浓度具有一定抗性,在碱性环境（pH 8）下能正常生长,随pH（9～11）增大,菌体生长量受影响。部分拮抗性菌株对大豆生长有促进作用。筛选拮抗性菌株对丰富生物防治菌种资源具有重要意义。

36-1菌对植物病原真菌的拮抗性

平板共生培养测定表明,36-1菌对供试的8种植物病原真菌均有不同程度的拮抗性,其中含36-1菌活菌体液剂对玉米小斑病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎病菌和水稻恶苗病菌菌丝生长抑制率依次为80.22%、80.50%、77.75%、75.30%、61.38%;处理柑桔(脐橙)病果,对果面青、绿霉病斑扩展的抑制率为65.97%;批量处理柑桔(桃叶橙),室温贮存90天,好果率为78.44%,比对照高54.44%。盆栽防治棉花枯萎病结果表明,含36-1菌活菌体液剂和灭活菌体液剂分别比对照的病情指数降低20.73和24.24,病害减轻为54.80%和71.11%。

西瓜根际细菌JK-3的鉴定及其拮抗性的初步研究

JK-3菌株是从西瓜根际筛选得到的一种革兰氏阳性菌,大小为3.0～4.2μm×0.7～1.0μm,菌落呈淡黄色、圆形、隆起、无褶皱、边缘整齐。扫描电镜观察表明,该菌周生鞭毛,卵圆形芽孢,孢囊膨大。培养4d后菌落表面有较多粘性物质生成。通过16S rDNA测序、常规生理生化方法以及Biolog微生物自动鉴定系统的碳源测定等3种方法鉴定出该根际细菌为多粘类芽孢杆菌。平板对峙培养和孢子萌发试验表明,该菌株对多种植物病原真菌具有良好的拮抗作用并能产生抗生物质。

覆盖模式和小麦根系对土壤拮抗性放线菌分布的影响

采用常规分离培养和琼脂块拮抗性测定法,研究了西北旱作农业区不同覆盖模式和根系对小麦田土壤中拮抗性放线菌分布的影响.结果表明:①小麦田土壤拮抗性放线菌比率随覆盖模式而异.在SDSA培养基上以覆盖模式较高,常规对照最低,拮抗性放线菌比率由高到底顺序为垄沟(49.1%)>覆膜(41.5%)>覆草(37.5%)>常规(25.0%),垄沟、覆膜和覆草分别较对照提高96.4%、66.0%和50.0%.②小麦根系生长和分泌物对拮抗性放线菌比率有显著影响.在3种覆盖和常规对照条件下,拮抗性放线菌总数的比率、抗细菌和抗真菌的拮抗放线菌比率均表现为根区高于根外,其中覆膜模式下抗真菌放线菌的比率在根区土壤中约为根外的4倍.

抗菌微生物及拮抗性代谢产物的种类和应用

人类一直努力寻找有效的抗菌药物，自从上世纪30年代弗莱明发现青霉素以后，利用微生物防治病原微生物感染一直倍受关注。具有抗菌作用的微生物相关物质很多，包括某些微生物自身和一些微生物的拮抗性代谢产物。其来源和抗菌谱及抗菌效力各不相同，导致某些微生物物质在临床治疗上受到限制，目前，真正广泛使用于临床的抗菌微生物制剂主要是天然抗生素。但是，随着日益严峻的抗生素耐药性，人类急需发展其它抗感染药物，由于生物制剂对环境和人体的“环保”性能明显优于化学杀菌剂，

33个香菇栽培菌株的拮抗性测定及鉴定中的应用

本文选用３３个香菇菌株进行了拮抗性测定，同时比较了菌株间菌丝生长速度和ＣＭＣ酶活性变化。结果显示：不同的生态环境和栽培条件造成菌种的遗传差异。根据栽培地区不同这些菌种可分三大类。不同类菌株间桔抗性强，同一类中有些菌株与其余菌株间形成很明显的拮抗线，如０８７，２４１—４，７４０２，农①等，而有些菌株间拮抗线却很弱，如Ｗ０８，Ｗ０９，Ｗ１０等。说明这些菌株间遗传差异较小，遗传同源性较强。

黄河中上游半干旱区典型盐渍土中拮抗性放线菌筛选

对采自陕西、宁夏和内蒙等地典型盐渍土中放线菌组成及拮抗性进行了研究。结果表明:(1)该地区盐渍土中放线菌以链霉菌属为主,非链霉菌仅占9.27%,链霉菌属中以球孢类群,粉红孢类群,灰褐类群,黄色类群为主,占到放线菌总数的55.62%。(2)供试的706株放线菌中有拮抗活性的占到76.44%,但广谱性拮抗菌株较少;对细菌拮抗能力较真菌强;拮抗性放线菌以粉红孢类群、灰褐类群和球孢类群为优势类群;(3)发酵滤液拮抗性试验筛选出4株能产生较强抑菌活性物质的菌株,其中3株都是粉红孢类群。

覆盖及玉米根系对半干旱黄土区土壤拮抗性放线菌生态分布的影响

采用常规分离培养和琼脂块拮抗性测定法,研究了西北旱作农业区不同覆盖条件和根系对玉米田土壤中拮抗性放线菌分布的影响。结果表明:(1)玉米田土壤拮抗性放线菌比率随覆盖方式而异。在GA培养基上,休闲和覆膜模式高于常规对照,覆草和补灌条件下较低;在SDSA培养基上,覆盖(覆膜和覆草)和休闲模式高于常规对照。(2)玉米根系生长和分泌物对拮抗性放线菌比率有显著影响。覆膜处理中,玉米根系可使抗细菌、抗真菌拮抗菌比率较根外分别降低59.7%、45.2%;覆草处理中,玉米根系可使抗细菌及抗真菌拮抗菌比率较根外分别提高84.5%及106.4%;种植玉米后,拮抗菌比率低于休闲土壤。(3)多重比较结果显示,玉米根系对拮抗性放线菌比率的影响大于栽培模式的影响。

神农架林区和自然保护区链霉菌拮抗性的研究(Ⅱ)

用琼脂移块法对由神农架林区和自然保护区土壤中分离并鉴定了的３６种５７株链霉菌进行拮抗性试验，结果显示３６种５５株链霉菌对细菌或真菌有拮抗性，或对细菌和真菌都有拮抗性，并发现这些链霉菌以较高的百分率拮抗丝状真菌和酵母菌。

连翘中具有药物活性成分内生菌的筛选及其拮抗特性的研究

采用组织分离法从连翘枝条中筛选出13株内生菌,其中有7株内生真菌,6株内生细菌。分别以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为指示菌株,采用平板对峙法对分离出的13株内生菌的抗菌活性进行筛选。结果表明:13株菌种中有10个菌株对1种供试菌具有抑菌活性。其中L-07-01、L-07-09、L-07-12、L-07-13的拮抗效果明显,L-07-09对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌效果,测量其抑菌圈直径为10 mm。L-07-12对大肠杆菌具有较强抑菌效果,测量其抑菌圈直径为10 mm。对拮抗效果较强的菌株进行液体发酵培养后采用双层打孔法,测定其抑菌效果后证明L-07-13对金黄色葡萄球菌有极强的抑制效果。对拮抗后的指示菌进一步镜检后,发现菌体有明显的溶菌、空洞、畸形等现象。连翘内生菌可以产生丰富的具有药物活性的次生代谢产物,可作为新型药物的筛选源。

4个真姬菇菌株拮抗试验及培养特性研究

测定了4个真姬菇菌株间的拮抗性及生长长势,结果表明:4个菌株无亲缘关系,同时测定了4个真姬菇的菌丝生长速度,可看出,菌株1生长速度最快,菌株4最慢,为栽培提供了依据。